Ag85B调节小鼠髓样树突状细胞的成熟和TSLP介导下TSLPR和OX40L的表达

目的：研究抗原85B（Ag85B）体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞（m DCs）的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）介导下m DCs表达TSLP受体（TSLPR）和OX40L的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法：应用重组小鼠GM-CSF和IL-4体外诱生C57BL/6小鼠未成熟的m DCs,并运用免疫磁珠分离的方法纯化,采用光镜和扫描电镜、流式细胞术进行形态学观察和细胞表型鉴定;分别用0、50、100、200μg/L不同浓度的Ag85B或TSLP作用于纯化并鉴定后的m DCs,培养24 h,流式细胞术检测细胞表面分子CD80、CD86、TSLPR和OX40L的表达,选取最佳的Ag85B或TSLP处理浓度。随后将m DCs随机分为空白对照组、Ag85B处理组、TSLP处理组和Ag85B＋TSLP处理组,培养24 h后检测m DCs的促炎表面分子TSLPR和OX40L的表达。结果：体外诱导培养7 d,倒置相差显微镜下可见细胞表面呈现不规则树突样突起,扫描电镜下见细胞类圆形,表面有少量皱褶和较少分叉的树突状突起,符合未成熟m DCs的形态学特点;纯化后的m DCs表达表面分子CD11c的细胞较表达共刺激分子CD80和CD86的细胞多,符合未成熟m DCs的表型特征。与空白对照组比较,50~200μg/L的Ag85B处理组m DCs表达CD80和CD86的细胞比率显著增高（P〈0.05）,表达TSLPR和OX40L的细胞比率无显著差异。与空白对照组相比较,50、100和200μg/L浓度的TSLP处理组的m DCs表达CD80和CD86的细胞比率均显著增加（P〈0.05）;与空白对照组和50μg/L TSLP处理组相比较,100μg/L和200μg/L TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率均显著升高（P〈0.05）。选取200μg/L作为Ag85B和TSLP的优化作用浓度,结果发现Ag85B处理组和Ag85B＋TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率较TSLP处理组均显著降低（P〈0.05）,与空白对照组比较差异不显著。结论：Ag85B可通过上调m DCs表达共刺激分子CD80和CD86促进其成熟,同时下调TSLP介导的m DCs表达促炎表面分子TSLPR和OX40L,推测Ag85B可能通过TSLP介导的m DCs途径抑制气道炎症。