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哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因克隆、表达及DNA疫苗的免疫效果 被引量:8
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作者 黄浦江 黄郁葱 +3 位作者 简纪常 吴灶和 鲁义善 张雪利 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1839-1847,共9页
参照GenBank上登录的哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因序列,设计引物扩增OmpW的开放阅读框,序列分析结果显示该基因全长645bp。将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌BL21中成功表达出带His-tag的融合蛋白,融合蛋白分子量... 参照GenBank上登录的哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因序列,设计引物扩增OmpW的开放阅读框,序列分析结果显示该基因全长645bp。将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌BL21中成功表达出带His-tag的融合蛋白,融合蛋白分子量约为43.8ku,且主要以包涵体形式存在。优化的表达条件为37oC,IPTG浓度0.1mmol/L,诱导时间5h。将纯化的融合蛋白免疫SPF昆明小鼠制备多克隆抗体,ELISA方法检测抗体效价达1:30000,Western.Blot结果表明鼠抗OmpW血清能与诱导后的重组蛋白发生特异反应,提示OmpW可能是哈维氏弧菌的一种重要保护性抗原。为进一步研究哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因DNA疫苗对红笛鲷的免疫保护效果,构建了真核表达重组质粒pcDNA-OmpW,然后将真核质粒免疫接种红笛鲷。PCR结果显示,免疫接种后第7—28天,在红笛鲷的肌肉、头肾、肝脏和脾脏组织中均存在质粒分布;RT.PCR结果显示,免疫接种后第7~28天,红笛鲷上述组织均有目的基因的表达。ELISA结果表明,红笛鲷体内血清产生了抗OmpW蛋白的高效价抗体。Western.Blot分析表明,DNA疫苗免疫后红笛鲷体内表达了相应的目的蛋白,并诱导产生了相应抗体。攻毒实验结果表明,免疫保护率高达60%,可见pcDNA-OmpW可作为红笛鲷预防哈维氏弧菌感染的有效候选疫苗之一。 展开更多
关键词 哈维氏弧菌 外膜蛋白 OmpW 免疫原性 DNA疫苗
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