经皮穿刺静脉-静脉体外膜肺的动物实验研究

目的在犬急性肺损伤的动物模型上探讨经皮穿刺静脉-静脉体外膜肺(V-VECMO)支持的效果。方法6只雄性犬利用油酸(0.1ml/kg)建立急性肺损伤模型。经皮穿刺右颈内静脉和右股静脉放置插管(分别是17Fr、10Fr),接ECMO管道灌注流量35～40ml/kg/min,氧气流量1～1.5L/min。ECMO前2h与呼吸机并用,呼吸机参数为SIMV模式,FiO20.5,TV5～6ml/kg,RR20次/分;后2h停止呼吸机的使用。记录注射油酸前、肺损伤出现后ECMO前、ECMO2h、ECMO4h的动脉血气值变化。结果注射油酸后4～6h,在纯氧高通气状态下犬动脉氧分压为106±15mmHg。ECMO2h动脉氧分压为98±7mmHg氧饱和度95.5±2.2%;ECMO4h动脉氧分压为67±3mmHg,氧饱和度为92.3±2.2%。ECMO过程中二氧化碳分压低于注射油酸前水平(p<0.05)。结论经皮穿刺V-VECMO可以帮助机体排出二氧化碳,吸收氧气,降低急性肺损伤的机械通气模式。

中华眼镜蛇毒活性组分抑血管内皮细胞增殖和黏附实验研究

目的:研究眼镜蛇毒在抗血管生成方面的生物活性。方法:采用Sephadex阳离子交换柱和分子筛分离中华眼镜蛇毒原毒,以MTT法评价和筛选分离各蛋白峰对培养内皮细胞的抑生长活性;MTT快速测定法测定活性峰对内皮细胞与纤维蛋白原(Fbg)、纤连蛋白(Fn)、Matrigel的黏附作用的影响。结果:经两步分离后从中华眼镜蛇毒中获得一可特异性抑制内皮细胞生长的活性蛋白峰,该活性组分可抑制内皮细胞的黏附功能,对细胞黏附Fn、Fbg和Matrigel等3种物质的作用从1.2μg/ml浓度起即有抑制效应(P<0.05),且均呈浓度依赖性;组分对细胞黏附Fbg和Hatrigel的抑制作用较其对Fn的作用强(P<0.05)。结论;眼镜蛇毒中可能含有可抑制血管生成的活性物质,在抗血管生成方面有良好的研究价值。

未成熟心肌缺血-再灌注损伤与细胞凋亡

[目的]建立新生兔心肌缺虑-再灌注损伤模型,观察未成熟心肌细胞凋亡。[方法]新西兰幼兔(兔龄2～3周) 32只,建立Langendorff离体心脏灌注模型。用37℃的K-H液预灌注10 min后,随机分4组,每组8只。对照Ⅰ组:持续37℃ 的K-H液灌注300 min;实验组:改用4℃的St.Thomas液灌注2 min,将心脏置于15℃恒温生理盐水中,分别停灌60 min(Ⅱ 组)、120 min(Ⅲ组)、240 min(Ⅳ组)后,心脏逐渐复温至34℃时,恢复37℃的K-H液灌注60 min。采集、处理和保存左心室心 肌标本。测定凋亡心肌细胞(TUNEL法),计算凋亡指数(apoptotic index,AI)。[结果]对照Ⅰ组持续灌注,凋亡率为0,与其它组 比较有显著性意义(P<0.01)。缺血-再灌注的Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组均见心肌细胞凋亡现象,随着缺血时间的延长,Ⅲ组凋亡率高于Ⅱ 组(P<0.05),Ⅳ组凋亡率最高,高于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.01)。[结论]与成年心脏心肌细胞一样,未成熟心肌缺血-再灌注伴有 细胞凋亡,凋亡的严重程度与再灌注前的缺血时间长短有关,缺血时间长的再灌注组凋亡率较高。

EB病毒抗体及其DNA联合检测在鼻咽癌筛查和早期诊断中的价值

目的探讨EB病毒(EBV)抗体及EBV DNA联合检测在鼻咽癌筛查和早期诊断中的价值。方法收集2011年7月至2014年8月广东省第二人民医院经病理确诊的鼻咽癌患者272例,采用酶联免疫法(ELISA)测定血清RTA-IgG、VCA-IgA和EA-IgA;荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定血浆EBV-DNA。结果四项指标联合检测时,其敏感度最高(99.63%);早期鼻咽癌的阳性率为97.62%(41/42),晚期鼻咽癌的阳性率为100.00%(230/230)。四项指标中任意两项及两项以上指标为阳性的特异性在93.00%以上。结论四项指标联合检测可用于早期鼻咽癌的筛查,任意两项以上指标阳性时应高度怀疑鼻咽癌。

