市售化橘红总黄酮含量测定研究

目的:测定广州地区流通领域市售化橘红药材与饮片中总黄酮的含量,为化橘红商品药材质量现状调查提供简便依据。方法:以柚皮苷为对照品,采用紫外分光光度法在283 nm处测定30批化橘红样品中总黄酮质量分数。结果:以甲醇为提取溶剂,超声40 min制备供试品溶液,紫外检测得到的30批样品总黄酮质量分数差异较大。结论:收集的30批样品总黄酮含量检测结果证实了市面流通化橘红商品药材存在质量参差不齐的问题,以简单的质量评价方法为市售化橘红商品药材质量调查提供一定参考依据。

酸枣仁汤治疗围绝经期失眠症网络药理学机制探讨

目的:运用网络药理学对酸枣仁汤治疗围绝经期失眠症的机制进行探讨。方法:通过TCMSP数据库获得酸枣仁汤有效成分和靶点,借助GeneCards、disGeNET和TTD数据库获得围绝经期失眠症靶点,利用Venny图得到两者的交集靶点后进行中药-活性成分-有效靶点网络和PPI网络构建,GO和KEGG富集分析,采用Discovery Studio 2016进行分子对接验证。结果:经过筛选得到酸枣仁有效成分116种,237个靶点数,203个疾病靶点,38个交集靶点,活性成分主要为槲皮素、山奈酚、芒柄花素、柚皮素、豆甾醇,核心靶点为IL-6、TNF、IL-1β、ESR1、PPARG。涉及BP265个条目、CC19个条目、MF46个条目,KEGG生物通路80条。分子对接结果验证了活性成分和核心靶点之间能自发结合,且相互作用较强。结论:通过网络药理学筛选出活性成分和核心靶点,为开展基础研究深入探讨酸枣仁汤治疗围绝经期失眠症提供参考。

超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法检测全血中常见安眠镇静类药物

建立了超高效液相色谱-三重四极杆复合线性离子阱质谱快速筛查确证全血中49种安眠镇静类药物.样品前处理采用固相支撑液液萃取法.色谱条件:色谱柱为Waters C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm),以5 mmol/L乙酸铵-(体积分数为0.1%)甲酸水溶液(A),甲醇(B)为流动相,进行梯度洗脱.在0.1~200.0 ng/mL内,49种常见药物展现出良好的线性关系(R 2>0.99),最高检出限为0.1 ng/mL;最高定量限为0.5 ng/mL;全血基质中50、100、200 ng/mL 3个加标水平下回收率为65.9%~109.0%,日内精密度为2.0%~17.6%、日间精密度为2.0%~16.3%.该方法可应用于生物检材中49种常见安眠镇静物质的检测.

浅谈加强高校教师思政建设的初探

学校是培养学生德、智、体、美、劳发展的发源地,同时也是培育社会主义建设者、接班人的摇篮。教师是人类知识的传承者和科技的创新者,肩负着塑造灵魂、塑造新人的时代重任,思政建设对社会、学校、学生及自身可持续发展有着重大的影响。因此,办好人民满意的教育,加强教师思政建设的任务刻不容缓。

以临床执业医师实践技能考试为导向的毕业技能考核研究

目的以临床执业医师实践技能考试为导向,探索符合临床医学院实际情况的毕业技能考核新模式。方法参考国家临床执业医师实践技能考试大纲,采用客观结构化临床考试方法,对临床医学生毕业技能考核模式进行改革探索,并且收集广东医科大学第二临床医学院2012~2016级2018名临床医学生的毕业技能考核成绩进行分析。结果2018名临床医学生的毕业技能考核成绩为(79.38±4.64)分,其中最高分为92.1分,最低分为61.3分。2014~2016级临床医学生毕业技能考核成绩分析结果显示,90分以上人数减少,70分以下人数未见增加,考核成绩总体呈正态分布。结论以临床执业医师实践技能考试为导向的毕业技能考核模式具有较好的教学效果。

