长链非编码RNA NR_033474对C3H10T1/2间质干细胞增殖的影响

背景:最近研究发现,长链非编码RNA可调控干细胞的增殖与分化,但关于长链非编码RNA NR_033474在干细胞增殖及细胞周期调控中的作用,目前尚不清楚。目的:通过在C3H10T1/2间质干细胞中过表达NR_033474,观察NR_033474对C3H10T1/2细胞增殖和细胞周期的影响,进一步分析NR_033474影响间质干细胞C3H10T1/2增殖的可能作用机制。方法:通过慢病毒载体在C3H10T1/2细胞中过表达NR_033474,应用Real-time PCR检测其表达效率,以转染空载体慢病毒的C3H10T1/2细胞为对照,利用细胞计数法绘制生长曲线,观察过表达NR_033474后C3H10T1/2细胞的生长变化;PI染色流式细胞仪检测细胞周期改变;通过Western蛋白印迹法检测过表达NR_033474后,细胞周期相关蛋白(P53、Cyclin B1、CDK1、Cyclin D1)的表达。结果与结论:(1)与对照组比较,感染NR_033474慢病毒后的C3H10T1/2间质干细胞NR_033474表达上调约100倍(P<0.01);(2)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2细胞增殖能力明显降低(P<0.05);(3)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2间质干细胞阻滞于G2/M期;(4)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2间质干细胞Cyclin B1和CDK1蛋白表达下调,P53、Cyclin D1蛋白水平无明显变化;(5)结果表明,NR_033474可能通过下调Cyclin B1及CDK1蛋白表达水平,抑制C3H10T1/2间质干细胞的增殖生长能力,使细胞阻滞于G_2/M期。

单链退火修复及其在疾病治疗和基因编辑中的作用

DNA双链断裂(double strand breaks,DSBs)对细胞生存是致命的。细胞内经典非同源末端连接(classical non-homologous end joining,C-NHEJ)和选择性非同源末端连接(alternative non-homologous end joining,A-NHEJ)、重组修复(homology-directed repair,HDR)、单链退火修复(single-strand annealing,SSA)等通路可竞争性修复DNA双链断裂损伤。其中,SSA途径不使用同源染色体或姐妹染色单体,仅依赖于重复序列彼此退火配对,并涉及遗传信息的丢失,是容易出错的修复过程,具有诱变性。相比其他修复途径,在细胞周期S和G_2期中,末端切除暴露出更长的同源重复序列(>20 bp),有利于细胞选择SSA途径进行修复。在一些SSA活性升高的同源重组(homologous recombination,HR)缺陷癌症中,癌症细胞可利用SSA途径获得耐药性,也预示着疾病风险的提高。因此,靶向SSA途径的抑制剂具有抑制癌症进展,以及逆转肿瘤细胞对聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)抑制剂耐药的作用,是一种新型的治疗策略,可能成为特定同源重组缺陷癌症风险评估的有力工具。检测SSA活性将有助于更好区分癌症的发生和进展。同时随着基因编辑技术的发展,基于SSA途径的荧光报告基因方法,用于检测规律成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR-Cas9)系统中引导RNA(gRNA)的特异性和裂解活性被证明是有效、可靠的策略,同时结合CRISPR-Cas9靶向和SSA诱导的DNA编辑,可以特定模式表达多个gRNA并实现多种细胞类型特异性操作和组合遗传靶向。尽管对SSA途径的研究与基于SSA途径的技术应用已取得不错的进展,但仍有许多问题有待阐明。