细胞周期蛋白与急性白血病预后的关系研究

背景与目的:细胞的增殖和分化是通过细胞周期转运来实现的,当肿瘤细胞异常增殖时,作为细胞运转正调因子的细胞周期蛋白(cyclins)就有可能表达异常。目前已有较多资料证实cyclins在实体肿瘤中呈高表达。本研究探讨cyclins与急性白血病预后的关系。方法:实验组分为急性白血病完全缓解组(12例)、急性白血病初发未治组(16例)、难治性白血病组(40例);正常对照组为良性血液病患者(15例)。用RT-PCR法检测cyclinA、cyclinD、cyclinE。结果:正常对照组15例的cyclins表达均为阴性,在正常对照组和实验组中,cyclinA的表达没有显著性差异(P>0.05),而cyclinD和cyclinE在实验组的表达均明显高于正常对照组(P<0.01)。在急性白血病完全缓解组,cyclinD和cyclinE的表达无显著性差异(P>0.05);而在难治性白血病中,cyclinD的表达显著高于cyclinE,且cyclinD在难治性白血病组的表达明显高于初发性的病例(P<0.05)。将所有cyclins表达阳性的病例分为表达单一cyclin和表达2个以上cyclins两组,并分别计算两者的阳性率,发现两者的阳性率在急性白血病完全缓解组和难治性白血病组间无显著性差异(P>0.05)。结论:CyclinD可以作为急性白血病的预后指标,不能用cyclins基因类型表达的多寡来判断预后。

妊娠糖尿病患者孕早期血清脂联素与妊娠结局相关性的临床研究

目的:多项研究提示血清脂联素水平降低可预示妊娠糖尿病的发生,但是孕早期脂联素水平的改变与妊娠结局的相关性仍不清楚。本实验拟采用巢式病例对照研究方法探讨孕早期脂联素水平的改变与妊娠结局的相关性。方法:本研究拟通过巢式病例对照研究,观察2007年10月至2008年6月期间在广东省人民医院产检分娩的孕妇843例,-80℃保存孕早期(16～20周)血清,并追踪随访至分娩。发现单胎妊娠的妊娠糖尿病患者73例(GDM组),随机抽取年龄匹配的正常单胎妊娠妇女73例为对照组(NGDM组)。采用全自动生化分析仪测定空腹血糖(FBG)水平,放免法测定空腹胰岛素(FINS)水平并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),采用酶联免疫方法测定脂联素水平。结果:GDM组孕早期血清脂联素水平明显低于NGDM组[(54.23±2.96)nmol/Lvs(68.24±4.54)nmol/L],P<0.05)。GDM组孕早期血清脂联素水平与HOMA1-IR呈负相关(r=-0.364,P<0.01),但与产筛血糖和OGTT血糖水平均未发现相关性,合并巨大胎,早产的孕妇孕早期血清脂联素水平无差异。结论:妊娠糖尿病患者孕早期血清脂联素水平降低,孕早期血清脂联素水平与胰岛素抵抗有关,但未发现与血糖水平和妊娠不良结局的相关性。

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者缺氧激活通路的研究

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)与缺氧诱导因子-1(HIF-1)在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)的激活情况。方法 :研究对象分为轻中度OSAHS组(16例)、重度OSAHS组(14例)及对照组(30例),通过实时荧光定量PCR法(Real-time)及Western blotting法分别测定外周血单个核细胞(PBMC)的NF-κB、HIF-1m RNA水平和NF-κB、HIF-1蛋白水平。结果:重度OSAHS组NF-κBp65m RNA及NF-κBp65蛋白表达、HIF-1αm RNA及HIF-1α蛋白表达均显著高于对照组及轻中度OSAHS组(均P<0.01);NF-κBp65 m RNA及NF-κBp65蛋白表达轻中度OSAHS组与对照组无明显差异(P值分别为0.068及0.254),轻中度OSAHS组HIF-1αm RNA明显高于对照组(P<0.05)但HIF-1α蛋白表达无明显差异(P=0.777)。NF-κBp65m RNA及HIF-1αm RNA的表达与呼吸暂停低通气指数(AHI)呈正相关(r=0.493,P=0.006,r=0.508,P=0.004),与夜间最低血氧饱和度(LSa O2)呈负相关(r=-0.488,P=0.006,r=-0.46,P=0.011)。NF-κBp65蛋白表达与AHI呈正相关(r=0.669,P<0.001)。HIF-1α蛋白表达与AHI、氧减指数(ODI)呈正相关(r=0.645,P=0.001;r=0.480,P=0.018)。NF-κBp65m RNA与HIF-1αm RNA呈正相关(r=0.543,P=0.002),NF-κBp65、HIF-1α蛋白表达呈正相关(r=0.716,P<0.001)。结论:OSAHS患者NF-κB及HIF-1的基因和蛋白表达均出现上调,且患者病情越重上调越明显,表明OSAHS的发病与两者均有关。

