银杏叶提取物注射液药效再评价研究

目的开展银杏叶提取物注射液药效再评价研究。方法建立大鼠急性血瘀模型,观察血液流变学及凝血功能等指标;采用双光子活体成像技术,对小鼠脑血管闭塞-溶栓过程进行实时监测。结果银杏叶提取物注射液在血液流变性、凝血功能、血管内皮功能、炎症应答及氧化应激等方面具有调控作用;能够促进脑部微血管栓塞部位的血液流动,加快栓块溶解。结论银杏叶提取物注射液可有效防治脑部和周围血流循环障碍。

银杏叶提取物注射液质量再评价研究

目的以银杏叶提取物注射液为研究载体,开展质量再评价研究,提高其质量控制水平。方法采用HPLC-DAD-ELSD串联技术,以Agilent zorbax SB C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱;以乙腈-四氢呋喃-0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱,柱温25℃,流速1.0 m L·min-1;DAD检测波长254nm;ELSD N2压力3.5 bar,漂移管温度50℃,增益值11。结果构建了银杏叶提取物注射液的HPLCDAD-ELSD指纹图谱,将其水溶性成分、黄酮类成分和内酯类成分反映在一张色谱图上;采用对照品对照及UFLC-Triple TOF-DAD-MS/MS鉴定,确认和指认了指纹图谱25个共有峰中的20个成分,已知成分峰面积之和占共有峰总峰面积的90%以上。结论本研究提升了银杏叶提取物注射液的质量控制水平,具有推广应用价值。

能量色散X射线荧光光谱在中药材分析中的研究进展

能量色散X射线荧光光谱(EDXRF)是一种对物质中元素进行定性、定量分析的方法。本文在文献调研的基础上阐述了EDXRF技术的基本原理,通过与常用光谱技术进行简单比较分析其优缺点,同时结合中药研究的特点和需求,简述其在中药材元素含量测定、中药材重金属元素含量检测、中药材产地溯源和中药材真伪鉴别等方面的应用现状,并对未来的发展趋势进行展望,以期为该技术更好地用于中药材分析研究提供参考。

基于UFLC-Triple TOF-MS/MS技术的银杏叶提取物注射液化学物质基础研究

目的采用超快速高效液相色谱串联四级飞行时间质谱(UFLC-Triple TOF-MS/MS),对银杏叶提取物注射液的化学成分进行系统研究。方法采用Agilent zorbax SB C_(18)色谱柱(3 mm×150 mm,3.5μm),以含0.1%甲酸的乙腈和0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱,流速0.3 m L·min^(-1);采用高分辨三重四极杆飞行时间质谱,分别在正、负离子模式下进行检测。结果通过与对照品对照,确证了18个化合物,通过准确分子量和裂解碎片分析,指证了39个化合物,共57个化合物;其中包括21个水溶性成分、30个黄酮类成分和6个内酯类成分。结论本研究全面系统地揭示了银杏叶提取物注射液的化学物质基础,为提升银杏叶提取物注射液质量评价体系、阐明其药效物质提供了依据。

采用iTRAQ技术研究柚皮苷对烟熏所致小鼠急性肺部炎症相关蛋白表达的影响

采用i TRAQ技术,分析柚皮苷对烟熏诱导急性肺部炎症小鼠肺组织中蛋白表达的影响。20只Balb/c小鼠随机分为模型组和柚皮苷组,每组10只,烟熏诱导急性肺部炎症。柚皮苷组每天于烟熏前按60 mg/kg灌胃给药,模型组给予等量生理盐水。最后一次烟熏16 h后处死小鼠,取肺组织进行i TRAQ蛋白质组学检测,通过定性定量分析筛选差异表达蛋白。共鉴定小鼠肺组织蛋白3 528个,从中找出与柚皮苷作用相关的差异表达蛋白64个,其中表达上调的蛋白29个,下调蛋白35个。经生物信息学分析发现,这些蛋白主要与炎症介质一氧化氮释放和促氧化因子同型半胱氨酸代谢相关,可能是柚皮苷发挥减轻肺部炎症及肺组织损伤、促进炎症消退作用的重要环节;钙调蛋白介导的信号转导途径、表观遗传调控及核糖体蛋白功能调节也与柚皮苷的抗炎作用有密切联系。实验结果显示Arg1、Bhmt、Gnmt等蛋白有可能为柚皮苷抗肺部炎症作用的重要分子靶点,并为阐明柚皮苷的抗炎作用机制提供了基础。

