二甲双胍非降糖肾脏保护作用的研究新进展

二甲双胍作为一线口服降糖药应用于2型糖尿病,其有效性、安全性和经济性已得到公认。二甲双胍除降血糖而间接起肾脏保护作用之外,新近研究发现,它还可通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)依赖和非依赖途径诱导自噬、抗衰老、抗氧化应激、抗内质网应激、抗炎、抗纤维化等,对慢性肾脏病和急性肾损伤起防治作用。该文就二甲双胍非降糖肾脏保护作用及可能机制作一综述。

自噬在膜性肾病补体攻膜复合物所致足细胞损伤中的作用

目的探讨自噬在补体攻膜复合物C5b-9所致足细胞损伤中的作用。方法利用酵母多糖活化正常人血清制作攻膜复合物C5b-9;分别用含C5b-9的酵母多糖活化血清(ZAS)、雷帕霉素、氯喹处理MCP-5足细胞,透射电子显微镜观察自噬泡形成,蛋白印迹、免疫荧光检测LC3、F-actin、podocin、nephrin表达。结果在ZAS刺激下,足细胞内LC3Ⅱ表达明显增加,自噬泡生成增多,骨架结构严重破坏。氯喹处理足细胞加重骨架结构破坏、下调F-actin、podocin和nephrin表达,而雷帕霉素减轻上述损伤(P<0.01或0.05)。结论自噬可保护足细胞抵抗亚溶解型C5b-9所致损伤。

TFEB调控机制及其靶向药物的研究进展

转录因子EB(TFEB)是具有螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链分子结构的转录因子,在维持细胞稳态等过程中至关重要。TFEB作为维持细胞自噬-溶酶体稳定的转录因子,其异常与诸多疾病的发生发展密切相关。目前,针对其调节机制及其靶向调节药物的研究均有一定进展。该文对目前TFEB的调节机制和靶向药物研究进展进行综述,以期为与TFEB调节异常相关的疾病提供新的治疗思路。

反复注射顺铂诱导小鼠慢性肾功能不全模型的建立

目的构建慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)C57BL/6小鼠模型,探索其小管损伤指标和间质纤维化程度随顺铂造模剂量的改变,为研究从AKI到CKD进展过程提供动物实验依据。方法将24只8周龄雄性C57BL/6小鼠随机平均分为对照组和低、中、高剂量顺铂模型组。模型组小鼠按5、7、10 mg/kg顺铂腹腔注射给药,每周1次,连续注射4周构建模型。处死小鼠后,留取标本进行相关检测。检测血浆肌酐和24 h尿蛋白排泌量来评估小鼠肾功能;PAS染色观察肾脏病理学变化;免疫组化检测肾损伤分子1(KIM-1)和尿液检测N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平以评估肾小管损伤情况;免疫组化法检测肾脏CD3阳性T细胞和免疫荧光法检测F4/80阳性巨噬细胞浸润情况;天狼星红染色、免疫组化法检测胶原I和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达以评估肾脏纤维化情况。结果与正常对照组相比,随着注射顺铂浓度的升高,小鼠肾脏损伤越明显,其中10 mg/kg顺铂高剂量组最为显著。与对照组相比,顺铂高剂量组小鼠肾功能下降,表现为血浆肌酐浓度和24 h尿蛋白排泌量显著升高(P<0.05和P<0.001);肾小管上皮细胞坏死、空泡变性等病理学改变显著,肾组织KIM-1表达显著上升(P<0.05),尿NAG水平升高;肾组织浸润的CD3阳性T细胞和F4/80阳性巨噬细胞增多;肾组织天狼星红染色阳性胶原纤维区域显著增多(P<0.001),胶原I和α-SMA表达也明显增多(P<0.01),肾小管-间质发生纤维化。结论反复注射4周10 mg/kg顺铂可诱导小鼠慢性肾功能不全模型,可为研究AKI向CKD的转化机制提供了新的实验模型。

急性肾损伤生物标志物的研究现状及新进展

急性肾损伤(AKI)是住院患者尤其危重症患者的常见病,发病率和病死率较高。由于血清肌酐值和尿量变化在早期诊断AKI和评判预后等方面存在不足,因此寻找并获得有潜力的AKI生物标志物可对临床实践有诸多帮助,但也存在一定的局限性。近年来,相继被发现一些新型AKI生物标志物,如细胞周期阻滞标志物(金属蛋白酶组织抑制因子2和胰岛素样生长因子结合蛋白7)、基质金属蛋白酶7、微RNA、血管紧张素原等,在评估AKI进展和不同病因引起的AKI方面具有应用前景。联合评估多种生物标志物不仅能明显提高早期诊断AKI的敏感性和特异性,对预测预后也更具优势。

经典型蛋白激酶C在不同肾小球疾病患者肾组织的表达

目的:检测4种经典型蛋白激酶C同工酶(PKC-α、PKC-βⅠ、PKC-βⅡ和PKC-γ)在正常及不同肾小球疾病患者肾组织的表达,探讨其在肾小球疾病中的作用。方法:收集广东医科大学附属医院肾病内科行肾脏病理活检确诊的肾小球疾病患者肾组织50例,其中肾小球轻微病变、膜性肾病、局灶节段性肾小球硬化症、Ig A肾病及狼疮性肾炎各10例;收集6例来自肾肿瘤患者手术切除远离肿瘤部分、病理检查无异常的肾组织做为正常组。免疫组化法检测并分析4种经典型蛋白激酶C同工酶在正常及肾小球疾病肾组织的表达变化。结果:PKC-α、βⅠ和βⅡ在正常肾组织肾小管上皮细胞和肾小球均有表达,PKC-γ仅表达于肾小球足细胞,在肾小管间质均无表达;各经典型PKC同工酶在肾小球疾病肾组织中表达部位与正常肾组织相同,但表达量不尽相同。结论:在肾小球疾病中,PKC-α和PKC-βⅠ可能参与肾小管间质纤维化,是慢性肾脏病的潜在治疗靶点,PKC-γ可能参与足细胞生理功能的维持,不参与肾小管间质的损伤。

