长链非编码RNA NR_033474对C3H10T1/2间质干细胞增殖的影响

背景:最近研究发现,长链非编码RNA可调控干细胞的增殖与分化,但关于长链非编码RNA NR_033474在干细胞增殖及细胞周期调控中的作用,目前尚不清楚。目的:通过在C3H10T1/2间质干细胞中过表达NR_033474,观察NR_033474对C3H10T1/2细胞增殖和细胞周期的影响,进一步分析NR_033474影响间质干细胞C3H10T1/2增殖的可能作用机制。方法:通过慢病毒载体在C3H10T1/2细胞中过表达NR_033474,应用Real-time PCR检测其表达效率,以转染空载体慢病毒的C3H10T1/2细胞为对照,利用细胞计数法绘制生长曲线,观察过表达NR_033474后C3H10T1/2细胞的生长变化;PI染色流式细胞仪检测细胞周期改变;通过Western蛋白印迹法检测过表达NR_033474后,细胞周期相关蛋白(P53、Cyclin B1、CDK1、Cyclin D1)的表达。结果与结论:(1)与对照组比较,感染NR_033474慢病毒后的C3H10T1/2间质干细胞NR_033474表达上调约100倍(P<0.01);(2)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2细胞增殖能力明显降低(P<0.05);(3)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2间质干细胞阻滞于G2/M期;(4)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2间质干细胞Cyclin B1和CDK1蛋白表达下调,P53、Cyclin D1蛋白水平无明显变化;(5)结果表明,NR_033474可能通过下调Cyclin B1及CDK1蛋白表达水平,抑制C3H10T1/2间质干细胞的增殖生长能力,使细胞阻滞于G_2/M期。

外泌体在乳腺癌中耐药机制的研究进展

自20世纪70年代末以来,全球乳腺癌的发病率一直呈上升趋势。近年来,乳腺癌的发病年龄不断趋于年轻化,我国乳腺癌发病率的增长速度已经超过发达国家增长速度。据国家癌症中心和卫生部疾病预防控制局2012年公布的乳腺癌发病数据显示:全国肿瘤登记地区乳腺癌的发病率位居女性恶性肿瘤的第一位。鉴于此,早发现、早诊断与早治疗成为了预防和治疗乳腺癌的关键。随着对乳腺癌生物学行为研究的不断深入,目前已经形成了手术、放疗、化疗、内分泌治疗、生物靶向治疗以及多种辅助治疗为一体的传统治疗方式。化疗作为肿瘤治疗的主要手段,已经广泛应用于肿瘤的临床治疗;但是随着药物治疗的不断进行,肿瘤细胞耐药性是肿瘤治疗中亟需解决的问题。肿瘤细胞耐药性复杂多样,基因的突变、抗凋亡机制的产生、肿瘤细胞微环境的改变均可诱发肿瘤细胞产生耐药。

单链退火修复及其在疾病治疗和基因编辑中的作用

DNA双链断裂(double strand breaks,DSBs)对细胞生存是致命的。细胞内经典非同源末端连接(classical non-homologous end joining,C-NHEJ)和选择性非同源末端连接(alternative non-homologous end joining,A-NHEJ)、重组修复(homology-directed repair,HDR)、单链退火修复(single-strand annealing,SSA)等通路可竞争性修复DNA双链断裂损伤。其中,SSA途径不使用同源染色体或姐妹染色单体,仅依赖于重复序列彼此退火配对,并涉及遗传信息的丢失,是容易出错的修复过程,具有诱变性。相比其他修复途径,在细胞周期S和G_2期中,末端切除暴露出更长的同源重复序列(>20 bp),有利于细胞选择SSA途径进行修复。在一些SSA活性升高的同源重组(homologous recombination,HR)缺陷癌症中,癌症细胞可利用SSA途径获得耐药性,也预示着疾病风险的提高。因此,靶向SSA途径的抑制剂具有抑制癌症进展,以及逆转肿瘤细胞对聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)抑制剂耐药的作用,是一种新型的治疗策略,可能成为特定同源重组缺陷癌症风险评估的有力工具。检测SSA活性将有助于更好区分癌症的发生和进展。同时随着基因编辑技术的发展,基于SSA途径的荧光报告基因方法,用于检测规律成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR-Cas9)系统中引导RNA(gRNA)的特异性和裂解活性被证明是有效、可靠的策略,同时结合CRISPR-Cas9靶向和SSA诱导的DNA编辑,可以特定模式表达多个gRNA并实现多种细胞类型特异性操作和组合遗传靶向。尽管对SSA途径的研究与基于SSA途径的技术应用已取得不错的进展,但仍有许多问题有待阐明。