超高效液相色谱-串联质谱法同时测定肿瘤细胞mRNA中12种正常核苷和修饰核苷

建立了一种肿瘤细胞mRNA中12种正常核苷和修饰核苷的分析方法。肿瘤细胞样品经总RNA提取、mRNA纯化和mRNA水解后,加入8-溴鸟苷(8Br-G)为内标,以0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸甲醇溶液为流动相,采用Agilent RRHD SB-C18(2.1 mm×50 mm,1.8μm)色谱柱进行分离,电喷雾电离源正离子扫描(ESI+),多反应监测(MRM)模式检测。该方法符合方法学验证要求,12种正常核苷和修饰核苷在一定浓度范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.99,定量下限(LOQ)为0.17~3.13 ng/mL,检出限(LOD)为0.08~1.56 ng/mL。将建立的方法应用于人鼻咽癌5-8F细胞系、人宫颈癌Hela细胞系和人胚肾上皮293T细胞系,成功地检测出多种修饰核苷水平。该方法细胞用量少(每样品2×106个),分析时间短(每样品6 min),灵敏度高,可为癌症研究和临床诊断等提供一种有效的分析方法。

植物耀素凝胶对阴道常见微生物生长的影响

目的研究植物耀素凝胶对阴道常见微生物生长增殖的影响,为阴道炎症的预防提供理论依据。方法将植物耀素凝胶加入培养基中,采用比浊法和菌落计数测定其对微生物生长的影响;采用3,5-二硝基水杨酸法测定不同微生物对培养基中的碳源消耗量;通过菌落计数测定植物耀素凝胶对混合培养的鼠李糖乳杆菌和致病菌生长的影响。结果单独培养条件下,植物耀素凝胶可促进鼠李糖乳杆菌生长,其活菌浓度由(1.79±0.42)×10^(9) CFU/mL增加至(8.27±1.80)×10^(9) CFU/ml(P<0.01);抑制其他微生物生长,其中大肠埃希菌活菌浓度由(3.06±1.54)×10^(9) CFU/ml降至(9.40±0.07)×10^(3) CFU/ml(P<0.01),阴道加德纳菌活菌浓度由(3.34±1.02)×10^(7) CFU/ml降至(1.98±0.98)×10^(5) CFU/ml(P<0.01),白色假丝酵母菌生长活菌浓度由(3.00±1.17)×10^(7) CFU/ml降至(75.00±0.11)CFU/ml(P<0.001),干燥棒状杆菌无单菌落生长。鼠李糖乳杆菌对培养基中碳源相对消耗量为50.26%,呈中等消耗程度,其余菌对碳源消耗量为低或基本无消耗;混合培养条件下,植物耀素凝胶促进鼠李糖乳杆菌生长(P<0.05),进而抑制其他微生物生长:金黄色葡萄球菌活菌浓度由(4.39±0.45)×10^(15) CFU/ml降至(2.05±0.22)×10^(12) CFU/ml(P<0.01),大肠埃希菌活菌浓度由(1.27±0.70)×10^(9) CFU/ml降至(6.95±2.75)×10^(5) CFU/ml(P<0.01),干燥棒状杆菌无单菌落生长,白色假丝酵母菌活菌浓度由(3.95±1.72)×10^(7) CFU/ml降至(1.95±0.26)×10^(5) CFU/ml(P<0.01)。结论植物耀素凝胶能促进鼠李糖乳杆菌生长,从而抑制金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、干燥棒状杆菌和白色假丝酵母菌的生长,有利于维持阴道微生态平衡,可应用于阴道炎症预防。