孕妇弓形虫感染相关诱因的Meta分析

目的分析宠物接触和吃生肉习惯与孕妇感染弓形虫的相关性。方法从多个文献数据库中搜索关于孕妇弓形虫感染与宠物接触和吃生肉习惯的文献（无语言限制），运用StataSE软件进行Meta分析。结果宠物接触组中弓形虫感染率高于无接触组，比值比（OddsRatios，OR）为2．35（95％置信区间：1.68～3．28），有吃生肉习惯组中弓形虫感染率也高于对照组，OR值为1．68（95％置信区间：1．40～2．01）。结论接触宠物和吃生肉习惯是与孕妇弓形虫感染显著相关的危险因素。

基于mtDNA-COI基因序列分析我国中华按蚊种群的遗传结构

目的探讨我国中华按蚊种群遗传多样性、遗传分化及种群系统发育关系。方法本实验采用2010-2012年间在我国山东,安徽,江苏,贵州,广西和云南等6个不同地理环境采集的中华按蚊样品,进行线粒体COI基因扩增并测序。采用Bioedit 7.0软件对测序结果进行比对分析;运用Dna SP 5.0软件确定种群遗传结构特点;应用Arlequin 3.1软件计算种群的遗传距离及遗传分化系数;通过IBDWS在线软件来明确遗传距离与地理距离的相关性;使用PHYLIP 3.6软件构建种群系统发育进化树。结果六个中华按蚊种群共123个雌蚊个体的PCR产物成功扩增和测序。PCR扩增中华按蚊线粒体COI基因序列大小为814 bp,平均A+T含量(71.2%)>平均G+C含量(28.8%)。线粒体COI序列分析结果显示,种群具有丰富的遗传多样性;分子变异等级分析表明中华按蚊遗传分化主要来自于种群内部;种群间存在一定的地理隔离现象。中性检验,错配分析及聚类进化树结果显示:中华按蚊种群发展经历扩张状态,而云南种群相对其他种群较独立,在系统树中为孤立一支。结论线粒体COI基因可以作为研究中华按蚊种群遗传结构和系统进化的理想分子标志。云南种群遗传发育较其他地理种群具有一定特殊性。

广州地区肺炎链球菌儿童分离株临床分布及药敏特征

目的分析儿童肺炎链球菌的临床分布和耐药性,为临床合理用药提供依据。方法按全国临床检验标准操作规程对2013年1月1日至2015年12月31日间采集的儿童细菌培养标本进行常规肺炎链球菌分离培养和鉴定,结合检验历史系统分析阳性病例来源标本类型及患儿年龄分布,并用MIC法分析肺炎链球菌的耐药性情况。结果共分离1 243株肺炎链球菌,1岁以内婴儿分离率最高,占42.80%。标本来源有呼吸道标本(72.81%),耳分泌物(15.37%),血液(5.63%),脑脊液(3.06%),胸腔积液(2.01%)。所分离的肺炎链球菌株中,对红霉素、四环素、复方磺胺甲噁唑的耐药率分别高达94.93%、85.76%和73.53%,对青霉素G、阿莫西林、头孢曲松、美罗培南、头孢噻肟耐药率较高,分别为24.70%、39.59%、24.05%、22.85%,19.89%,对喹诺酮类耐药率均低于10.00%,未发现万古霉素和利奈唑胺耐药株。结论 0~1岁为广州地区儿童肺炎链球菌感染的主要年龄阶段,该地区肺炎链球菌儿童分离株对红霉素、四环素、复方磺胺甲噁唑的耐药情况较严重,青霉素G、阿莫西林、头孢曲松的耐药性有显著提高,在临床使用上应引起重视。临床医生应根据药敏试验结果合理选择抗菌药物,以提高治愈率。

