牛支原体疫苗研究进展

牛支原体(M.bovis)是牛的重要病原体,能够引起牛的乳腺炎、关节炎和肺炎等疾病。牛支原体已在全世界传播,对全球范围内的养牛业产生了重大不利影响。目前,由于牛支原体的耐药性有增强的趋势,同时缺乏有效的疫苗和治疗方法,这严重阻碍了牛支原体感染的控制。预防、控制甚至清除牛支原体最好的方法是使用有效的疫苗。虽然目前我国还没有获得新兽药证书的牛支原体疫苗,但相关的研究已取得了一定的进展。本文根据多年来牛支原体疫苗研究的相关资料,从牛支原体感染与免疫机制、灭活疫苗、弱毒活疫苗、基因工程疫苗四个方面进行综述,以期为今后牛支原体疫苗的研制提供思路及参考。

罗非鱼链球菌检测方法研究进展

罗非鱼链球菌在世界范围内广泛分布,是威胁全球水产养殖业的重要病原体之一。无乳链球菌(Sreptococcus agalactiae)和海豚链球菌(Sreptococcus iniae)是引起罗非鱼链球菌病的主要病原体,严重危害罗非鱼养殖业的健康发展。适合应用场景的快速、准确无乳链球菌和海豚链球菌检测技术,对于预防罗非鱼链球菌病的大规模暴发十分必要。本文总结了近年来罗非鱼链球菌检测方法研究状况,包括细菌分离培养鉴定、免疫学方法和分子生物学检测方法等,以期为罗非鱼链球菌病的诊断和预防提供技术支撑。

副猪嗜血杆菌广东分离株MLST分型研究

为了解广东地区副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)不同分离株的变异程度和菌株之间的亲缘关系。本研究对广东地区分离的21株Hps进行MLST基因分型,利用BURST方法进行分析。结果显示广东地区Hps的7个看家基因均有不同程度的变异,其中6pgd变异率达到100%,7个基因的平均变异率为52.4%,每个菌株均产生了新的ST型。基因的平均距离为0.732,IA值为0.824,与以往的研究结果比较一致。BURST分析表明,这21株菌被分成了10个类群,有几个株菌与欧洲和美洲的分离株均有亲缘关系,分离于同一个猪场同一头猪的分离株,基因型亦存在差异,证明hps不仅流行广泛,变异率也很高。

石榴皮水提物对猪源多重耐药大肠杆菌的抑菌作用研究

【目的】筛选腹泻仔猪中携毒力基因且多重耐药的大肠杆菌菌株,评估中药水提物对该菌株的抑菌活性,并探索中药抑菌机制。【方法】通过PCR方法与Kirby-Bauer(K-B)药敏纸片法评估临床大肠杆菌菌株的肠毒素基因携带情况和耐药性;通过微量肉汤稀释法评估中药水提物对多重耐药大肠杆菌菌株的抑菌活性,确定最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC);通过电导率仪以及相关试剂盒检测评估石榴皮水提物对多重耐药菌株作用不同时间后菌液电导率、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)含量及菌体内ATP含量的变化;通过SDS-PAGE和蛋白含量检测评估菌体内可溶性蛋白的含量变化;通过扫描电镜观察大肠杆菌形态变化。【结果】PCR检测14株临床大肠杆菌中肠毒素基因携带率达到78.57%,抗生素药敏试验结果显示,所有菌株至少对2种抗生素耐药,均属于多重耐药菌株。中药药敏试验结果显示,黄连、黄芩、石榴皮水提物对多重耐药菌株抑菌活性较好,其中石榴皮水提物的MIC和MBC分别为31.25和62.5 mg/mL。石榴皮水提物在1/2MIC和MIC浓度下能显著抑制质控菌株和多重耐药菌株的生长繁殖。在石榴皮水提物作用大肠杆菌3 h内,菌液电导率相比于对照组极显著上升(P<0.01)。AKP与ATP检测结果显示,与对照组相比,石榴皮水提物在作用大肠杆菌6 h内,菌液中AKP含量极显著增加(P<0.01),菌体内ATP含量极显著降低(P<0.01)。SDS-PAGE和蛋白含量检测结果显示,随着石榴皮水提物刺激时间增加,菌体内可溶性蛋白含量减少。扫描电镜结果显示,石榴皮刺激后菌体形态发生碎裂和溶解。【结论】本研究结果表明,石榴皮水提物能显著抑制多重耐药且携带肠毒素基因的大肠杆菌生长,为临床治疗大肠杆菌性仔猪腹泻提供理论参考和药物开发依据。

