慢性阻塞性肺疾病合并肺栓塞的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)简称慢阻肺,COPD急性加重期(AE-COPD)的肺栓塞(PE)患者越来越多,而临床上因为PE与AE-COPD的症状相似,往往与是否合并发生PE难以鉴别,容易发生漏诊、误诊,严重影响患者的治疗和预后,对社会造成了巨大的经济负担,因此正确认识COPD合并PE的特点并能早期准确做出诊断具有重要临床意义,本文就COPD合并PE的流行病学、发病潜在机制、危险因素、临床表现及体征、风险评估、生物标志物、诊断及治疗管理、预后等方面进行阐述。

4-氨基吡啶抑制肺癌细胞SPCA1及PC9增殖及其分子机理的研究

目的探讨4-氨基吡啶(4-AP)对肺癌细胞增殖的影响及分子机制。方法浓度为0、0.195、0.39、0.78、1.56、3.125、6.25、12.5、25 mmol/L的4-AP分别处理SPCA1和PC9细胞48 h,MTT法测定4-AP对肺癌细胞的抑制率及IC50。浓度为0、4.7或0、6.25 mmol/L的4-AP分别处理SPCA1和PC9细胞0、24、48、72 h或14 d或48 h,MTT法测定肺癌细胞的增殖率或平板克隆形成实验测定肺癌细胞的增殖或流式细胞仪检测细胞周期。浓度为0、3、4.7或0、3.125、6.25 mmol/L的4-AP分别处理SPCA1和PC9细胞48 h,利用Western blot检测PI3K/AKT信号通路和细胞周期相关蛋白。结果 MTT结果显示,4-AP浓度越高,对肺癌细胞增殖的抑制越强,SPCA1和PC9细胞的IC50分别为4.7 mmol/L和6.25 mmol/L。MTT法显示,4-AP组细胞生长速度减慢(P<0.01)。平板克隆结果显示,与对照组相比,4-AP组细胞平板克隆小且数量少(P<0.05)。流式细胞仪检测细胞周期显示,4-AP组细胞G1期比例增多(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组相比,4-AP组细胞中,P21表达上调,p-PI3K(Tyr458)、p-AKT(Ser473)、CCND1和CDK4表达下调,PI3K和AKT表达不变。结论 4-AP抑制肺癌细胞生长,且4-AP可能通过调控PI3K/AKT信号通路及下游细胞周期相关蛋白的表达。

应用基因芯片技术筛选曲古菌素A诱导肺腺癌耐药细胞株A549/CDDP差异表达的凋亡基因

目的应用基因芯片技术筛选曲古菌素A(TSA)处理顺铂耐药肺癌细胞株A549/CDDP后的凋亡相关基因的表达变化,筛选TSA治疗顺铂耐药肺癌的靶分子。方法 TSA处理A549/CDDP细胞24h,以未经TSA处理的A549/CDDP细胞作为对照组,提取两组细胞总RNA并反转录为c DNA,采用Nimble Gen全基因组表达芯片检测基因表达情况,以Nimble Scan 2.5软件结合GO分析比较TSA处理组与对照组基因表达谱的变化,从差异表达基因中筛选出与凋亡和增殖相关的基因。结果与对照组相比,共筛选到TSA上调的凋亡相关基因85个以及下调的细胞增殖和生长相关基因43个。GO分析发现,这些基因的分子功能主要是调节细胞凋亡和细胞对化学刺激的抵抗作用,以及参与细胞生长、增殖、细胞生物质量维持等生物过程。TSA不仅激活了线粒体凋亡通路,而且激活了死亡受体相关凋亡通路,下调了与细胞耐药相关的基因BAG3和ABCC2。结论 TSA改变了A549/CDDP细胞中凋亡和增殖基因的表达,这些基因可能在TSA治疗顺铂耐药肺癌中发挥了重要作用。

4-氨基吡啶抑制肺癌SPCA1及PC9细胞侵袭转移

目的:探讨4-氨基吡啶对肺癌细胞侵袭转移的影响及其分子机制。方法:采用浓度为0、3、4.7或0、3.125、6.25 mmol/L的4-氨基吡啶分别处理SPCA1和PC9细胞48 h,Transwell实验观察肺癌细胞迁移侵袭能力,蛋白质印迹法检测细胞侵袭转移相关的上皮间质转化标志蛋白N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白以及Snail的表达。结果:Transwell迁移实验和侵袭实验结果显示,4-氨基吡啶组细胞穿膜数明显减少(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示,4-氨基吡啶组细胞E-钙黏蛋白表达上调,N-钙黏蛋白和Snail表达下调。结论:4-氨基吡啶通过调控上皮间质转化蛋白的表达抑制肺癌细胞SPCA1及PC9侵袭转移。

