现代分子生物学在NDV研究和生产中的应用

本文论述了现代分子生物学技术在ＮＤＶ的检测和基因工程疫苗方面的应用。评估了ＲＮＡ指纹图谱、核酸探针及ＰＣＲ等方法的优缺点及应用前景，重点概述了可以用于ＮＤＶ强弱毒株鉴别检测的核酸探针法和Ｆ蛋白裂解位点多肽抗血清法。介绍了ＮＤＶ在各种载体包括禽痘病毒、痘苗病毒。

核酸疫苗研究进展

简要论述了核酸疫苗的发展历史，对核酸疫苗进行了名词诠释，并重点介绍了核酸疫苗的研究进展，包括启动子的选择，载体的构成，疫苗的注射途径和方法对免疫效果的影响，接种组织预处理对免疫效果的影响等重大问题。

肉鹅日粮中添加吡啶羧酸铬的观察

选90只体重相近的14日龄马岗鹅,随机分为3组,在日粮中分别添加0.0,0.2和0.4mg/kg吡啶羧酸铬(以铬计)。结果:添加吡啶羧酸铬可以显著地降低肉鹅的腹脂率,降低皮脂率,降低血清中的CHOL,使HDL-C略有提高。在环境应激(高温闷热)条件下,补铬能显著提高肉鹅的体重,但胸腿肌率、屠宰率与对照组差异不显著。

PRRSVJL/07/SW毒株GP5基因克隆与原核表达

根据GenBank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)VR-2332毒株核苷酸序列,设计了扩增PRRSV JL/07/SW毒株GP5基因的1对引物,利用RT-PCR方法,从PRRSV JL/07/SW毒株的细胞培养物中成功的扩增出GP5基因,其中GP5基因全长603 bp,与国际PRRSV美洲型VR-2332毒株的GP5基因序列同源率为89.2%;随后,将该基因与原核表达载体pGEX-4T-1连接,转化到宿主菌BL21中进行表达。结果证实PRRSV JL/07/SW毒株GP5基因成功地进行了原核表达,表达的目的蛋白占菌体总蛋白含量的22.8%。

NDV融合蛋白裂解位点基因的重组昆虫杆状病毒表达载体的构建与鉴定

将新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株和ＬａＳｏｔａＥ４株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因从本实验室构建的重组质粒ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵＣＬａＦｃ中用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ切出。将这２个毒株的Ｆｃ基因定向克隆入昆虫杆状病毒表达载体ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３的ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ位点之间，获得２个毒株的Ｆｃ基因克隆ｐＸ３Ｆ４６Ｆｃ和ｐＸ３ＬａＦｃ。重组质粒用ＥｃｏＲＩ／ＳａｌⅠ、ＰｓｔⅠ酶切法、ＰＣＲ和核酸探针法进行了鉴定，证明插入的基因来自ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵ－ＣＬａＦｃ，插入的位置和方向都正确。这２个载体的构建为Ｆｃ基因在昆虫细胞系统的表达创造了条件。

唾液HRP5第17位密码子反义突变对其在毕赤酵母中表达的影响

目的在毕赤酵母中表达唾液富组蛋白5(HRP5)基因原始序列hrp5及突变序列hrp5′(Lys17→Asn),比较表达量及抗白色念珠菌活性。方法选用毕赤酵母偏爱密码子,设计3′端互补、5′端带酶切位点的两对引物,PCR合成hrp5和hrp5′,克隆至pPICZα-A,转化大肠杆菌,将酶切、测序鉴定的阳性重组质粒pPICZα-A-hrp5和pPICZα-A-hrp5′经SacI线性化后电击转化GS115,筛选阳性菌落,PCR鉴定,甲醇诱导表达,比较抗菌活性,测定表达量。结果hrp5及hrp5′正确整合到GS115基因组中,突变前后表达产物与HRP5标准品活性相当,表达量分别为4μmol/L、5μmol/L。结论HRP5在毕赤酵母中成功表达,活性区Lys17突变为Asn使表达量提高25%,而对其杀菌活性无影响。

开食料中酸化、玉米膨化和蛋白水平对早期断奶仔猪生产性能的影响

选取３０日龄断奶，平均体重７．１３ｋｇ的大约克夏仔猪７４头，采用２×３×２因子设计，研究玉米豆饼型饲粮中，不同蛋白水平（２０％和１７％），加柠檬酸（１％和２％）和玉米膨化对仔猪生产性能的影响。结果表明：玉米膨化对早期断奶仔猪生产性能无明显影响。通过Ｌｙｓ和Ｍｅｔ的添加后１７％蛋白水平相当于２０％蛋白水平的效果。仔猪生长前期（断奶后１－１４天），饲粮中加入１％和２％的柠檬酸有提高日增重（１２％和１６％）和采食量（１０％和１２％）的趋势（Ｐ＞０．０５），后期（断奶后１５－３９天）加柠檬酸（１％和２％）可显著（Ｐ＜０．０５）提高日增重（１４％和１７％），采食量有提高趋势（１０％和１３％）（Ｐ＞０．０５）．本试验条件下饲粮的最佳组合为：２０％蛋白水平、１％柠檬酸、玉米不膨化和１７％蛋白水平、２％柠檬酸、玉米不膨化。

