RNA干扰钙敏感受体CaSR的Caco-2稳定细胞株的建立和鉴定

目的:运用RNA干扰技术,建立稳定表达siCaSR的Caco-2细胞株。方法:构建靶向CaSR基因的RNA干扰表达载体,采用脂质体转染至Caco-2细胞株上。通过嘌呤霉素培养筛选稳定转染siCaSR的Caco-2细胞株。荧光显微镜下观察细胞的荧光表达情况,通过定量PCR和Western blot方法检测siCaSR细胞CaSR mRNA和蛋白的表达水平。结果:筛选siCaSR稳定表达细胞株嘌呤霉素筛选浓度为1μg/mL,所构建的质粒载体能显著抑制Caco-2细胞中CaSR的表达。转染siRNA后80%的Caco-2细胞发出绿色荧光。与对照组相比,siRNA-CaSR载体组中CaSR mRNA及蛋白表达水平明显下降。结论:成功构建CaSR基因干扰的稳定表达Caco-2细胞株,为后续研究CaSR的生物学功能提供工具细胞。