丹红注射液中丹参、红花不同配比与药效的相关性研究

目的研究丹红注射液中丹参、红花不同配比与药效的相关性,阐明药材的贡献、主次及相互作用。方法在丹红注射液原处方丹参、红花配伍比例的基础上,构建丹参、红花不同配比的差异样品;比较各差异样品活血化瘀药效的差别;运用灰色关联分析、析因分析等方法,研究丹参、红花不同配比与药效间的相关性,依据两者的交互作用阐明丹参、红花对药效的贡献。结果丹参为主要药效贡献者,与红细胞聚集性、血小板聚集密切相关;红花则在调节凝血功能方面发挥作用;丹参、红花间存在显著的交互作用且在原处方比例下整体药效最佳。结论丹红注射液中丹参、红花药材配伍科学合理。

中药谱效学研究过程中差异样品的构建及应用

提出中药谱效学研究过程中差异样品的构建方法:将每味药材看作试验因素,根据原中药组方比例确定各味药材的投料量变化范围,并在该范围内确定合适的水平数;采用均匀设计法,根据因素数、水平数选择合适的均匀设计表,设计几组不同的药材配比;按照标准工艺流程制备差异样品,并用指纹图谱进行监控,采用聚类分析法验证不同差异样品之间的差异性。该方法不同于以往的化学成分逐一分离、再组合的方式,而是从整体上对各味药材用量进行调整,具有实现难度小、适用性高的优点,符合中药的混合性、整体性、统一性特点。

基于纳升高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱超高分辨质谱技术研究脑心通胶囊中动物药的蛋白质

目的建立脑心通胶囊中动物药的蛋白质类成分的分析方法。方法以脑心通胶囊及其投料所用的地龙、水蛭、全蝎动物药材(分别对应通俗环毛蚓Metaphire vulgaris Chen、宽体金线蛭Whitmania pigra Whitman、东亚钳蝎Mesobuthus martensii Karsch)为研究对象,采用SDS-PAGE电泳技术分离脑心通胶囊及3味动物药材的总蛋白,并进行胶内酶解,同时对脑心通胶囊和全蝎药材的总蛋白进行直接酶解;利用纳升高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱超高分辨质谱技术研究脑心通胶囊中的蛋白质。采用Proteome Discoverer软件,检索环节动物门(Annelida.fasta)和节肢动物门(Arthropoda.fasta)蛋白质数据库以鉴定蛋白质。结果在9批脑心通胶囊中有5个清晰的蛋白质条带稳定重现,其相对分子质量分别在45、40、30、25、20 kDa左右。在脑心通胶囊总蛋白中共鉴定到28个与动物药相关的蛋白质,这些蛋白质大多与细胞结构、能量代谢、物质运输有关。对胶囊SDS-PAGE中5个条带的蛋白质分别进行分析,各个条带中部分蛋白质可对应归属到3味动物药材;且新鉴定得胍乙基磷酸丝氨酸激酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶等蛋白质,前者可能与抗凝血或溶栓活性有关。结论基于超高分辨质谱技术及蛋白质组学的研究方法用于脑心通胶囊中3种动物药的蛋白质分析,本研究弥补了脑心通胶囊中蛋白类成分研究的空白,为阐明其动物药的物质基础以及进一步研究该胶囊药效与物质基础关联性提供了科学支持。

基于生物信息学和分子对接技术研究当归六黄汤治疗溃疡性结肠炎潜在活性成分及分子机制

目的采用生物信息学和分子对接技术,探讨当归六黄汤(DGLHD)治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法采用公共数据库(TCMSP、DrugBank和UniProt)寻找当归六黄汤的有效活性成分和相应的靶基因,构建当归六黄汤活性成分-靶蛋白相互作用网络。基于DisGeNET数据库、Genecards数据库和DrugBank数据库检索溃疡性结肠炎相关基因,获取当归六黄汤与溃疡性结肠炎的交集靶点基因。利用STRING在线数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用关系(PPI)分析,获取核心靶点基因。采用Metascape在线数据库进行基因本体(GO)功能注释及KEGG通路富集。通过DiscoveryStudio2016进行分子对接,确定药物活性成分与核心靶标相互作用的分子基础。结果共筛选出82种活性化合物和132个交集靶基因。核心靶点基因涉及信号传导与转录激活因子3(STAT3)、TP53、AKT1、MAPK1、JUN和血管内皮生长因子A(VEGFA);通路富集主要为“肿瘤信号通路”“糖尿病并发症中晚期糖基化终产物及其受体(AGE-RAGE)信号通路”“内分泌抵抗”“NF-κB信号通路”“Th17细胞分化”。分子对接结果表明,当归六黄汤核心活性成分可以通过氢键等相互作用与核心靶基因形成稳定的对接模式。结论基于生物信息学和分子对接技术,筛选出当归六黄汤治疗溃疡性结肠炎的活性成分、核心靶点及主要信号通路,为当归六黄汤治疗溃疡性结肠炎提供了新的理论基础。