维生素D在猪日粮中的应用研究进展

维生素D(VD)是维持动物机体健康稳定的一种脂溶性营养素,可以通过调节钙、磷稳态以及骨骼肌发育和免疫系统等改善动物机体的健康。VD_(3)及其代谢产物25-羟基维生素D_(3)(25(OH)D_(3))在猪日粮中的应用也格外受到重视。VD可以通过调节仔猪免疫反应,抑制病原微生物感染,缓解生长受阻;可以通过其较强的抗氧化能力,改善肌肉品质;在妊娠和哺乳日粮中补充VD,可以改善母猪繁殖性能和泌乳性能,增加后代仔猪血液中25(OH)D_(3)的水平。文章就VD在仔猪、生长育肥猪和种猪生产中的应用效果进行综述,为VD在生猪实际生产中的应用提供参考。

发酵中草药对育肥猪生长性能、血液生化指标及免疫机能的影响

为研究日粮中添加发酵中草药(黄芪、板蓝根、大枣、党参、石榴皮、连翘、黄芩)对育肥猪临床表现、生产性能、血液生化指标等的影响,试验将32头100日龄、体重为(48±1)kg的“杜×长×大”三元杂交育肥猪随机均分为4组,包括对照组(饲喂基础日粮)、低剂量组(饲喂基础日粮+0.5%发酵中草药)、中剂量组(饲喂基础日粮+1%发酵中草药)和高剂量组(饲喂基础日粮+2%发酵中草药),试验周期为35 d,试验期间监测受试猪只精神状态、腹泻情况、体温、生产性能、栏舍氨气含量,试验后采集受试猪只血液用于测定血液常规和生化指标。结果表明:试验组猪只饲喂发酵中草药后精神状态、体温无明显异常(P>0.05),发酵中草药能够一定程度改善猪只腹泻和生产性能,尤其是中剂量组增重相比于对照组增加5.97 kg,提升26.49%(P<0.01),采食量相比于对照组多11.90 kg,提升了20.55%,差异极显著(P<0.01),且料肉比降低0.12(P<0.05)。栏舍氨气监测结果显示,发酵中草药连续使用28 d后,栏舍氨气含量相比于对照组下降1.48 ppm,降幅为26.24%(P<0.01);血常规检测结果显示,试验组白细胞数、淋巴细胞数、中间细胞数、粒细胞数以及血小板计数无明显变化(P>0.05),试验组相比于对照组红细胞数有轻微提升(P>0.05),低、中、高试验组猪只血液中血红蛋白含量显著提高20.49 g/L(17.22%)、24.01 g/L(20.18%)、25.48 g/L(21.41%)(P<0.01);血液生化检测结果显示,试验组谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、肌酐、尿素氮、葡萄糖含量均无明显变化(P>0.05),而总蛋白和球蛋白含量相比于对照组呈现剂量依赖性增加,高剂量组相比于对照组分别提升5.11 g/L(9.94%)和5.56 g/L(17.14%),差异显著(P<0.05)。进一步ELISA检测结果显示,试验组IgA、IgG、IgM含量均显著上升(P<0.01),高剂量组相比于对照组分别增加248.50 mg/mL(38.37%)、7.25 mg/mL(105.99%)、146.29 mg/mL(24.68%),差异极显著(P<0.01),说明基础日粮中添加发酵中草药对猪只机体无明显不良影响,且能够提升猪只生产性能、降低栏舍氨气,同时改善机体免疫功能。

新型鹅细小病毒研究进展

鸭细小病毒病是由鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)或番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)引起的一种传染病。经典MDPV和GPV毒株引起的病鸭主要症状为腹泻、脚软、渗出性肠炎,三周龄内雏鸭感染发病率和死亡率都很高。但是2008年下半年以来,福建省、浙江省、安徽省及江苏省等地的雏半番鸭和樱桃谷鸭陆续出现一种新型细小病毒病,该病发病率10%~30%,病死率低于3%,临床症状主要为软脚、短嘴和生长障碍。通过对该病病原进行全基因组测序及系统发育树分析,结果发现该病原与鹅细小病毒亲缘性很近。本文通过比较新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,N-GPV)与经典的MDPV和GPV在基因组、感染宿主范围和致病性的区别,为新型鹅细小病毒病的防控提供理论依据。