基于分子动力学模拟研究温度对乳酸脱氢酶活性的影响

乳酸脱氢酶是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一,它能够催化丙酮酸形成乳酸,在食品发酵工业中具有很高的应用价值,但该酶易受高温影响,导致乳酸制品产量下降。为了研究不同温度对乳酸脱氢酶的构象及活性的影响,采用分子动力学模拟的方法,针对4种不同温度条件下(37、55、70和85℃)的乳酸脱氢酶分别进行了80 ns的计算模拟,分析了构象变化及酶活性中心的差异。研究发现,在37和55℃条件下,乳酸脱氢酶比较稳定;当温度升高至70和85℃,乳酸脱氢酶的均方根误差、均方根波动、回旋半径值和溶剂可及表面积显著增加,而85℃时的蛋白二级结构已发生较大改变,这表明高温会导致蛋白质构象不稳定。对比37和85℃条件下该酶的底物丙酮酸的结合能力,发现高温会导致丙酮酸的结合位点残基之间的距离增大,进而破坏底物分子结合的微环境。因此,乳酸脱氢酶在温度超过70℃时发生变性,并随着温度的升高变性程度增加,进而导致酶活性丧失,不利于其在食品发酵等方面的应用。本研究在原子水平上分析了4种不同温度对乳酸脱氢酶的影响,揭示了其酶活性及构象变化的关键信息,为乳酸制品在发酵过程中选择合适温度提供了理论支撑。

芋螺毒素Lt14a的质量控制研究

目的建立芋螺毒素Lt14a原料药的质量控制方法。方法采用高效液相色谱法检测芋螺毒素Lt14a的含量和有关物质。结果研究了芋螺毒素Lt14a的多项质量指标,初步建立了质量控制方法,包括性状、溶解性、水分、pH值、比旋度、折光率、有关物质和含量测定。结论所建立的芋螺毒素Lt14a的质量控制方法重复性好,结果准确、可靠。

重组PACAP13神经肽对小鼠胸腺功能的影响

目的 在细胞、器官及个体水平探究垂体腺苷酸环化酶激活肽重组13肽(PACAP13肽)对胸腺功能的影响及其机制。方法 通过体外原代培养胸腺上皮细胞(TEC)及骨髓间充质干细胞(MSC),设置淋巴细胞组、淋巴细胞+TEC组、淋巴细胞+MSC组、淋巴细胞+TEC+MSC组,检测PACAP13肽处理后各组淋巴细胞的增殖情况,检测培养液中细胞因子白细胞介素(IL)-1、IL-2、IL-6和转化生长因子(TGF)的含量;上述各组细胞加入地塞米松(Dex)诱导细胞凋亡,AnnexinⅤ-FITC/PI流式双染检测PACAP13肽对各组淋巴细胞凋亡的情况。设置胸腺组、胸腺+TEC组、胸腺+MSC组、胸腺+TEC+MSC组,并添加PACAP13肽,实时定量PCR(qPCR)检测胸腺信号结合T细胞受体删除环(sjTREC)的含量。注射降植烷诱导狼疮模型小鼠,随机分为模型组和PACAP13组,模型组注射0.9%生理盐水,PACAP13组注射PACAP13肽,qPCR检测胸腺、脾脏sjTREC含量;ELISA检测血清狼疮相关自身抗体水平及逆转录PCR(qRT-PCR)检测胸腺相关mRNA表达水平。结果 与淋巴细胞组相比,淋巴细胞+TEC组、淋巴细胞+MSC组、淋巴细胞+TEC+MSC组胸腺淋巴细胞增殖率增加,凋亡率下降(P<0.05);与对照组相比,PACAP13组淋巴细胞增殖率增加,凋亡率下降,细胞培养液中细胞因子IL-1、IL-2、IL-6和TGF增加(P<0.05)。与胸腺组相比,胸腺+TEC组、胸腺+MSC组、胸腺+TEC+MSC组胸腺sjTREC含量增加;与对照组相比,PACAP13肽组胸腺sjTREC含量增加。与模型组相比,PACAP13组狼疮小鼠胸腺和脾脏中sjTREC的含量增加(P<0.05),胸腺中Aire、Fezf2、Foxp3、TGF-βmRNA表达水平增加(P<0.01),胸腺CXCL13mRNA表达水平下降(P<0.01),血清自身抗体抗dsDNA抗体、抗RNP/sm抗体、ANA水平下降(P<0.05)。结论 PACAP13肽能促进胸腺淋巴细胞增殖和抗凋亡,在体外及体内均具有增强胸腺淋巴细胞的生成和输出能力以及降低狼疮小鼠自身抗体水平的免疫调节作用,其作用机制与调节胸腺细胞因子分泌和基因转录水平有关。