基于文献计量软件对我国药材道地性研究进展的可视化分析

目的归纳分析2000-2021年间关于我国道地药材领域的研究文献,了解我国道地药材的发展演变路径、研究热点和未来发展方向。方法应用CiteSpace软件,以中国知网、万方、维普等数据库作为检索库,对2000-2021年药材道地性相关领域的核心期刊文献收集,进行计量分析。结果共计纳入有限文献2093篇,本领域发文量整体呈现持续增加的趋势;指纹图谱、中药资源、本草考证、HPLC、质量控制等是该领域的主要研究方向;中国中医科学院是最主要的研究机构,其他研究机构多分布于道地药材产区,但各机构间交流合作较少;研究领域形成了以黄璐琦、郭兰萍和陈士林为核心的3个作者群;近年来,研究者关注的热点方向主要为生态种植、炮制、规格等级、经典名方和电子鼻等。结论研究机构间需加强合作交流,增强技术发展和创新;着力开发经典名方,本草考证道地药材,并建立指纹图谱,为经典名方的整体质量控制和评价提供指导。

夏桑菊浸膏对高渗诱导干眼模型人角膜上皮细胞保护机制研究

目的研究夏桑菊浸膏对高渗诱导下人角膜上皮细胞的保护作用及机制。方法采用NaCl构建高渗模型,通过MTS法检测细胞活力;利用RT-qPCR及酶联免疫吸附测定法检测相关炎症因子IL^(-1)β、IL-6、IL^(-1)8的表达;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐荧光探针法检测细胞内活性氧水平。结果对比对照组,模型组600 mOsm·L^(-1)中细胞活力明显下降,经夏桑菊浸膏处理后,细胞活力明显上升;在炎症指标中,与对照组相比,模型组450 mOsm·L^(-1)细胞中IL^(-1)β、IL-6及IL^(-1)8的分泌水平与IL^(-1)β表达水平明显升高。夏桑菊浸膏处理细胞后,以上指标较450 mOsm·L^(-1)模型组明显下降;抗氧化研究中,模型组450 mOsm·L^(-1)中的细胞活性氧水平明显上升,夏桑菊浸膏处理后,细胞活性氧水平明显降低。结论夏桑菊浸膏对高渗诱导下的人角膜上皮细胞活力下降起到抑制作用,在高渗环境下具有保护人角膜上皮细胞的能力,保护作用通过抑制炎症因子产生和活性氧水平升高实现。

生发片生产过程质量传递研究

研究利用生发片指纹图谱、含量测定方法针对生发片中主要成分二苯乙烯苷、特女贞苷和大豆苷的指纹图谱、含量测定研究生发片生产过程有效成分的传递性,探讨生发片生产过程中有效成分的质量传递,通过生发片浸膏、干膏粉、颗粒、素片及成品中的主要有效成分含量的研究,说明该产品工艺制备的浸膏、干膏粉、颗粒、素片及成品具有良好的物质传递相关性。

肠道菌群与代谢紊乱及相关疾病关系的研究进展

代谢紊乱是身体对一种或多种物质的代谢出现供需不平衡的病理状态,可表现为肥胖、糖尿病、高脂血症等疾病,且会诱发动脉粥样硬化、高血压、非酒精性脂肪性肝病等多种相关疾病,病理机制十分复杂。肠道菌群对人体健康有重要影响,其能够通过产生共代谢物、改变肠道通透性、调节内分泌、干预炎症免疫等途径参与宿主的物质代谢过程,从而与代谢紊乱所致疾病的发生发展产生密切联系。但肠道菌群与代谢紊乱疾病之间的具体机制尚未完全阐明,一定程度上限制了相关疗法的应用。因此,未来需深入研究肠道菌群与代谢紊乱疾病的明确机制靶点,从而开发出具有实际推广价值的针对性疗法。