副猪嗜血杆菌毒力因子的研究进展

目前预防和控制革拉斯氏病仍然非常困难,副猪嗜血杆菌是革拉斯氏病的病原菌,定殖于健康猪群的上呼吸道中。了解副猪嗜血杆菌的病原性对于确定其如何引起发病和更好的区分"毒力"和"非毒力"菌株是必要的。副猪嗜血杆菌感染需要粘附和入侵宿主细胞,抵抗巨噬细胞的吞噬,抵抗补体结合并诱发炎症反应。鉴定这些机制过程中的毒力因子在方法上受到一定的限制。关于副猪嗜血杆菌的发病机制的最新进展集中在突变株的构建,然而目前大多数的所谓的毒力因子需要进一步鉴定。

不同谷物来源酶解蛋白对断奶仔猪生长性能、血清激素和免疫指标的影响

试验旨在研究不同谷物来源酶解蛋白对断奶仔猪生长性能、血清激素和免疫指标的影响。试验选用体重接近(13.08±0.14) kg的44日龄断奶仔猪120头,随机分为4组,每组5个重复,每个重复6头。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别用不同谷物来源酶解蛋白(大豆酶解蛋白、大米酶解蛋白和小麦酶解蛋白,等氮添加)替代基础饲粮中的发酵豆粕和部分豆粕。预试期5 d,正式试验期20 d。结果表明,与大米酶解蛋白和小麦酶解蛋白组相比,大豆酶解蛋白组仔猪前期(1~10 d)和全期(1~20 d)的平均日采食量(ADFI)显著升高(P<0.05)。全期大豆酶解蛋白组的平均日增重(ADG)显著高于大米酶解蛋白组(P<0.05)。大豆酶解蛋白组血清肿瘤坏死因子-α (TNF-α)水平显著低于对照组和大米酶解蛋白组(P<0.05)。大米酶解蛋白组血清胰岛素、生长激素、胰岛素样生长因子1、胃饥饿素和胃泌素水平均显著高于大豆酶解蛋白组和对照组(P<0.05)。研究表明,饲粮中添加大豆酶解蛋白可改善断奶仔猪生长性能,降低炎症因子水平,其效果优于大米酶解蛋白和小麦酶解蛋白。

广东省副猪嗜血杆菌的流行病学调查

为了解副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)在广东省的流行情况,采用细菌分离鉴定和PCR方法对广东省79家规模化猪场的227头疑似关节炎、多发性浆膜炎的发病猪进行了检测。结果显示,副猪嗜血杆菌阳性率达22.74%。对猪场全年发病情况进行数据统计分析,发现1~3月Hps阳性率最高。使用间接血凝试验方法对55株临床分离株进行血清学分型,结果显示5型(23.68%)最为流行,其次是12型(13.16%)和4型(10.53%)。

抗大口黑鲈蛙虹彩病毒卵黄抗体的制备及其间接ELISA检测方法的建立

大口黑鲈(Micropterus salmoides)蛙虹彩病毒(Largemouth bass ranavirus,LMBV)是我国大口黑鲈养殖中的常发病原,主要引起大口黑鲈病毒性溃疡病,制约其养殖业的健康发展。为探究卵黄抗体在防控LMBV中的潜在作用,利用LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡,制备了抗LMBV卵黄抗体;通过筛选捕获物浓度、包被条件和封闭条件,建立了抗LMBV卵黄抗体的间接酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法;使用构建的方法,评估了LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡后卵黄抗体的效价消减规律。结果表明,1‰(φ)β-丙内酯4℃作用72 h可完全灭活LMBV。间接ELISA反应中,每孔包被105 TCID50灭活病毒,37℃孵育2 h后,使用5%(φ)牛血清白蛋白37℃封闭2 h,可有效降低阴性对照组卵黄抗体的背景值;此外,所建立的检测方法与杂交醴弹状病毒卵黄抗体、未免疫的蛋黄提取物和空白细胞不存在交叉反应,特异性较高。LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡约48 d可产生特异性卵黄抗体,免疫后58 d效价升高至峰值(1∶12800),峰值水平可持续至免疫后128 d。所构建的LMBV卵黄抗体检测方法,可实时监测LMBV灭活疫苗免疫蛋鸡后的特异性卵黄抗体效价水平的变化规律,确定LMBV卵黄抗体的高效免疫程序及高免蛋收集持续期,为LMBV卵黄抗体产品的开发、应用及LMBV的防治提供了新思路。