停搏液添加尼卡地平对未成熟心肌的保护作用

[目的]建立新生兔心脏缺血-再灌注损伤模型,评价停搏液添加尼卡地平对未成熟心肌的保护作用。[方法]新 西兰幼兔(兔龄2～3周)30只,建立Langendorff离体心脏灌注模型,随机分3组。对照Ⅰ组:持续37℃的K-H液灌注120 min; 对照Ⅱ组:改用4℃的St.Thomas液灌注2 min后,将心脏置于15℃恒温生理盐水中,停灌60 min后复温,再恢复37℃的 K-H液灌注60 min;实验Ⅲ组:改用4℃含150 ng／mL(0.29μmol／L)尼卡地平的St.Thomas液灌注,余同Ⅱ组。观察和检测 相关指标。[结果]再灌注15 min和60 min时,实验Ⅲ组的CF、LVSP、+dp／dt max和-dp／dt max的恢复百分比均高于对照 Ⅱ组(P<0.01或P<0.05)。实验Ⅲ组心律失常发生率低于对照Ⅱ组(P<0.05)。再灌注5 min、15 min、60 min时,实验 Ⅲ组灌流液中的CK、CK-MB、LDH、TnI含量均高于对照Ⅰ组(P<0.05或P<0.01),但低于对照Ⅱ组(P<0.01或P< 0.05);心肌形态结构的观察,对照Ⅰ组和实验Ⅲ组属1级～2级损伤,对照Ⅱ组属3级损伤。[结论]缺血-再灌注对未成熟心 肌有明显的损害作用,尼卡地平可以减少未成熟心肌的缺血-再灌注损伤。

体外膜肺氧合对急性肺损伤犬血浆粘附分子的影响

目的 探讨经皮穿刺静脉-静脉体外膜肺氧合（ECMO）对急性肺损伤犬血浆粘附分子的影响.方法 10头雄性犬利用油酸建立急性肺损伤模型,随机分为机械通气组（MV组,n=5）和ECMO组（n=5）,观察肺损伤4 h.经皮穿刺右颈内静脉和右股静脉建立ECMO转流,灌注流量35～40 ml/（kg·min）.记录肺损伤形成时、肺损伤2h、肺损伤4 h动脉血气值、肺动态顺应性的变化,用ELISA方法检测血浆细胞间粘附分子1（ICAM-1）和P选择素.结果 两组各时间点血气值总体差异没有统计学意义.在肺损伤2 h、4 h两组肺动态顺应性总体差异有统计学意义（F=5.84,P=0.042）,ECMO组低于MV组.ECMO组在肺损伤2h、4h血浆ICAM-1和P-选择素显著增高（P＜0.05）,两组总体差异有统计学意义（ICAM-1的F=8.716,P=0.018;P-Selection的F=20.373,P=0.002）.结论 经皮穿刺静脉-静脉ECMO有效促进急性肺损伤犬的血液氧合和二氧化碳排出,但增加血浆粘附分子水平,影响肺动态顺应性.

309例男性不育患者的染色体核型分析

目的：探讨男性不育与染色体异常的关系。方法回顾性分析2012～2013年临床诊断为男性不育患者309例，其中包括生精功能异常组（A组）206例，配偶复发性自然流产组（B组）103例。采集所有病例外周血行常规细胞培养及G显带，镜下观察并分析染色体核型。结果 A组206例患者染色体异常发生率为8．7％（18／206），其中严重少精症患者中染色体异常发生率为7．6％（11／145），无精症患者中染色体异常发生率为11．5％（7／61）；最常见的染色体异常是47，XXY ，共检出8例（包括1例镶嵌体），占异常核型的44．4％（8／18）。B组103例患者染色体异常发生率为9．7％（10／103），10例染色体异常全为平衡型染色体结构异常，包括6例相互易位，2例罗氏易位，2例臂间倒位。结论染色体异常是男性不育的重要遗传学病因，男性不育患者应行染色体检查以排除染色体异常。