广州地区儿童患者脑脊液分离病原菌构成及耐药特征

目的了解广州地区儿童脑脊液培养分离病原菌构成及药敏特征,为儿童脑膜炎经验治疗提供帮助。方法 2011年1月1日~2015年12月31日5年间,对疑似脑膜炎患儿取脑脊液,按《全国临床检验操作规程》进行病原菌培养、鉴定和药敏,分析病原菌构成和药敏特征。结果共分离132株病原菌,G+菌占57.58%(76/132),G-菌占39.40%(52/132),真菌占3.03%(4/132),主要病原菌为大肠埃希菌(23.48%,31/132),肺炎链球菌(22.73%,30/132),金黄色葡萄球菌(12.12%,16/132)和无乳链球菌(9.85%,13/132)。大肠埃希菌对哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因、头孢吡肟、丁胺卡那霉素、妥布霉素、亚胺培南、厄他培南和美洛培南无耐药,头孢替坦耐药率3.22%,头孢他啶9.38%,氨曲南12.90%,氨苄西林/舒巴坦、氧氟沙星、环丙沙星、头孢曲松、庆大霉素和头孢唑林约为30%,复方新诺明和氨苄西林60%以上,ESBL阳性率为31.25%。肺炎链球菌对厄他培南无耐药,泰利霉素耐药率5.88%,氯霉素14.71%,头孢曲松17.76%,阿莫西林23.53%,美洛培南32.30%,头孢噻肟35.29%,而对四环素、红霉素、青霉素和复方新诺明都高于70%。金黄色葡萄球菌对利福平、替加环素、喹奴普汀/达福普汀、利奈唑胺和万古霉素无耐药,环丙沙星和庆大霉素耐药率6.25%,复方新诺明12.50%,克林霉素耐药率18.75%,四环素31.25%,红霉素62.50%,对头孢类高于90%,对青霉素近100%,MRSA比率为56.25%。无乳链球菌对青霉素无耐药,环丙沙星耐药率7.69%,氧氟沙星23.08%,对四环素、红霉素、克林霉素耐药率均高于60%。结论广州地区儿童脑脊液培养病原菌主要为大肠埃希菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌,不同病原菌药敏特征不同,为儿童细菌真菌性脑膜炎的预防、病原学快速诊断和治疗提供指导。

日本血吸虫主要虫卵抗原Sjp40在感染新西兰白兔肝脏中的表达与免疫定位

目的观察Sjp40在感染新西兰白兔肝脏沉积虫卵及其肉芽肿病变形成中的表达情况,并进行免疫定位。方法日本血吸虫尾蚴感染新西兰白兔,收集未感染组、29 dpi组和45 dpi组肝脏,Trizol法提取各组肝脏总RNA,以日本血吸虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参,Taqman探针q RT-PCR检测Sjp40 m RNA的表达;提取各组肝脏总蛋白,以硫酸铵盐析法和Protein G免疫亲和柱层析法纯化的抗Sjp40-Mc Ab 9G7和抗弓形虫t SAG1-Mc Ab Y3A8(对照抗体),western blot检测Sjp40蛋白的表达;制备肝脏石蜡切片,HE染色观察肝脏虫卵肉芽肿的形成与发展,进一步以免疫荧光技术进行Sjp40在肝脏沉积虫卵及其肉芽肿组织中的定位。结果日本血吸虫感染兔呈急性肝肉芽肿病变期的45 dpi肝脏沉积虫卵中Sjp40 m RNA水平显著高于29 dpi尚未形成虫卵肉芽肿结节的肝脏沉积的未成熟虫卵(P<0.05),westernb blot证实了Sjp40蛋白在29 dpi和45 dpi兔肝脏中的表达。免疫荧光显示:Sjp40在29 dpi兔肝脏中定位于未成熟虫卵内,而45 dpi可见感染兔肝脏中沉积大量成簇内含毛蚴的成熟虫卵及其周围肉芽肿组织均有明显荧光。结论 Sjp40在日本血吸虫感染兔肝脏沉积虫卵中的转录水平随虫卵发育成熟而显著增加,在感染兔急性肉芽肿病变期(45dpi)呈现由虫卵向其周围肉芽肿组织扩散现象,提示该分子在血吸虫肉芽肿形成与发展过程中具有重要作用。

冈比亚按蚊性别决定基因doublesex的克隆、序列分析及表达谱

【目的】doublesex是控制昆虫性别分化的关键基因,决定了昆虫体细胞与生殖细胞的性别。本研究旨在克隆、鉴定重要疟疾媒介冈比亚按蚊Anopheles gambiae性别决定基因doublesex(Angdsx),分析其在雌雄个体内的剪切体及在不同发育时期的表达模式。【方法】基于冈比亚按蚊转录组数据库,比对到Angdsx相关片段,分别以雌雄成蚊c DNA为模板,采用RT-PCR与RACE方法克隆分别获得雌雄个体内Angdsx全长基因,利用生物信息软件对所得序列进行结构域预测、氨基酸序列比对和进化树分析。根据Angdsx特异性表达引物,利用RT-PCR方法研究其在冈比亚按蚊雌雄个体及不同发育时期的表达谱。【结果】分别从冈比亚按蚊雌雄成虫中克隆获得Angdsx c DNA全长序列,分别命名为AngdsxF(Gen Bank登录号:KM978937)和AngdsxM(Gen Bank登录号:KM978938)。Angdsx位于2号常染色体右臂,基因横跨接近80 kb基因组长度。AngdsxF长度为4 874 nt,编码长度为265个氨基酸的雌性特异性蛋白DSXF;AngdsxM长度为3 183 nt,编码长度为633个氨基酸的雄性特异性蛋白DSXM。结构域分析发现Angdsx包括doublesex保守的TRA/TRA-2结合位点、dsx重复序列、富含精氨酸/丝氨酸双肽区、多聚嘌呤增强子序列和RNA结合蛋白结合序列,以及连续的双核苷酸GT为主的重复序列。与AngdsxF相比,AngdsxM具有一个雌性特异性的外显子。AngdsxM在0-2 h卵中高表达,随后逐渐减少,在12-24 h卵中降至最低,之后再次升高;AngdsxF则在6-8 h卵中开始表达。【结论】本研究获得了冈比亚按蚊性别决定基因Angdsx在雌雄个体内的全长序列,Angdsx具有保守的结构域与表达特征。本研究结果为蚊虫性别分化的分子机制及将其最终应用于显性致死昆虫施放技术进行蚊媒的防制提供了理论基础。