化橘红成花过程挥发油成分的动态变化及活性分析

本文旨在探索化橘红花挥发油成分的动态变化,为化橘红花的综合利用和其挥发油产品的开发提供理论参考。以现蕾期、花苞期、盛开期和谢花期的化橘红花新鲜样品为材料,水蒸气蒸馏法提取挥发油,采用气质联用法(GC-MS)测定挥发油成分,通过构建“化橘红花-活性成分-靶点”网络图对挥发油活性进行分析。结果表明化橘红花挥发油成分以烯类(56.84%~70.19%)和醇类(21.33%~38.34%)物质为主,包括γ-松油烯、D-柠檬烯、芳樟醇、法尼醇、橙花叔醇和β-蒎烯。烯类物质在成花过程中呈现出逐渐降低的趋势,醇类物质表现出先增多再减少的趋势,盛开期达到峰值。现蕾期、花苞期和盛开期的挥发性物质总量保持在较高水平,谢花期显著降低。法尼醇、芳樟醇、α-水芹烯、橙花叔醇和香茅醇等挥发性成分的抑菌和抗氧化活性较高。各个花期的化橘红花均含有丰富的挥发油,具有开发应用价值。

夏桑菊防治干眼症的网络药理学机制及实验验证

采用网络药理学、分子对接及细胞实验探究了夏桑菊防治干眼症的作用机制。通过超快速高效液相色谱串联三重四极杆飞行时间质谱(UFLC-Triple-TOF-MS/MS)分析夏桑菊的化学成分,借助网络药理学相关数据库与分析平台预测夏桑菊有效成分靶点及检索疾病相关靶点,并利用cytoscape软件及STRING平台构建网络。采用DAVID数据库进行GO和KEGG通路富集分析,将关键靶点前4位与其对应活性成分进行分子对接。体外构建干眼症高渗模型验证核心靶点。共鉴定出61种化学成分,筛选得到24种有效成分可能与干眼症相关的315个潜在的靶点蛋白具有相互作用;筛选出夏桑菊作用的关键活性成分迷迭香酸、蒙花苷及绿原酸等和关键靶点为TNF-α、Caspase1、IL-6以及IL-1β;富集结果表明,夏桑菊治疗干眼症靶点主要集中在AGE-RAGE、TNF等多个信号通路。3种有效成分在细胞实验中不仅显著抑制人角膜上皮细胞活性降低,提升高渗下细胞的移行能力,而且有效抑制高渗诱导下人角膜上皮细胞中Caspase1、IL-1β基因的表达及TNF-α蛋白分泌水平。结果表明夏桑菊中的迷迭香酸、蒙花苷及绿原酸3种主要的活性成分,发挥了高渗诱导下对人角膜上皮细胞保护及修复作用,降低了细胞TNF-α蛋白水平及Caspase1、IL-1βmRNA的相对表达。

基于UPLC-Zone TOF-MS/MS联合网络药理学探讨脉复生防治NAFLD作用

依据脉复生的化学成分,采用网络药理学、分子对接技术、构建NAFLD小鼠模型,探究脉复生防治NAFLD的作用机制。通过UPLC-Zone TOF-MS/MS对脉复生全成分进行检测;借助Swiss生物信息学研究平台获取活性成分和靶点,在OMIM、Disgenet数据库筛选NAFLD疾病靶点,对交集靶点进行PPI分析;在Metascape网站进行GO与KEGG富集分析,对核心靶点与活性成分展开分子对接;采用HFD诱导C57BL/6J小鼠构建NAFLD模型进行核心靶点验证;指认得到130个化学成分,筛选得到54个活性成分与176个可能作用于NAFLD的潜在靶点;根据Degree值对排名前10的成分与靶点进行分子对接实验,对结合能最优的对接模型TNF与Quercetin、IL-17与Asiatic acid、IL-1β与Quercetin进行可视化分析;筛选炎症因子和脂肪代谢相关基因进行qPCR测序。富集分析表明脉复生治疗NAFLD与脂肪酸转化、脂质代谢正向调节等生物过程相关,涉及AGE-RAGE、HIF-1、IL-17等信号通路;与对照组相比,模型组血清学检测ALT、TG、LDL-C指标上升并且HDL-C指标下降(P<0.05);与模型组相比,脉复生给药组和辛伐他汀组能够降低小鼠体质量、肝脏和脂肪质量占比(P<0.05),降低血清中TNF-α、IL-1β和IL-17的含量和mRNA表达,在高剂量时具有显著性差异(P<0.01);与对照组相比,脉复生给药组能够通过调节脂质代谢相关基因的表达,降低肝脏脂质堆积,缓解肝脏脂肪变性。