应用SELDI-TOF-MS技术筛选肺腺癌患者血清诊断标志物

目的探讨肺腺癌患者及正常人血清中蛋白质质谱的不同,筛选出肺腺癌血清诊断标志物。方法用WCX2蛋白芯片结合表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术,检测24例肺腺癌和10例正常人血清蛋白质谱,筛选出差异表达蛋白质。结果本实验共检测到86个有效的蛋白质波峰,其中m/z位于分子质量2000~10000的波峰有78个。筛选出m/z分子质量为8129.55,2022.18,3271.91,3933.44,3504.49,3811.71的6个血清肿瘤标志物。结论SELDI-TOF-MS技术是寻找肺腺癌血清诊断标志物的有效工具。利用蛋白组学和生物信息学及相关技术,将有利于建立新的疾病诊断模式——蛋白质指纹图谱。

两种胎羊体外循环方式对胎盘功能影响的比较

目的比较两种胎羊体外循环方式对胎盘气体交换功能的影响.方法10头胎羊(妊娠120～140d)随机分为胎盘组(n=5)和人工肺组(n=5).胎盘组运用离心泵和胎盘建立体外循环;人工肺组运用离心泵和人工膜肺建立体外循环,转流中旷置胎盘.两组胎羊体外转流30 min.分别于转流前(T0),转流30 min(T1)、转流后1 h(T2)、转流后2 h(T3)记录胎羊平均动脉压、心率和血气值.结果实验过程中两组胎羊平均动脉压和心率之间的差异没有统计学意义.T1和T2期两组胎羊氧分压、二氧化碳分压以及氧饱和度均在生理范围内.T3期两组胎羊pH值、氧分压和氧饱和度下降、二氧化碳分压增高,与T0期差异有显著性(P＜0.05),两组之间总体差异无显著性.两组胎羊碱剩余结果显示进行性偏酸,人工肺组在T2,T3期较胎盘组更加偏酸,两组之间总体差异无有显著性(P＜0.05).结论胎羊体外循环过程中胎盘作为氧合器,胎盘功能良好,但是体外循环对胎盘长期功能存在影响.旷置胎盘、使用人工氧合器并不能减轻体外循环对胎盘功能的影响.

应用SELDI-TOF-MS技术于肺癌中医辩证的初步研究

目的探讨不同证型肺癌患者血清中蛋白质质谱的差异。方法用WCX2蛋白芯片结合表面增强激光解析电离飞行时问质谱（SELDI—TOF—MS）技术，分别检测12例气阴两虚肺癌和12例气滞血淤肺癌的血清蛋白质谱，筛选出差异表达蛋白质。结果共检测到113个有效的蛋白质波蜂，其中m／z位于2000～10000的波峰有104个，筛选出m／z为3952．05、3772．35、4170．07、3679．34、3156．38、4293．14的6个血清蛋白质。结论利用SELDI-TOF—MS技术将有可能建立新的中医肺癌辩证模式——蛋白质指纹图谱。

应用蛋白芯片技术筛选肺腺癌化疗敏感血清蛋白标志物

目的 探讨肺腺癌化疗敏感患者与化疗耐药患者血清蛋白质质谱的不同，筛选肺腺癌化疗敏感血清蛋白标志物。方法用WCX2蛋白芯片结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术，检测22例肺腺癌化疗敏感的患者和21例化疗不敏感的血清蛋白质谱，筛选出差异表达蛋白质。结果发现利用M／Z（质荷比）为16083．50Da，7963．17Da，16121．50Da，15921．60Da，8066．79Da，8040．17Da和3394．57Da的7个差异蛋白可区分标准含铂类方案化疗敏感组和耐药组，联合m／z为7963．17Da与16083．50Da的差异蛋白建立预测模型，可预测肺腺癌标准含铂类方案化疗敏感／耐药性，其敏感性86．36％和特异性80．95％。结论SELDI—TOF—MS技术是寻找肺腺癌化疗敏感血清诊断标志物的有效工具。

纤维支气管镜刷检细胞学诊断在肺癌分型中的应用

目的 探讨纤维支气管镜 (以下简称纤支镜 )刷检细胞学诊断在肺癌分型中的可行性。方法 对 13 1例纤支镜刷检细胞学与病理活检均为阳性的肺癌分别进行细胞学分型和病理学分型。结果 以病理学分型为标准 ,刷检细胞学诊断鳞癌符合率为 87 4% ,腺癌为 80 6% ,未分化癌为 93 8% ,未分型为 44 4% ,总符合率为 90 8%。