蚊虫的组学研究:媒介生物学和传播疾病的大数据分析平台

近年来随着二代测序等生物技术的的快速发展,蚊虫基因组学、转录组学、小RNA组学等领域的研究也得到了迅速提升。迄今为止,已有多种重要蚊媒包括冈比亚按蚊、致倦库蚊、埃及伊蚊等的基因组获得解析;不同蚊种的基因组大小差异很大,且与基因组中的重复序列的多少呈正相关;基因组序列为嗅觉相关基因、性别决定基因等蚊虫基因的克隆鉴定提供了便利。转录组研究则给蚊虫基因的功能分析带来了有效手段,吸血蚊虫的分子基础、唾液腺蛋白的分类构成以及滞育的发生机制等都借此取得了突破性发展。小RNA组研究则揭示mi RNA和pi RNA对蚊虫的卵巢发育和吸血消化具有调节作用,而且在蚊媒抗病毒免疫中起重要作用。总之,蚊虫的组学研究为其媒介生物学和传播疾病的防治,提供了广阔的、实用的大数据分析平台。

埃及伊蚊性别决定基因 Transformer 2 的鉴定与表达分析

目的分离、鉴定和分析埃及伊蚊性别决定基因Transformer 2(Aaetra2)。方法通过生物信息学方法与分子生物学方法获得了Aaetra2基因的全长。通过与已知物种tra2的比较,分析Aaetra2的基因结构特点与分子进化特征,通过RT-PCR方法验证Aaetra2的时间与组织表达特点。结果分离并鉴定Aaetra2-α与Aaetra2-β两个基因,它们位于染色体不同部位,通过选择性启动子的剪切策略进行自我调控,转录多种mRNA。埃及伊蚊TRA2蛋白具有保守的RRM、RS1、RS2和linker功能结构域区。Aaetra2表达方式无时间特异性的,从卵持续性表达至成虫阶段,且无性别特异性表达与组织特异性表达。结论 Aaetra2具有保守的昆虫性别决定基因tra2的功能结构域与表达特征,对其深入研究将为其最终应结合释放携带显性致死基因的昆虫技术应用于蚊虫的防制提供理论依据。

抗日本血吸虫Sjp40鸡卵黄抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的制备抗日本血吸虫蛋白(Sjp40)鸡卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin Y,IgY),以期为日本血吸虫病的免疫学诊断提供一种特异性强、灵敏度高的优势抗体。方法以纯化的Sjp40抗原免疫健康SPF级产蛋鸡,初次免疫2周后开始每日收集的鸡蛋为样本,采用水稀释硫酸铵沉淀法从鸡蛋中初步提取抗Sjp40 IgY,进一步经透析袋、DEAE-FF阴离子交换柱纯化IgY。用SDSPAGE、Western Blot及ELISA对纯化后的抗Sjp40 IgY进行分析鉴定。结果纯化的特异性抗Sjp40IgY,抗体效价1∶106。相对分子质量为180 kDa,SDS-PAGE可见有2条主要蛋白带,分别约为66kDa和35 kDa,并可被Sjp40特异性识别。结论成功制备具有良好免疫反应性、特异性强、灵敏度高的抗Sjp40特异性IgY抗体。

