塞内卡病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为加强塞内卡病毒(SVA)在不同宿主的诊断及流行病学监测与防控,根据GenBank中发表的SVA VP1基因区域设计一对特异性引物和带有TaqMan发光基团标记的探针,构建重组阳性质粒并用作建立实时荧光定量RT-PCR方法的模板,对反应体系和条件进行优化,构建标准曲线并验证该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示,该方法的最适退火温度为55℃,最佳引物和探针浓度分别为0.2μmol/L和0.4μmol/L,最佳反应循环数为45,Ct值与标准品浓度的对数线性关系好。对猪源、鼠源及牛源SVA和其他动物病毒(O型口蹄疫病毒、水疱性口炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒、边界病毒、猪库布病毒、牛库布病毒、山羊鼻内肿瘤病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛结节性皮肤病病毒、牛冠状病毒、D型流感病毒、蓝舌病毒)的核酸检测结果显示,除猪源、鼠源及牛源SVA为阳性外,其他病毒核酸为阴性。该方法最低检测限为2.66×10~1拷贝/μL,重复试验中组内和组间变异系数均小于0.1%。建立的检测多宿主SVA TaqMan RT-qPCR方法具有良好的特异性和稳定性,为SVA在不同宿主间的疾病诊断与流行病学调查或监控提供了快捷的方法。

生猪三体系平衡理论与防控非洲猪瘟抗病初探

猪粮安天下,养猪业是国民经济的根基性产业,以非洲猪瘟为代表的猪病是制约养猪业发展的长期瓶颈和首要障碍。在禁抗限抗环境下,拓展新思维、发展新理论和研发新方案是破解养猪业疫病困局的新出路。本文对生猪三体(系)平衡的理论和防控非洲猪瘟抗病实践及其验证方法作全面的阐述。

2017年广东省H1N1亚型SIV复制及感染能力的研究

为了解2017年广东省H1N1亚型猪流感病毒基因型特征、体外复制能力和体内感染能力,挑选以A/swine/Guangdong/S182/2017(H1N1)为代表的4株病毒进行遗传演化分析、细胞生长曲线测定和动物感染试验。病毒遗传演化结果表明,4株病毒均属于欧亚类禽分支,其内部基因为来自其他不同分支基因片段的重组;病毒在细胞上的生长曲线结果显示,MDCK、PK15、ST和IPEC-1这4种细胞系都能被病毒感染,病毒在细胞上复制滴度范围分别为(2.50~8.50)lgTCID50/mL、(3.33~6.33)lgTCID50/mL、(4.50~6.50)lgTCID50/mL、(0.67~3.00)lgTCID50/mL;病毒动物感染试验结果表明,S182毒株能够引起感染组和同居组猪产生体外排毒、肺内病毒复制和血清抗体转阳,两组猪鼻洗液滴度范围分别为(1.70~2.37)lgTCID50/mL、(1.37~3.37)lgTCID50/mL,肺载毒量滴度范围分别为(1.37~2.37)lgTCID50/(g·mL^-1)、(1.37~2.20)lgTCID50/(g·mL^-1),抗体滴度范围分别为1∶10~1∶20、1∶10~1∶160。本研究结果将为H1N1亚型猪流感病毒的监测防控、公共卫生学安全、适用于分离猪流感病毒猪源细胞的遴选以及近年主要流行H1N1猪流感病毒对猪的致病能力的研究提供理论依据和数据支持。