白藜芦醇在PM2.5诱导的气道炎症中的作用

目的探讨白藜芦醇(Res)对PM2.5诱导气道上皮细胞IL-8表达的影响。方法先用不同浓度PM2.5刺激人气道上皮细胞株16HBE,再将16HBE细胞分为PM2.5组(75 mg/L)、Res+PM2.5组(100μmol/L Res+75 mg/L PM2.5)、空白对照组,分别用荧光定量PCR、ELISA检测表达。结果IL-8 PM2.5呈浓度和时间依赖性刺激16HBE细胞表达IL-8,Res+PM2.5组中IL-8表达明显低于PM2.5组(P<0.05)Res。结论可能通过抑制气道上皮细胞表达IL-8,进而减轻PM2.5诱导的气道炎症反应。

低浓度范围内PM2.5通过激活细胞自噬途径抑制细胞凋亡

目的:以人脐静脉内皮细胞为材料,研究不同浓度的PM2.5对其影响及相应的保护机制。方法:采用MTT法及TUNEL染色法检测不同浓度PM2.5处理后的细胞活力和凋亡程度,并用蛋白质免疫印迹检测自噬相关因子的表达。结果:PM2.5处理后细胞生长抑制率呈剂量依赖性上升,TUNEL染色法检测到细胞凋亡率在PM2.5浓度为50μg/mL和100μg/mL无统计学意义,浓度为150μg/mL时凋亡率略有上升。进一步用Western blot检测自噬相关蛋白,发现PM2.5处理后,自噬相关因子被激活,凋亡相关蛋白受到抑制。结论:在150μg/mL PM2.5浓度范围内,PM2.5激活了细胞内自噬途径,抑制细胞凋亡。

AIF的K89琥珀酰化抗体制备及与AIF的互作蛋白研究

目的:本课题组前期发现凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)蛋白在非吸烟女性肺腺癌患者中存在第89位赖氨酸残基琥珀酰化修饰水平增高。本课题组拟制备识别AIF第89位赖氨酸残基琥珀酰化修饰的抗体,用于检测AIF在该位点琥珀酰化修饰。方法:利用在线数据库对AIF蛋白的理化性质、跨膜结构、信号肽、蛋白结构及琥珀酰化位点进行生物信息分析。根据AIF氨基酸序列合成包括89位赖氨酸残基(K89)位点的三条多肽,其中两条含AIF K89的多肽赖氨酸残基进行了琥珀酰化修饰。用三条合成的多肽偶联KLH,然后分别免疫家兔,制备特异识别AIF K89位琥珀酰化修饰的抗体。用ELISA、Dot blot、Western blotting和免疫组化对抗体效价和特异性进行检测。结合胶内酶解和高分辨生物质谱技术分析与AIF相互结合的蛋白。结果:生物信息学分析结果显示,AIF K89琥珀酰化修饰促使AIF 79~99氨基酸残基形成的α-螺旋结构发生变化:由一个较长的α-螺旋变成两个间隔短的较短的α-螺旋。合成的两条琥珀酰化修饰多肽和一条非琥珀酰化的多肽免疫家兔均成功获得相应的抗体;ELISA检测免疫血清抗体效价,分别是1∶486 k、1∶162 k和1∶18 k。制备的识别AIF K89琥珀酰化修饰的抗体识别AIF K89琥珀酰化修饰性多肽的效价是识别非琥珀酰化多肽的效价的27倍;抗体Dot blot检测,该抗体识别AIF K89琥珀酰化修饰性多肽的杂交信号强度是识别非琥珀酰化多肽的效价的20倍;Western bloting结果显示AIF琥珀酰化抗体能特异性识别AIF K89琥珀酰化修饰位点。质谱鉴定与AIF结合的蛋白有XIAP/BIRC4、EIF3G和PRELID1等。结论:生物信息分析提示AIF K89琥珀酰化修饰影响AIF蛋白的结构。制备的AIF K89琥珀酰化抗体能特异性识别AIF K89琥珀酰化修饰,为进一步研究AIF琥珀酰化的机制提供了基础。