LAMP的影响因素及其检测寄生虫的研究进展

本文从靶标基因选取、样本采集及处理、LAMP反应、产物检测等方面综述了环介导等温扩增法检测过程中的影响因素及其在寄生虫检测方面的研究进展。

应用改良凝集试验(MAT)法检测东北地区野生鸟类弓形虫感染的血清学调查

目的了解中国东北地区野生鸟类的弓形虫感染情况。方法在对东北地区野生鸟类进行调查时,从翼根静脉采集约500μL全血,凝血后分别分离出血清,采用改良凝集试验(MAT)方法检测血清中弓形虫抗体的阳性率。结果共收集到179份野生鸟类血清样本,其中弓形虫阳性血清样本20份,总的血清阳性率约为11.17%。179只野生鸟隶属于9目17科31种,其中鸽形目、雀形目、隼形目、鴷形目、佛法僧目、雁形目的血清阳性率分别为5.26%(1/19),9.09%(9/99),14.29%(3/21),15.00%(5/22),16.67%(1/6),和25.00%(1/4)。按不同食性分类,肉食性、杂食性或水生动植物为食的鸟类的血清阳性率分别为12.00%(3/25),10.60%(15/141),15.38%(2/13)。按照鸟类是否迁徙分类,候鸟和留鸟的血清阳性率分别为11.67%(14/120),10.71%(6/59)。结论东北地区的野生鸟类中弓形虫抗体的阳性率约为11.17%,显示弓形虫感染现象常见于野生鸟类。

白纹伊蚊同步产卵诱导体系的优化及其卵胚发育观察

为构建白纹伊蚊同步产卵人工诱导体系，并对白纹伊蚊卵胚发育进行观察研究，本文通过对广州白纹伊蚊野生株和实验室传代的佛山株实施同步产卵人工诱导。结果发现使用黑色仿瓷杯作为诱卵容器、未漂白竹浆纸作为诱卵纸的同步产卵诱导效果良好，产卵动态观察结果显示：野生株产卵后第1d产卵量从3．4％提高到51％，前3d合计产卵量从30．2％升至97％，总产卵时长从18d缩短至7d；佛山株产卵后第1d产卵量从40％提高到94％，前3d合计产卵量从84％升至99．7％，总产卵时长从13d缩短至5d。对白纹伊蚊卵胚发育观察发现，白纹伊蚊卵胚经历了胚盘形成和原肠胚形成、胚带延伸、胚带收缩、背向闭合及卵胚发育结束5个发育阶段，各阶段的发育时间与埃及伊蚊不同。优化了白纹伊蚊同步产卵诱导体系，为白纹伊蚊卵相关研究提供参考。

登革病毒治疗性抗体的基础研究进展

近年来蚊媒性传染病登革热在全球呈现快速蔓延和上升流行趋势,但目前仍没有特异性的治疗药物和有效疫苗应用于临床。登革病毒(dengue virus,DENV)治疗性抗体的研发面临抗体依赖性增强效应(antibody dependent enhancement,ADE)等方面的阻滞。本文就目前DENV治疗性抗体主要靶向表位及ADE等基础研究进行综述,为治疗性抗体和疫苗深入研究提供参考。

白纹伊蚊滞育及其分子机制

白纹伊蚊是登革热、基孔肯雅热等虫媒疾病的重要传病媒介,亦是最具生物入侵能力的蚊媒,其在全球的快速播散和定殖,为登革病毒等的迅速扩延提供了必要条件,而白纹伊蚊的滞育为其适应不同气候地理条件提供了重要生物学基础,本文综述了白纹伊蚊滞育及其分子机制研究进展。

常用蚊媒监测方法概述

媒介蚊虫的种群密度和季节消长对于蚊媒传染病的防治具有重要意义,本文对蚊媒监测的常用方法进行了简单的比较分析。

伊蚊传播登革病毒媒介效能的研究进展

登革热是一种蚊媒传染病,近年来其发病人数不断上升、流行范围不断扩大。传播登革病毒的媒介主要是白纹伊蚊和埃及伊蚊,本文对伊蚊传播登革病毒媒介效能的研究进展进行了综述。

埃及伊蚊浓核病毒(AaeDV)对致倦库蚊的致病性研究

致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)是西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)、圣路易斯脑炎病毒等重要的媒介。蚊浓核病毒(Mosquito densovirus,MDV)是特异性感染蚊类的病毒,对蚊虫具有明显的致病性。为研究MDV对致倦库蚊的致病效应,我们使用不同浓度埃及伊蚊浓核病毒(Aedes aegypti densovirus,AaeDV)感染致倦库蚊不同发育阶段的幼虫、蛹与成蚊,测定其感染率与死亡率,结果证实AaeDV对致倦库蚊1~2龄幼虫、3~4龄幼虫、蛹和雌雄成蚊的感染率分别为93.33%±2.49%、66%±3.74%、2.67%±0.94%、23.33%±3.40%和24.00%±1.63%,感染率与其发育阶段有关而与性别无关。AaeDV对幼虫的杀伤效果具有剂量依赖性,且与发育阶段有关,在1×1011拷贝/mL浓度下,新孵化龄幼虫和3~4龄幼虫的死亡率高达95.33%±0.74%和61.67%±2.07%。因此AaeDV对致倦库蚊具有生物防制的潜在价值。