分子动力学模拟探索乳克鲁维酵母来源的β-半乳糖苷酶热变性条件

为了研究乳克鲁维酵母中β-半乳糖苷酶可能的熔解温度,采用分子动力学模拟的方法,分别对4种不同温度条件下(35、50、65、80℃)的β-半乳糖苷酶进行了50 ns的计算模拟,分析了酶的构象变化以及酶活性中心的差异。研究在原子水平揭示了β-半乳糖苷酶的温度耐受等关键信息:35℃为最适酶活温度,该温度下的β-半乳糖苷酶的整体构象最稳定;该酶在50℃时的原子波动性显著增加,表明此温度可能趋近熔解温度临界值;蛋白在大于65℃条件下丧失柔性,说明蛋白已经变性;进一步的构象分析发现80℃高温会破坏β-D-半乳吡喃糖(GAL)结合位点微环境。

双层48片装塑料载玻片晾片板结构的设计

载玻片是用于镜下观察组织细胞结构必备的装置，通过将组织细胞附着于载玻片用于后续的观察、研究及诊断。制作好的组织细胞玻片常需要晾片，晾片板是为了便于镜下观察、长久保存置有组织标本载玻片的装置，被广泛地应用于医院、医学院、生物检测中心、化学、农业、军事、动物研究所、实验室等机构。

分子动力学模拟揭示MTHFR的温度耐受性机制

为了研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的温度耐受性,我们采用分子动力学模拟的方法,构建了四种模拟体系(37、45、55和65℃)并对MTHFR分别进行了100ns的计算,分析了酶活性中心的差异及其引起的构象变化。研究发现,在37和45℃条件下,MTHFR整体构象比较稳定;大于55℃时,蛋白的三维结构可能丧失柔性,这表明蛋白质可能已达到熔解温度,通过构象分析发现高温会破坏FAD结合位点微环境。本研究在原子水平揭示了MTHFR的温度耐受等关键信息。

肺炎链球菌R6中Spr0934蛋白与铁色素相互作用机制的研究

目的探究肺炎链球菌R6中未知蛋白Spr0934与其潜在配体铁色素相互作用的机制。方法基于Uniprot数据库对目标蛋白Spr0934进行同源序列比对,筛选出与其同源性较高的候选蛋白;利用Spr0934蛋白结构与铁色素配体进行分子对接;分子动力学模拟技术检测铁色素被靶标蛋白结合之后引起的结构变化,并分析二者的结合机理。结果Spr0934与多个细菌蛋白具有较高同源性,其中铁色素结合蛋白4HMQ的活性中心与该蛋白相似性最高;分子对接的结果显示,铁色素与Spr0934的结合能量稳定在-6.27 kcal/mol,表明铁色素为潜在的配体分子;分子动力学模拟的结果证实,与apoSpr0934相比,该配体分子能让蛋白结构趋于稳定,蛋白整体波动性、溶剂可及表面积、氨基酸残基的灵活性均降低,二级结构各组分的比例更为合理。结论在Spr0934与铁色素可能的相互作用机制中,直接相互作用的位点为Asn-83、Tyr-133、Tyr-225和Arg-231,而Ala-82、Tyr-84、Trp-158和Phe-255起辅助作用。