厄贝沙坦对肾缺血再灌注损伤小鼠氧化应激的影响

目的探讨厄贝沙坦对肾缺血再灌注损伤(RIRI)模型小鼠肾脏的保护作用及可能机制。方法40只C57BL/6小鼠随机分为4组,即假手术组、RIRI模型组、厄贝沙坦50mg/kg组和厄贝沙坦100mg/kg组,后3组均建立RIRI小鼠模型,于术前24h灌胃给药,连续1周。再灌24h后处死各组小鼠,收集小鼠血清,分别检测各组小鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和丙二醛(MDA)含量;光镜下观察小鼠肾脏病理变化;检测肾皮质MDA含量以及铜,锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力;Westernblot法检测肾皮质中Cu,Zn-SOD和CAT蛋白的表达。结果与假手术组比较,RIRI模型组小鼠血清Scr、BUN和MDA含量均明显升高(P<0.01),肾脏出现病理性变化,肾小管上皮细胞大量变性、坏死,炎性细胞浸润;肾皮质中MDA含量明显升高(P<0.01),Cu,Zn-SOD和CAT活力均明显下降(P<0.01);肾皮质中Cu,Zn-SOD和CAT蛋白表达均明显降低(P<0.01)。厄贝沙坦预处理能够明显改善RIRI模型组各指标(P<0.05),表现为血清Scr、BUN和MDA含量及肾皮质MDA含量降低(P<0.05),肾皮质中Cu,Zn-SOD和CAT活力,Cu,Zn-SOD和CAT蛋白表达升高(P<0.05)。结论厄贝沙坦预处理能减轻小鼠RIRI损伤,其机制可能与抗氧化应激损伤有关。

柚皮苷抑制长春新碱诱导的神经病理性疼痛

目的探讨柚皮苷对长春新碱诱导的神经病理性疼痛的影响及其作用机制。方法将雄性C57BL/6小鼠24只随机分成4组(n=6),即对照组(Control)、模型组(VCR)、低剂量柚皮苷组(VCR+Nar_低)及高剂量柚皮苷组(VCR+Nar_高)。利用长春新碱诱导的神经病理性疼痛小鼠模型,腹腔注射不同剂量的柚皮苷,通过行为学实验测试机械性缩足反射阈值的变化,生化检测氧化应激相关指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的表达,ELISA试剂盒检测炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达变化。结果与Control组相比,VCR组机械性缩足反射阈值显著缩短(P<0.01)。与VCR组比较,VCR+Nar_低、VCR+Nar_高组机械性缩足反射阈值显著延长(P<0.01),且以VCR+Nar_高组延长更为显著(P<0.01)。与Control组相比,VCR组MDA、TNF-α与MCP-1表达升高(P<0.01),SOD、GSH-Px值明显下降(P<0.01)。与VCR相比,VCR+Nar_低组、VCR+Nar_高组小鼠MDA、TNF-α与MCP-1表达下降(P<0.01),SOD、GSH-Px表达明显上调(P<0.01),且呈剂量依赖效应。结论柚皮苷呈剂量依赖性地抑制长春新碱诱导的神经病理性疼痛(CNP)的形成,且其呈剂量依赖性地改善CNP小鼠高氧化应激状态,并降低CNP小鼠TNF-α和MCP-1的表达水平,其作用机制可能与其抗氧化应激、抑制炎症反应有关。

羟基酪醇对小鼠抑郁样行为的改善作用及机制研究

目的研究羟基酪醇对细菌脂多糖诱导的小鼠抑郁样行为的改善作用及机制。方法采用细菌脂多糖建立小鼠抑郁模型,通过糖水偏好、悬尾和强迫游泳等行为学实验观察50mg/kg、100mg/kg羟基酪醇干预对脂多糖诱导的小鼠抑郁样行为的作用,应用ELISA法检测海马组织TNF-α的含量,Western blot法测定海马区BDNF的表达,免疫荧光测定海马齿状回(dentate gyrus,DG)小胶质细胞标志蛋白Iba-1的表达。结果羟基酪醇干预能明显改善小鼠抑郁样行为,显著上调海马BDNF(P<0.01),下调海马TNF-α的表达(P<0.05),下调海马区Iba-1表达(P<0.05)。结论羟基酪醇可通过上调小鼠海马区BDNF表达、抑制海马区炎症反应改善细菌脂多糖引起的小鼠抑郁样行为.