奶牛乳房炎病原检测技术研究进展

奶牛乳房炎是危害奶牛业最重要的疾病之一,不仅给奶牛业造成了巨大的经济损失,而且其某些病原体可引起人类感染。引起奶牛乳房炎的病原多达150种,及时、准确的诊断乳房炎并检测出致病菌,对奶牛乳房炎的综合防治有着重要意义。目前,检测乳房炎病原的方法主要有细菌分离鉴定法、免疫学检测法、基因芯片和PCR检测技术等。本文就奶牛乳房炎病原检测技术进行系统阐述,旨在为奶牛乳房炎的综合防治提供参考。

多肽疫苗对猪圆环病毒2型的免疫保护效果研究

为检验猪圆环病毒2型(PCV-2)多肽疫苗对猪免疫保护的效果,采用非蛋白多糖载体耦联多肽作为抗原,以断奶仔猪为试验动物,设多肽疫苗组、常规市售Cap蛋白亚单位疫苗组和不同对照组进行免疫。用间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测其血清特异抗体(Ig G),当抗体达到一定水平时进行攻毒试验,对试验各组的临床症状、特征变化及带毒血症进行观察和动态检测,对圆环病毒易感组织进行病毒检测及组织病理学检查,最终评估该多肽疫苗的免疫效果及保护率。结果显示:多肽疫苗能够快速产生体液免疫应答,具有显著的免疫效果;攻毒后采集的各试验数据也表明该多肽疫苗具有很好的免疫保护作用。

广东地区健康猪群和发病猪群猪链球菌流行病学调查分析

为了解广东地区猪群中猪链球菌(Streptococcus suis,SS)的流行情况,本研究对在广东地区养殖场采集的228份发病猪群样品及698份健康猪群样品(包括455份鼻拭子样品及243份屠宰场扁桃体样品)进行了SS携带情况的统计分析。结果显示,发病猪群SS的阳性率为82.02%(187/228),健康猪群的SS阳性率为42.20%(192/455),其中屠宰场屠宰猪群的SS阳性率为32.10%(78/243)。将从发病猪群分离到的187株SS及健康猪群(含养猪场和屠宰场)分离得到的154株SS进行血清型定型分析,结果显示,发病猪群共检测到11个血清型,包括SS1、SS2、SS3、SS4、SS7、SS8、SS9、SS16、SS19、SS29和SS31型,主要以SS2、SS3和SS19型为主,分别占16.58%、9.63%和7.49%;其次为SS7型(6.95%)和SS9型(5.34%),未定型菌株占48.66%;健康猪群共检测到17个血清型,包括SS2、SS3、SS4、SS5、SS7、SS8、SS9、SS10、SS12、SS15、SS16、SS17、SS19、SS21、SS23、SS29和SS30型,主要以血清型SS2和SS29型为主,分别占18.83%和14.94%,其次为SS16型(6.50%),未定型菌株占31.82%。

广东地区猪群中猪链球菌流行病学调查分析

为对猪链球菌(SS)病的防控提供参考依据,本研究对广东地区养殖场健康猪群采集的455份样品,屠宰场采集的243份样品和疑似SS发病猪群采集的228份样品进行了SS携带情况统计分析。结果显示,健康猪群、屠宰场屠宰猪群及发病猪群SS的阳性率分别为42.20%(192/455)、32.10%(78/243)及82.02%(187/228)。血清型定型结果显示,健康猪群共检测到17个血清型,主要以2型和29型为主,分别占18.83%(29/154)和14.94%(23/154),其次为16型,占6.50%(10/154),未定型菌株占31.82%;发病猪群共检测到11个血清型,主要以2型(16.58%)、3型(9.63%)和7型(6.95%)为主,其次为9型(5.34%),未定型菌株占48.66%。对比发现健康猪群和发病猪群携带SS的血清型有所差异,可为临床SS病的预防防控提供参考依据。

2018-2020年广东鸭圆环病毒流行病学调查

为调查广东省鸭圆环病毒(DuCV)流行情况,本研究根据已报道的PCR方法,对2018年12月-2020年7月采自广东省9个不同地区的910份临床鸭组织病料进行鸭圆环病毒(DuCV)、大肠杆菌(E.coli)、腺病毒(FAV)、细小病毒(DPV)、禽流感病毒(AIV)和鸭坦布苏病毒(DTUMV)检测。结果表明:DuCV总检出率为23.18%(211/910);2019年第三季度较高,为34.61%;DuCV单重感染为16.24%(32/197),二重感染和三重感染分别为62.43%(132/197)和21.31%(42/197)。研究结果表明,DuCV在广东省鸭养殖场中存在不同程度的流行,夏季和冬季为多发,DuCV的感染会造成免疫抑制进而导致其他病原的感染,加重疾病的严重程度和死亡率。本研究调查结果为广东省养殖户了解广东地区DuCV的流行态势提供可支撑的数据。

