汉族、维族和藏族D_(el)型检测及Rh表型分布特征

目的使用吸收放散微柱凝胶法对Del型个体D抗原相对定量;研究部分汉族、维族和藏族RhD(-)人群Rh表型分布特征;研究部分汉族Del型个体Rh表型分布特征。方法采用Ig M单克隆抗体鉴定Rh表型,改良间接抗球蛋白试验(IAT)确认RhD(-)标本,吸收放散微柱凝胶法检测Del型。结果汉族、维族和藏族RhD(-)个体Rh表型分布差异有统计学意义(χ2=17.04,P<0.05);维族和汉族、维族和藏族RhD(-)标本Rh表型分布差异有统计学意义(χ2=25.031,P'<0.05;χ2=21.761,P'<0.05),但汉族和藏族之间比较差异无统计学意义(χ2=1.337,P'>0.05)。汉族和维族RhD(-)个体在Cc表型分布方面差异有统计学意义(χ2=19.757,P<0.05)。222例随机非血缘关系汉族RhD(-)标本检出Del型43例(19.37%),55例随机非血缘关系维族RhD(-)标本检出1例Del型(1.82%),7例藏族RhD(-)标本未检出Del型。汉族Del型阳性个体中携带Rh C抗原比例(93.02%)远远高于Del型阴性个体中携带Rh C抗原比例(25.14%),2者比较差异有统计学意义(χ2=67.618,P<0.05)。结论吸收放散微柱凝胶法可以检测Del型及对D抗原进行相对定量;中国汉族、维族和藏族RhD(-)人群Rh表型分布存在明显差异;Del型与Rh C抗原存在关联。

抗-D产生与HLA-DRB1基因相关性研究

目的研究抗-D产生与HLA-DRB1基因的相关性。方法随机挑选297名汉族志愿献血者,采用PCRr SSO反向杂交Luminex高分辨分型技术对其进行HLA-DRB1基因分型,同时采用血清学方法进行RhD、C、c、E、e抗体检测;并以2012年中华造血干细胞库HLA分型资料作为正常对照。结果抗体组与对照组相比,DRB1*07∶01等位基因频率显著升高(P<0.05),其它等位基因频率在2组间的差异未发现有统计学意义。结论 DRB1*07∶01等位基因可能与RhD抗体产生有关。

利用基因定点突变技术构建RHD变异型克隆的初步研究

目的利用基因定点突变技术构建RHD变异型克隆,克服RHD变异型克隆难以获得的问题。方法提取总RNA并反转录后,扩增获得RHD和RHCE混合c DNA,从克隆质粒中筛选RHD;根据弱D12、弱D25和弱D33的特异性突变位点设计引物,分别进行PCR扩增反应,诱导目的基因突变,Dpn I酶处理PCR产物,转化后测序验证。结果克隆测序的结果显示,质粒中分别存在830A、341A和520A的突变,证实已经通过基因定点突变技术成功获得了弱D12、弱D25和弱D33的克隆。结论通过基因定点突变可以改造野生型RHD-c DNA,获得变异型的RHDc DNA,为血型研究打开新的路径。