UPLC-MS/MS分析全血与尿液中氯胺酮、氟胺酮、溴胺酮残留

目的建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定人的血液、尿液样品中氯胺酮、氟胺酮、溴胺酮残留的方法。方法空白血、空白尿样品中加入氯胺酮、氟胺酮和溴胺酮标准溶液,使用乙腈沉淀蛋白法作为前处理方式,采用UPLC-MS/MS检测。质谱检测采用正离子扫描,多反应离子监测模式(MRM)。定性定量均以氯胺酮、氟胺酮、溴胺酮母离子和子离子进行分析。结果在0.001、0.050、0.500 mg/L三个添加水平下,氯胺酮、氟胺酮、溴胺酮在空白血、空白尿液样品中的回收率在71.02%~133.68%之间,相对标准偏差在0.28%~13.19%之间,定量限均为0.001 mg/L,检出限均为0.0005 mg/L。结论该方法灵敏度高、分析速度快、操作简便。

跑步运动训练对体内微量元素和T淋巴细胞亚群的影响

目的:研究跑步运动训练前、后对体内微量元素和T淋巴细胞亚群变化的影响。方法:分别收集30名大一学生跑步运动训练前、后的外周血样本,然后进行血清微量元素测定和免疫荧光抗体标记,流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群的百分率。结果:血清微量元素,实验组Zn、Fe、Se含量明显低于对照组,而Cu、Mg含量,实验组与对照组相比无明显差异;T淋巴细胞亚群,实验组与对照组比较,实验组CD4^(+)细胞数明显减少,CD8^(+)细胞数明显增多,CD4^(+)/CD8^(+)比值下降,CD3^(+)细胞数均无显著性差异。结论:跑步运动训练对体内微量元素和T淋巴细胞亚群的变化产生一定的影响。

PCK1与TSX抑制剂相互作用的分子对接及分子动力学模拟研究

磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)是调节糖异生途径的限速酶,其活性中心能够催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)并消耗1分子GTP。1-烯丙基-3-丁基-8-(N-乙酰基-4-氨基苄基)-黄嘌呤(TSX抑制剂)是一种黄嘌呤类化合物,属于GTP类似物。本研究通过分子对接发现,GTP或TSX抑制剂具有共同的潜在结合位点。分子动力学模拟的结果表明,与apo-PCK1相比,GTP-PCK1和TSX-PCK1具有更低的均方根偏差(RMSD)与回旋半径(Rg),说明结合配体分子能促使PCK1整体构象更加稳定。这些结果表明TSX可能竞争GTP的结合位点,从而达到抑制PCK1催化功能的作用。本研究从原子构象水平揭示了TSX抑制剂与PCK1相互作用的机制,为治疗II型糖尿病等衰老相关疾病提供理论基础。

磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)与AcCoA的分子动力学模拟研究

PCK1是糖异生途径的第一个限速酶,能够消耗GTP并催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸(PEP),而PEP是多种反应的前体物质。本研究通过分子对接及分子动力学模拟的手段发现,乙酰辅酶A(AcCoA)能被该酶的活性中心结合,结合位点为Gly289、Lys342、Arg436、Trp516、Phe530和Asn533。通过分子动力学模拟证实,AcCoA-PCK1比apo-PCK1具有更低的RMSD、RMSF、Rg、SASA值,说明结合配体分子将促使蛋白整体构象更加稳定。这些结果表明,AcCoA与GTP的结合位点高度吻合,暗示在某种生理条件下两种底物分子可能存在竞争关系,从而使蛋白发生乙酰化修饰或者达到抑制PCK1催化功能的作用。总之,本研究从原子水平探究了AcCoA与PCK1潜在的相互作用机制。