斯氏按蚊性别决定基因fruitless的鉴定及其性别可变剪接分析

目的 分离、鉴定和分析斯氏按蚊性别决定基因fruitless（Anstfru）.方法 通过生物信息学方法与分子生物学方法获得了Anstfru基因的全长.通过RT-PCR方法验证Anstfru的性别可变剪接模式与时间表达特点.通过与已知物种FRU蛋白比较,分析斯氏按蚊FRU蛋白结构特点与分子进化特征.结果 分离并鉴定Anstfru基因全长,其在雌、雄蚊中通过可变剪切形成性别特异性mRNA.Anstfru在1～2龄阶段幼虫阶段开始表达,表达量随后逐渐升高,在成蚊中表达量最高.FRU蛋白具有保守的BTB与锌指功能结构域区.结论 Anstfru具有保守的昆虫性别决定基因fru表达特征与功能结构域,对其深入研究将为其最终应用于蚊虫雌雄分离技术,推动昆虫不育技术（Sterile insect technique,SIT）在蚊媒传染病防治上的应用.

AaeDV编码的miRNA样分子的分析与鉴定

一些双链DNA病毒和RNA病毒可以在宿主细胞内编码自身的miRNAs分子,其在病毒感染宿主细胞与病毒复制过程中发挥重要的作用,为研究单链DNA病毒是否可编码miRNAs,我们利用VMir、miRNAFold和MaturePred软件,通过生物信息学方法预测了一株单链DNA病毒-埃及伊蚊浓核病毒(Aedes aegypti densovirus,AaeDV)编码的miRNAs分子的颈环结构前体与成熟体,并通过Northern blot与stem-loop RT-PCR方法进行了验证,结果在预测的4个茎环结构前体中,通过stem-loop RT-PCR方法验证到一个miRNA样分子AaeDVMD。该结果证实了单链DNA病毒可编码miRNAs,为进一步研究蚊浓核病毒与宿主蚊类之间的相互作用提供了新的研究方向。

刚地弓形虫入侵宿主细胞过程中棒状体蛋白16的分泌与分布

目的观察刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)不同毒力株的棒状体蛋白16(ROP16)在入侵宿主细胞过程中的分泌及分布。方法以刚地弓形虫RH株速殖子c DNA为模板,PCR扩增Tgrop16基因,克隆至p ET-32a(+)载体,在大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组蛋白Tg ROP16经纯化后免疫新西兰大白兔,制备抗Tg ROP16多克隆抗体,用蛋白质印迹(Western blotting)和间接ELISA检测抗Tg ROP16多克隆抗体的特异性和敏感性。用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测刚地弓形虫RH株和Pru株速殖子Tgrop16基因的转录水平,Western blotting分析RH株和Pru株Tg ROP16蛋白的表达量。用间接免疫荧光(IFA)检测弓形虫RH株和Pru株速殖子在入侵人包皮成纤维细胞(HFFs细胞)过程中,Tg ROP16蛋白在宿主细胞中的分泌与分布。结果制备的抗Tg ROP16多克隆抗体,Western blotting分析结果显示,能与重组蛋白Tg ROP16结合,在相对分子质量(Mr)约100 000处有一特异性条带;间接ELISA检测结果显示,抗体效价为1∶25 600。实时荧光定量PCR检测结果显示,Pru株Tgrop16基因表达量(7.786±0.206)是RH株(1.000±0.110)的7倍(P<0.05)。Western blotting分析结果显示,RH株中Tg ROP16蛋白表达量(Tg ROP16与其内参Tg Tubulin的灰度比值为0.373)较高于Pru株(Tg ROP16与其内参Tg Tubulin的灰度比值为0.232)。IFA检测结果显示,RH株和Pru株速殖子在入侵HFFs细胞前,Tg ROP16蛋白定位于速殖子的顶端复合体,速殖子入侵HFFs细胞后,Tg ROP16蛋白显示在虫体外。结论制备的抗Tg ROP16多克隆抗体特异性和敏感性高;刚地弓形虫RH株速殖子的Tg ROP16蛋白表达量高于Pru株的;两株速殖子在入侵HFFs细胞前,Tg ROP16蛋白分布于速殖子顶端复合体,在入侵宿主细胞过程中被分泌出虫体。