miRNA-155靶向SOCS5对无乳链球菌诱导罗非鱼脑星形胶质细胞炎症的影响

【目的】探究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)微小RNA-155(miR-155)和SOCS5(Suppressor of cytokine signaling 5)的靶向关系,并研究其对无乳链球菌诱导的尼罗罗非鱼脑星形胶质细胞炎症反应的影响。【方法】通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测感染无乳链球菌后尼罗罗非鱼脑星形胶质细胞中miR-155、SOCS5及炎症因子表达变化规律,生物信息学方法预测miR-155与SOCS5的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验进行靶基因验证,qRT-PCR方法分析过表达和敲降miR-155对SOCS5基因表达的影响和miR-155对SOCS5的调控机制。【结果】无乳链球菌诱导尼罗罗非鱼脑星形胶质细胞中miR-155表达量极显著上升(P<0.001),4 h达到最高值。SOCS5表达量极显著上升(P<0.01),6 h达到最高值。促炎症因子IL-1β、TNF-α表达显著升高(P<0.0001),抑炎症因子IL-10、TGF-β表达显著下调(P<0.05)。构建尼罗罗非鱼SOCS53′UTR野生型和突变型荧光素酶报告载体。双荧光素酶实验结果表明miR-155极显著抑制(P<0.0001)SOCS5野生型质粒表达。突变靶位点后,miR-155对SOCS5的抑制作用极显著降低(P<0.0001),抑制效果减弱53.7%。过表达miR-155能显著抑制(P<0.001)SOCS5表达,而抑制miR-155后SOCS5表达显著上升(P<0.05)。转染miR-155抑制物6 h和12 h后,miR-155表达量显著下调(P<0.01),12 h表达量最低,而SOCS5表达量显著上调(P<0.05),在12 h达到最高值。【结论】miR-155通过靶向负调控SOCS5的表达参与无乳链球菌诱导的尼罗罗非鱼脑星形胶质细胞炎症反应,通过下调SOCS5表达影响炎症变化。

月桂酸单甘油酯对珍珠龙胆石斑鱼源海豚链球菌体外抑菌活性及其作用机制

【目的】研究月桂酸单甘油酯(Glycerol monolaurate,GML)对海豚链球菌(Streptococcus iniae)的体外抑菌效果及其作用机制,为鱼类养殖中防控海豚链球菌感染提供新的依据。【方法】以珍珠龙胆石斑鱼(♀Epinephelus fuscoguttatus×♂Epinephelus lanceolatus)源海豚链球菌为研究对象,运用微量二倍稀释法测定GML对海豚链球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并通过生长曲线、电导率、菌体形态变化、菌体蛋白表达、生物被膜形成和毒力相关基因转录的测定评估GML对海豚链球菌的潜在作用机制。【结果】GML对海豚链球菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度别为16 mg/L和32 mg/L;抑制作用呈现浓度依赖性,浓度越高抑制效果越强,且在MIC浓度作用下对菌体生长及生物被膜形成抑制作用最强;不同浓度GML作用后的菌体均能观察到细胞排列松散、大小不均一、胞间间距增大,并出现显著凹陷、皱褶等不同程度的损伤。此外,在1/2 MIC与MIC浓度GML处理后,菌悬液电导率明显上升,表明在此浓度下药物导致菌体出现一定损伤;1/4 MIC浓度促进蛋白条带增多,而MIC浓度则呈现出抑制效应引起蛋白条带变淡甚至消失。【结论】月桂酸单甘油酯对珍珠龙胆石斑鱼源海豚链球菌具有良好的体外抑菌活性。其主要作用途径是通过破坏细胞结构完整性,导致内容物流失,抑制细菌的生长及生物被膜形成,影响细菌毒力基因及蛋白表达等方面发挥抗菌作用。