特发性肺纤维化患者诱导痰中SDF-1的表达与高分辨CT表现的相关性研究

目的探讨特发性肺纤维化(IPF)患者血清和诱导痰中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的表达水平与肺功能及胸部高分辨CT表现的相关性。方法选取IPF患者32例及健康体检者30例,收集血清和诱导痰标本并检测SDF-1表达水平,IPF患者行肺功能和胸部高分辨CT检查,并对结果作相关分析。结果 IPF患者的诱导痰中SDF-1的表达水平为(705.21±11.71)ng/ml,高于健康体检组的(252.82±10.62)ng/ml,P<0.05差异有统计学意义。血清中SDF-1的表达水平(5.29±0.13)ng/ml高于健康体检组的(4.93±0.14)ng/ml,但P>0.05,没有统计学意义。IPF患者肺功能均有限制性通气功能障碍和弥散功能障碍;影像学表现为程度不一的磨玻璃影、网格影和蜂窝肺,HRCT评分与诱导痰中的SDF-1表达水平呈正相关(r=0.287,P<0.05)。结论 SDF-1在IPF患者诱导痰中表达明显升高,并与患者病情严重程度(胸部高分辨CT表现)呈正相关,对IPF诊断和治疗具有潜在的参考价值。

酰基辅酶A短链合成酶在肿瘤中的研究进展

肿瘤细胞的代谢异常活跃,可通过调节代谢酶的水平和功能或获取其他能源物质来满足其能量代谢需要。当肿瘤细胞缺氧或葡萄糖受限时,可利用短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)作为其能量物质来源。酰基辅酶A短链合成酶(acyl-CoA short chain synthetases,ACSSs)能够催化SCFAs合成乙酰辅酶A。乙酰辅酶A是一种关键的代谢中间产物,不仅为肿瘤细胞的存活提供能量供应,且是蛋白质乙酰化修饰的供体。蛋白质乙酰化是一种重要的翻译后修饰(post-translational modifications,PTMs),参与调节细胞行为,在肿瘤的发生发展中起一定的作用。研究ACSSs在肿瘤细胞中的代谢,尤其是应激代谢状态中的作用具有重要意义。为此,本文对近年有关ACSSs的研究进行综述,以期为ACSSs在肿瘤中的研究提供帮助。

免疫调节细胞影响特发性肺纤维化的研究进展

免疫细胞如巨噬细胞、中性粒细胞、嗜酸粒细胞和淋巴细胞等是机体抵御外来病原体入侵的先行军,在早期急性炎症和后期损伤修复中均发挥了重要的调节作用。近年研究发现免疫细胞的聚集、生长增殖和活化会加重慢性肺泡微损伤,导致损伤修复功能持续失调。这一系列免疫调节对特发性肺纤维化有驱动作用。因此,本文旨在回顾各种免疫细胞在特发性肺纤维化发病机制中的作用以及针对免疫细胞调节治疗特发性肺纤维化的最新研究报道。

应用CRISPR/Cas9技术建立敲除AIFM1基因的稳定肺癌细胞株

目的利用CRISPR/Cas9技术在肺癌细胞系A549和NCI-H3255中敲除凋亡诱导因子1(AIFM1)基因,并通过筛选,获得稳定的细胞株。方法利用在线数据库GEPIA、CPTAC、Prognosis和SangerBox分析AIF在肺癌的表达和功能。以AIFM1基因为靶点,设计向导RNA(sgRNA)并利用CRISPR RGEN Tools分析其脱靶效率,CRISPR/Cas9技术敲除肺癌细胞的AIFM1基因和倍比稀释法筛选稳定的单克隆细胞株。采用Western blot检测细胞AIF表达水平。结果TCGA和GTEx数据集结果显示,AIF蛋白在肺癌组织阳性表达率比正常组织高,差异有统计学意义(P<0.05);单因素cox和多因素cox分析发现,pT分期和pN分期是独立危险因素(P<0.05);CPTAC数据库显示,与正常阶段相比,AIF蛋白在肺癌的不同分级分期阶段的表达增加(P<0.05)。AIFM1基因在TCA循环、亨廷顿氏症疾病、氨基酸-核苷酸-糖的代谢和氧化性磷酸化通路中富集显著,差异有统计学意义(|NES|>1,P<0.05);3条sgRNA的序列脱靶效率均为0;与野生型肺癌细胞株相比,用CRISPR/Cas9基因编辑技术修饰的肺癌细胞未检测到表达AIF蛋白,且筛选的杀死A549和NCI-H3255的嘌呤霉素浓度分别为0.60~0.80μg/mL和0.60μg/mL。结论AIF在肺癌中表达上调。利用CRISPR/Cas9技术成功建立AIFM1基因敲除的肺癌细胞株,这将为研究AIF在肺癌发生发展机制提供合适的研究材料。