细胞适应性猪流行性腹泻病毒部分基因序列分析及其致病力研究

对已经适应Vero细胞生长的猪流行性腹泻病毒CHYJ130330亲本代、第38代、第60代、第80代和第100代病毒的S、M、N基因分别进行测序及序列比对分析,结果显示M和N基因具有高度的保守性,多次传代后未发生氨基酸的改变;S基因在第38代时未发生任何突变,第100代时发生了17个核苷酸的点突变,导致15个氨基酸发生改变。动物试验显示,第60代病毒仍能引起仔猪呕吐、腹泻等症状,而第100代的病毒毒力已经减弱。S基因的突变是否与病毒的毒力减弱有关还需进一步试验验证。

血清2型鸭疫里默氏杆菌铁载体受体蛋白突变体的构建及生物学特性研究

铁离子是致病菌重要的生长因子,研究表明铁离子摄取系统调控鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)铁离子的代谢,是鸭疫里默氏杆菌重要的致病因子之一。为了研究RA外膜ATP依赖的铁载体受体蛋白(siderophore receptor protein,SRP)在铁离子代谢中的作用,以及SRP与细菌毒力之间的关系,本研究构建了SRP基因的突变株,通过TSB培养基和限铁环境中的生长曲线比较,结果显示突变株在限铁环境中比TSB培养基生长慢约10 h,表明SRP基因是鸭疫里默氏杆菌在体内维持铁离子代谢至关重要的成份。动物试验表明突变菌株比野生型菌株晚24 h开始死亡,说明突变菌株在体内增殖并达到致死数量的速度明显要晚于野生型,从而提示SRP是鸭疫里默氏杆菌重要的毒力因子之一。

猪干扰素α质粒-PLL聚合体对猪PRRSV弱毒疫苗免疫增强作用研究

本文探讨聚合体形式的猪干扰素α真核表达质粒(p VAX1-PIFNα)对猪PRRSV弱毒疫苗免疫作用的增强作用。在猪免疫PRRSV弱毒疫苗的同时,注射p VAX1-PIFNα重组表达质粒与多聚赖氨酸(PLL)的聚合体(PLL-p VAX1-PIFNα),以研究聚合体状态的干扰素对PRRSV免疫的增强作用。将分泌表达干扰素α的重组真核表达质粒p VAX1-PIFNα与PLL聚合,同时免疫PRRSV弱毒疫苗和PLL-p VAX1-PIFNα聚合体,使用ELISA试剂盒检测PRRSV中和抗体;另外,分离培养猪外周血白细胞(PBMC)进行体外试验,分析PLL-p VAX1-PIFNα聚合体刺激淋巴细胞后IFN-γ的分泌情况。中和抗体的结果表明,PLL-p VAX1-PIFNα的使用可明显提高PRRSV活疫苗诱导产生PRRSV中和抗体的能力;细胞试验的结果表明,经PLL-p VAX1-PIFNα刺激后,明显提高了淋巴细胞分泌表达IFN-γ的水平。在PRRSV疫苗免疫中,聚合体状态的猪IFNα重组表达质粒可有效提高机体的体液免疫和细胞免疫水平,这一结果也为干扰素或其他重组蛋白在疫苗免疫中的应用提供了新的思路。

猪传染性胃肠炎病毒入侵细胞及逃避天然免疫机制研究进展

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)是全球范围内造成仔猪腹泻的原因之一,且常造成混合感染和继发感染,仔猪死亡率可达100%。猪氨肽酶N是TGEV的特异性受体,唾液酸对TGEV有保护作用,如保护TGEV通过胃酸时不会失活。TGEV可以诱导I型干扰素在肠道产生,结构蛋白M、E和非结构蛋白nsp14在其中发挥着重要作用。TGEV已经发展出一系列策略来对抗宿主天然免疫反应,包括基因组中的GAIT样结构、ORF7、非结构蛋白nsp1等自身因素,以及操纵宿主细胞途径,如非折叠蛋白反应。