猪繁殖与呼吸道综合征RT-PCR诊断方法的建立

根据猪繁殖与呼吸道综合征病毒 ( PRRSV)核衣壳蛋白 ORF7的序列 ,设计了 1套引物 ,建立了检测 PRRSV核酸的 RT-PCR方法。通过对猪繁殖与呼吸道综合征 ( PRRS)标准毒株的检测 ,证明该方法不仅能够扩增出特异性的核酸片段 ,同时可从基因水平上区分 PRRSV美洲型和欧洲型。使用该方法对国内临床上疑似为 PRRS的送检样品进行检测 ,结果为阳性 ,并确定其基因型均为美洲型。该研究建立的从组织中直接提取细胞总 RNA进行 RT-PCR的方法 ,为 PRRS的快速。

新城疫病毒毒力强弱的分子生物学基础

新城疫病毒毒力强弱的分子生物学基础宋长绪（广东省兽医研究所，广州５１０６４０）刘福安（华南农业大学，广州５１０６４２）新城疫病毒（ＮＤＶ）属于副粘病毒科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）副粘病毒属Ⅰ型（ＰＭＶ－１），为新城疫的病原。新城疫是极易传染的...

新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因光敏生物素探针的制备及初步应用

将重组质粒ｐＵＣＬａＦｃ和ｐＵＣＦ４６Ｆｃ用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ酶切，回收新城疫病毒融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因，将此Ｆｃ片段用光敏生物素标记，制备出Ｆｃ探针。该探针能够与新城疫病毒（ＮＤＶ）的强毒株Ｆ４６Ｅ９、中毒株Ｍ株和弱毒株ＬａＳｏｔａＥ４株杂交，而不与对照的传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒杂交，说明探针是特异的。用ｐＵＣＬａＦｃ的Ｆｃ探针检测了各５份ＮＤＶ强中弱毒株的尿囊液，均为阳性。但强毒株和弱毒株的Ｆｃ探针都能与所用的强、中、弱毒株杂交，说明该Ｆｃ探针尚不能区分强、弱毒株。

新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的表达

用ＳＰＦ鸡胚繁殖新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株（强毒）、ＬａＳｏｔａＥ４株（弱毒），对病毒进行纯化，抽提ＲＮＡ。用１对均为２７个碱基的引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，扩增出了２个毒株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因。将Ｆｃ基因定向克隆入ｐＵＣ１８的ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ位点之间，获得２个毒株Ｆｃ基因克隆ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵＣＬａＦｃ，用ＥｃｏＲＩ／ＳａｌⅠ双酶切法、ＰｓｔⅠ单酶切法、ＰＣＲ法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的ＬａＳｏｔａＥ４Ｆｃ基因定向导入表达载体质粒ｐＢＶ２２１，获得重组子ｐＢＶＬａＦｃ。ＰＣＲ和内切酶酶切法鉴定表明，Ｆｃ插入的位置和方向都正确无误。用Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α通过热诱导法进行了表达。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法检测了表达产物。结果表明，有１条能够与ＮＤＶ多抗反应的特异条带，分子量约１５７００，与预期大小一致。

反刍动物驱虫药的控释系统及其应用

近年来,有大量国外资料报道了一种用于反刍动物驱虫的兽药新制剂——瘤胃缓释巨丸剂(即控释系统),而且有几家公司已开始批量生产,投放市场,如Pfizer公司生产的酒石酸莫仑太缓释巨丸剂,Merck公司生产的伊维菌素缓释巨丸剂,Syn-ter公司生产的亚砜咪唑脉冲释放丸等。 控释系统(controlled release System)全称为控制释放给药系统(controlled release Drug Delivery System)。它的最大特点是将该装置长时间停留在反刍动物的瘤胃中, 以恒定的速率向外释放药物。这不仅延长药物在体内的作用时间,而且也不会受饲料和饮水的影响,在常规管理条件下,可减少大量的劳务成本,尤其对半衰期较短的药物,可以维持较长的血药浓度。

家禽呼吸道疾病的综合防治措施

随着现代养禽业的高度集约化,家禽呼吸道疾病也日趋严重。禽类呼吸道疾病很多,常见的有传染性支气管炎,传染性喉气管炎,禽流感.呼吸道霉形体病.鸡新城疫.霉菌性肺炎,传染性鼻炎,裂口线虫病,气囊螨等等。引起这些病发生的病原有细菌性的,有病毒性的,还有寄生虫引起的,饲养管理不当也是一个重要的影响因素.控制呼吸道病,单纯地依靠药物和疫苗来防治很难达到满意的效果。