柚皮苷及其苷元柚皮素的呼吸系统药理作用研究概述

柚皮苷及其苷元柚皮素属于二氢黄酮类化合物,广泛存在于各类植物或各种中药中,具有多种生物活性,包括抗炎、抗氧化、改善糖脂代谢紊乱、神经保护、抗肝损伤、抗骨质疏松等。近年来,关于柚皮苷和柚皮素的呼吸系统药理作用备受关注。本团队系统研究了柚皮苷和柚皮素的镇咳、祛痰、抗肺部炎症等药理作用,并将柚皮苷研制成国家一类新药,目前已完成了Ⅰ期临床试验研究。本文就柚皮苷和柚皮素的镇咳、祛痰、抗肺部炎症、抗肺纤维化等呼吸系统药理作用的研究进展做一综述,以期为相关研究和临床应用提供参考。

复方血栓通胶囊对弥散性血管内凝血模型大鼠炎症抑制作用及机制研究

目的研究复方血栓通胶囊对弥散性血管内凝血(DIC)模型大鼠血管内皮功能调节及炎症抑制的作用,并揭示其抑制炎症反应的作用机制。方法采用尾静脉注射脂多糖(LPS)诱导DIC大鼠模型,考察药物处理对模型大鼠体内内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)浓度及诱导型一氧化氮合酶(i NOS)活力的影响;考察药物处理对模型大鼠体内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)浓度的影响,研究其与炎症相关NF-κB信号转导通路的关系。结果 DIC模型大鼠体内NO、ET-1浓度均显著提高,NO/ET-1比值显著降低,即LPS导致了血管内皮损伤。复方血栓通胶囊能够显著改善模型大鼠体内NO/ET-1,其机制与抑制i NOS活力相关;能够显著抑制模型大鼠体内TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、MCP-1升高,其机制与抑制IκB-α的降解及p65的入核,即抑制NF-κB激活相关。结论复方血栓通胶囊能够改善血管内皮功能、抑制炎症反应,为进一步弄清其抗血栓、保护心血管的作用机制提供了依据。

同时测定人血浆中柚皮苷、柚皮素质量浓度的HPLC-MS/MS方法学

采用HPLC-MS/MS建立了同时测定人血浆中柚皮苷、柚皮素质量浓度的方法。以异槲皮苷为内标,血浆样品经乙酸乙酯萃取后,以Agilent Poroshell 120 EC-C18(3.0 mm×30 mm,2.7μm)为色谱柱,甲醇-水(体积比45∶55,均含φ=0.1%甲酸)为流动相,流速为0.4 m L·min-1;采用电喷雾负离子(ESI-)、多反应离子检测(MRM)模式检测,用于定量分析的离子对分别为柚皮苷m/z 579.1/270.8、柚皮素m/z 270.9/150.7、异槲皮苷(内标)m/z 463.1/299.8。经方法学验证,柚皮苷、柚皮素分别在0.251 0~100.4、0.503 0~201.2ng·m L-1质量浓度范围内线性关系良好,批间、批内精密度均符合要求,提取回收率高。结果表明,HPLC-MS/MS法灵敏度好、准确性高、重现性好,适用于测定人血浆中柚皮苷、柚皮素质量浓度。

实时直接分析质谱法在中药质量研究中的应用进展

中药化学成分组成是其物质基础,针对中药中有效成分、特征成分及有害物质的定性、定量分析,是阐明中药药效成分和鉴定其品质的主要方式。实时直接分析质谱(direct analysis in real time-mass spectrometry,DART-MS)技术无需或仅需简单的样品处理,具有快速、直接、现场检测等特点,将其引入到中药质量研究,有助于评价中药质量的稳定性和安全性。通过对DART-MS离子源结构、原理及在中药质量研究中的应用进行综述,为该技术在中药领域的应用提供参考。