唾液HRP5第17位密码子反义突变对其在毕赤酵母中表达的影响

目的在毕赤酵母中表达唾液富组蛋白5(HRP5)基因原始序列hrp5及突变序列hrp5′(Lys17→Asn),比较表达量及抗白色念珠菌活性。方法选用毕赤酵母偏爱密码子,设计3′端互补、5′端带酶切位点的两对引物,PCR合成hrp5和hrp5′,克隆至pPICZα-A,转化大肠杆菌,将酶切、测序鉴定的阳性重组质粒pPICZα-A-hrp5和pPICZα-A-hrp5′经SacI线性化后电击转化GS115,筛选阳性菌落,PCR鉴定,甲醇诱导表达,比较抗菌活性,测定表达量。结果hrp5及hrp5′正确整合到GS115基因组中,突变前后表达产物与HRP5标准品活性相当,表达量分别为4μmol/L、5μmol/L。结论HRP5在毕赤酵母中成功表达,活性区Lys17突变为Asn使表达量提高25%,而对其杀菌活性无影响。