恒河猴大脑注射Aβ1-42和Thiorphan的病理学观察

目的:前人的研究证实大脑内存在降解Aβ关键酶neprilysin(NEP),注射NEP的抑制剂thiorphan能够在啮齿类诱发神经元淀粉样蛋白水平升高。但是没有注射thiorphan后对啮齿类大脑病理学观察的报道,更加没有恒河猴身上这方面的实验数据。本课题组拟用该法建立AD模型,就建立AD模型而言需要获得病理学方面的数据,因此,本实验观察Aβ1-42和thiorphan对恒河猴大脑皮质,基底核等部位的毒性影响,为注射thiorphan和Aβ建立恒河猴AD模型提供数据准备。方法:开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核。HE染色法观察大脑上述部位的形态学改变。结果:实验组以注射位点为中心呈阶梯状,越靠近注射位点神经元的消失就越严重。局部液化坏死,呈筛孔状改变,神经元丢失。可见萎缩神经细胞,大量小胶质细胞增生,噬神经元现象显著。结论:Aβ1-42和Thiorphan联合颅内给药后引起神经元丢失及小胶质细胞增生。

恒河猴大脑注射Aβ1-42和Thiorphan对胆碱能神经元影响的研究

目的观察颅内灌注Aβ1-42和Thiorphan给药后恒河猴基底、核大脑皮质等部位胆碱能神经元的改变。方法将恒河猴4只,分为对照组(1只)与实验组(3只),对照组开颅后只注射0.9%氯化钠溶液,实验组开颅后先注射Thiorphan到猕猴的基底核和大脑皮质消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,再植入含有Thiorphan的微渗透泵到基底核。免疫组织化学方法检测大脑切片胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫反应活性及阳性神经元数量及形态学改变。结果给药后实验组恒河猴基底核、皮质等部位的胆碱能神经元数量减少和ChAT水平降低。结论 Aβ1-42和Thiorphan联合颅内给药后损害大脑基底核、皮质等部位的胆碱能神经元。

淀粉样β-蛋白1-42和thiorphan对恒河猴海马结构的影响

目的观察淀粉样β蛋白1-42(Aβ1-42)和thiorphan对恒河猴大脑海马神经元淀粉样蛋白、乙酰胆碱转移酶(ChAT)以及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,为注射thior-phan和Aβ1-42建立恒河猴AD模型提供数据准备。方法开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核,消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核。HE染色观察海马结构病理改变。免疫组化的方法检测猴子海马Aβ1-42、乙酰胆碱转移酶(ChAT)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞的表达。结果HE染色显示海马CA1、CA2等区神经元萎缩,海马齿状回局部颗粒细胞丢失被胶质细胞取代;免疫组化结果显示模型组海马各区Aβ1-42、ChAT、GFAP阳性细胞吸光度(OD值)分别为0.59±0.05、0.21±0.04、0.19±0.04,与对照组比较P<0.01,差异具有统计学意义。结论Aβ1-42和thiorphan联合颅内给药导致恒河猴海马产生类似AD患者的病理改变。

恒河猴大脑注射Aβ1-42和Thiorphan诱发脑内广泛炎症反应

目的:观察颅内给Aβ1-42和thiorphan后是否可以在恒河猴大脑内诱发类似AD患者的炎症反应,探讨该法建立猕猴AD模型的可行性。方法:开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核。HE染色及免疫组化观察大脑的炎症反应情况。结果:HE染色显示侧脑室室管膜的单层上皮结构消失,大量小胶质细胞浸润,形成多细胞层,小胶质细胞增生聚集成灶。免疫组化结果显示实验组恒河猴海马、基底核及皮质等部位出现星形胶质细胞增生。结论:Aβ1-42和thiorphan联合颅内给药后可以在恒河猴大脑内诱发广泛的炎症反应。