14-3-3β蛋白对胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的探讨14-3-3β蛋白对胶质瘤细胞系生物学行为的影响。方法应用分子生物学技术构建14-3-3β蛋白的真核表达质粒pc DNA 3.1(-)-14-3-3β及干扰质粒pc DNATM6.2-GW/Em GFPmiR-14-3-3β,应用MTT、集落形成、Transwell侵袭试验研究14-3-3β蛋白对人胶质瘤细胞株U251增殖及侵袭等生物学行为的影响。结果过表达14-3-3β能够明显促进U251细胞(人胶质瘤系)的侵袭和增殖过程;而应用干扰质粒抑制14-3-3β表达后,U251细胞的侵袭和增殖能力则受到显著抑制。结论 14-3-3β对于U251细胞(人胶质瘤系)蛋白的侵袭和增殖能力起到明确的促进作用,其在人类胶质瘤的发生和发展过程中可能也起到促癌作用。

氯吡格雷联合前列地尔治疗缺血性脑卒中的疗效观察

目的观察氯吡格雷联合前列地尔治疗缺血性脑卒中患者的临床疗效。方法随机将100例缺血性脑卒中患者分为对照组和联合治疗组。对照组50例,给予阿司匹林及常规药物治疗,联合治疗组50例,给予氯吡格雷联合前列地尔治疗,二组疗程均在治疗7 d、14 d后评定疗效。结果联合治疗组总有效率明显高于对照组(P<0.05),且改善血浆脂蛋白磷脂酶指标及血液流变学指标(P<0.01)。结论氯吡格雷联合前列地尔治疗缺血性脑卒中患者效果显著,能有效改善神经功能,有效改善缺血性脑卒中患者血浆脂蛋白磷脂酶指标及血液流变学指标,控制病情发展,减少病残率。

非小细胞肺癌化疗疗效相关血清小分子蛋白的初步研究

目的:寻找非小细胞肺癌化疗耐药与敏感患者血清中的差异小分子蛋白,通过分离纯化进行质谱鉴定。方法:用WCX2蛋白芯片结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,分别检测14例化疗敏感和26例化疗耐药的非小细胞肺癌血清蛋白质谱,筛选出差异表达蛋白质谱。Clinprot磁珠分离纯化后,进行基质辅助激光吸附电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定。结果:SELDI-TOF-MS检测到100个有效蛋白峰,其中P<0.05的差异蛋白峰23个,联合质荷比(m/z)为3193.14Da和3263.61Da的差异蛋白建立预测非小细胞肺癌化疗耐药模型,敏感性90.23%,特异性98.56%。进行MALDI-TOF/TOF-MS鉴定,质荷比(m/z)为3263.61Da的蛋白为DNA结合相关蛋白。结论:SELDI-TOF-MS技术可以筛选非小细胞肺癌化疗疗效相关蛋白。

p38 MAPK信号途径参与大鼠系膜细胞MMP2表达

目的探讨系膜细胞中调节MMP2表达的信号通路。方法鼠系膜细胞培养,分别加入酪氨酸激酶抑制剂(Herbimycin A),p38MAPK抑制剂(SB203580),MEK抑制剂(U0126),ERK抑制剂(PD098059),PI3K抑制剂(Y294002),用酶谱法分析MMP2酶活性、用RT-PCR及Western方法从基因及蛋白水平,观察阻断剂对MMP2表达的影响。结果酪氨酸激酶抑制剂、MEK抑制剂、ERK抑制剂及PI3K抑制剂对MMP2酶活性、mRNA及蛋白水平无影响,在72 h p38 MAPK抑制剂SB203580抑制MMP2活性25%。在48 h当SB203580浓度分别为10、20、30及40μmol/L时,系膜细胞中MMP2的抑制率分别为7.2%、13.5%、21.3%及28%。结论大鼠系膜细胞中p38MAPK信号传导途径参与了MMP2的表达,并且p38 MAPK抑制剂SB203580对MMP2的抑制有剂量依赖性。

p27^(kip1)在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨p27kip1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义。方法对45例NSCLC患者及40例正常对照者采用免疫组化方法(SP)检测两组患者p27kip1的表达,比较其差异。结果 NSCLC中p27kip1的阳性检出率为46.7%(21/45),p27kip1在NSCLC的表达明显低于正常组患者,两组间差异有统计学意义(P<0.05);NSCLC肿瘤的大小、恶性程度、淋巴结转移等与p27kip1表达降低之间具有相关性(P<0.05),其中肿瘤恶性程度及大小与p27kip1阴性表达呈正相关,而淋巴结转移与p27kip1阴性表达呈负相关,而肿瘤的组织学分类则与其表达无相关性(P>0.05)。结论 p27kip1的表达与NSCLC之间具有密切的关系,其表达缺失与NSCLC肿瘤的大小、恶性程度、淋巴结转移等具有相关性。