肾小管上皮细胞损伤在急性肾损伤向慢性肾脏病转化中的作用

急性肾损伤（AKI）指由多种病因引起的。肾功能快速下降而出现的临床综合征。全球每年约有1330万人患AKI，其中85％的患者来自包括中国在内的亚非拉发展中国家。AKI除具有较高的死亡风险外，其远期预后也不乐观，常常进展成慢性肾脏病（CKD）甚至终末期肾脏疾病（ESRD）。与未发生AKI的人群相比，

巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠的构建及鉴定

目的构建并鉴定巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠,为研究巨噬细胞自噬在肾脏疾病发病机制中的作用提供动物模型。方法将引进LysM-Cre小鼠与Atg5^flox/+小鼠进行杂交、Atg5^flox/+小鼠自交,分别获得基因型为Atg5^flox/+Cre^+/-和Atg5^flox/flox Cre^-/-的子代小鼠;将上述两种基因型的子代小鼠杂交,得到巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠(Atg5^flox/flox Cre^+/-,Atg5^-/-)和对照小鼠(Atg5^flox/flox Cre^-/-,Atg5^+/+)。提取小鼠鼠尾组织基因组DNA,经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳后,在DNA水平判断小鼠基因型;提取小鼠骨髓来源巨噬细胞RNA和蛋白,利用基因测序和Western blot技术检验Atg5基因的敲除效果。结果成功建立巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠模型,该小鼠存活并且可育。在基因及蛋白水平上,巨噬细胞Atg5基因敲除成功;且与Atg5^+/+小鼠相比,Atg5^-/-小鼠自噬基础水平低下(p62明显增多,LC3Ⅱ明显减少),对于自噬激活剂雷帕霉素刺激不能恢复到正常基础水平。结论利用Cre/loxp系统,本研究成功构建并鉴定出条件性巨噬细胞Atg5基因敲除小鼠,为在动物水平研究巨噬细胞自噬在肾脏疾病发病机制中的作用提供研究平台。

肾脏固有细胞自噬对肾纤维化作用的研究进展

肾纤维化是各种病因导致的慢性肾脏病(chronic kidney disease, CKD)进展至终末期肾病的共同病理变化, 其治疗研究一直受到广泛关注, 改善肾纤维化所致的肾功能障碍被认为是治疗CKD的重要策略。自噬作为一种进化上高度保守的细胞内降解系统, 已被证实与肾纤维化的发生发展密切相关。其中, 肾脏固有细胞自噬变化对肾纤维化的影响被研究得较多;然而, 自噬对肾纤维化的作用可能是细胞特异性及疾病环境依赖性的, 即在不同的细胞或不同的疾病模型可能有截然相反的作用。因此, 自噬对肾纤维化的作用仍然存在一定的争议。本文就肾脏固有细胞自噬在不同疾病条件下对肾纤维化作用的研究进展进行综述。

质子泵抑制剂与急慢性肾脏损伤

质子泵抑制剂（proton pump inhibitors，PPIs）作为全球最常用的处方药之一，由于其安全性及抑酸效率高、耐受性好的特点，被临床广泛应用于抑酸治疗。各种PPI拥有相似的作用机制，即通过阻碍胃壁细胞H＋-K＋-ATP酶发挥其抑制胃酸分泌的作用。

溶酶体与肾脏疾病

溶酶体不只是细胞的"垃圾站",近年来其生理及病理生理作用越发受到重视.肾脏是富含溶酶体的器官,足细胞和肾小管上皮细胞等肾脏固有细胞的溶酶体结构与功能受损见于遗传性肾病、代谢性肾病以及肾间质纤维化等多种肾脏疾病中.已有报道显示,保护溶酶体功能可以维持损伤的足细胞和肾小管上皮细胞稳态,并可能有助于延缓上述肾脏疾病的进展.因此,明确肾脏病状态下肾脏固有细胞溶酶体损伤的原因、机制以及针对溶酶体的保护措施,对进一步明确肾脏损伤机制及寻找肾脏疾病治疗新策略具有较好的前景.本文将结合最新文献对近几年溶酶体在肾脏疾病中的作用作一综述,以期为溶酶体在肾脏疾病领域中的研究提供参考.

环孢菌素A对肾小管上皮细胞自噬-溶酶体通路的影响

目的探讨环孢菌素A（CsA）对肾小管上皮细胞（TEC）自噬．溶酶体通路的影响。方法不同浓度（3、5、10μmol／L）CsA刺激人近端肾小管上皮（HK-2）细胞24h。用MTT法检测细胞活力；AnnexinV—PI双染流式细胞术检测细胞凋亡；免疫荧光法检测细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅱ和p62表达；共聚焦显微镜下观察mRFP—GFP串联荧光标记LC3（tfLC3）质粒转染HK．2细胞后自噬体与溶酶体融合及降解情况；用流式细胞术检测HK-2细胞溶酶体对DQ-卵清蛋白的消化能力。结果与对照组相比，5、10μmol／LCsA组细胞活力下降（均P〈0．01）；细胞凋亡数增多（均P〈0．05）。与对照组相比，3、5、10μmol／LCsA组细胞LC3-II和p62表达增加（均P〈0．05）；自噬体降解受阻；细胞溶酶体消化DQ-卵清蛋白能力下降（均P〈0．01）。结论CsA通过损害溶酶体功能而阻滞肾小管上皮细胞自噬通路，可能是CsA肾病的发生机制之一。