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猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立
被引量:
6
1
作者
曾思遥
张淑琼
+3 位作者
余绍华
唐志玲
陈瑞爱
罗满林
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2012年第6期41-46,共6页
本研究以猪圆环病毒2型(PCV2)核衣壳蛋白ORF2基因为目的基因,设计合成特异性引物和探针。PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体,筛选得到标准阳性质粒。通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了PCV2的TaqMan实时荧光定量PCR检测方...
本研究以猪圆环病毒2型(PCV2)核衣壳蛋白ORF2基因为目的基因,设计合成特异性引物和探针。PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体,筛选得到标准阳性质粒。通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了PCV2的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。试验结果表明,该方法特异性强,对猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)等猪常见病原的检测结果均为阴性;与普通PCR方法相比,其敏感性高出100倍,可达100拷贝/μL;对临床样品的检测证明,该方法可有效检测出淋巴结、肺脏等组织中的PCV2。
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关键词
猪圆环病毒2型
荧光定量PCR
TAQMAN探针
标准曲线
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职称材料
犬IFN-α优化基因的真核表达及抗病毒活性的研究
被引量:
1
2
作者
张淑琼
高娟
+3 位作者
曾思遥
蒋再学
陈瑞爱
罗满林
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2012年第8期39-44,共6页
本研究根据酵母系统密码子的偏嗜性,对成熟蛋白基因核苷酸序列进行密码子偏嗜性改造,利用毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαC来表达犬IFN-α成熟蛋白基因。并采用非洲绿猴肾细胞(Vero)-水疱性口炎病毒(VSV)系统以细胞病变抑制法为基础来测...
本研究根据酵母系统密码子的偏嗜性,对成熟蛋白基因核苷酸序列进行密码子偏嗜性改造,利用毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαC来表达犬IFN-α成熟蛋白基因。并采用非洲绿猴肾细胞(Vero)-水疱性口炎病毒(VSV)系统以细胞病变抑制法为基础来测定重组犬α干扰素的效价,同样方法测定了表达产物对PRV和CDV的抑制作用。本试验实现了犬α干扰素在酵母中的高表达,表达量高达58 mg/L,SDS-PAGE检测大小约为24 ku,比预测分子质量大,推测发生了糖基化。表达产物具有较强的种属特异性,在Vero细胞上对PRV具有较高的抗病毒活性,达到了3.6×107U/L,对CDV也有很好的抑制作用。本研究为犬IFN-α以后的临床应用研究奠定基础。
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关键词
犬IFN-α
优化基因
酵母表达
抗病毒活性
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职称材料
题名
猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立
被引量:
6
1
作者
曾思遥
张淑琼
余绍华
唐志玲
陈瑞爱
罗满林
机构
华南
农
业大学
广东大华农动物保健品股份有限公司研发中心
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2012年第6期41-46,共6页
基金
省部产学研结合重大项目(2011A090200117)
广东大华农科研基金(033A201005-3)
文摘
本研究以猪圆环病毒2型(PCV2)核衣壳蛋白ORF2基因为目的基因,设计合成特异性引物和探针。PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体,筛选得到标准阳性质粒。通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了PCV2的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。试验结果表明,该方法特异性强,对猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)等猪常见病原的检测结果均为阴性;与普通PCR方法相比,其敏感性高出100倍,可达100拷贝/μL;对临床样品的检测证明,该方法可有效检测出淋巴结、肺脏等组织中的PCV2。
关键词
猪圆环病毒2型
荧光定量PCR
TAQMAN探针
标准曲线
Keywords
porcine circovirus type 2
fluorescent quantitative PCR
TaqMan probe
standard curve
分类号
S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
犬IFN-α优化基因的真核表达及抗病毒活性的研究
被引量:
1
2
作者
张淑琼
高娟
曾思遥
蒋再学
陈瑞爱
罗满林
机构
华南
农
业大学
广东大华农动物保健品股份有限公司研发中心
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2012年第8期39-44,共6页
文摘
本研究根据酵母系统密码子的偏嗜性,对成熟蛋白基因核苷酸序列进行密码子偏嗜性改造,利用毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαC来表达犬IFN-α成熟蛋白基因。并采用非洲绿猴肾细胞(Vero)-水疱性口炎病毒(VSV)系统以细胞病变抑制法为基础来测定重组犬α干扰素的效价,同样方法测定了表达产物对PRV和CDV的抑制作用。本试验实现了犬α干扰素在酵母中的高表达,表达量高达58 mg/L,SDS-PAGE检测大小约为24 ku,比预测分子质量大,推测发生了糖基化。表达产物具有较强的种属特异性,在Vero细胞上对PRV具有较高的抗病毒活性,达到了3.6×107U/L,对CDV也有很好的抑制作用。本研究为犬IFN-α以后的临床应用研究奠定基础。
关键词
犬IFN-α
优化基因
酵母表达
抗病毒活性
Keywords
canine IFN-alpha
optimize gene
yeast expression
antiviral activity
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立
曾思遥
张淑琼
余绍华
唐志玲
陈瑞爱
罗满林
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2012
6
下载PDF
职称材料
2
犬IFN-α优化基因的真核表达及抗病毒活性的研究
张淑琼
高娟
曾思遥
蒋再学
陈瑞爱
罗满林
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2012
1
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职称材料
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