人血清反应因子基因的原核表达及鸡卵黄多克隆抗体的制备

目的在原核系统中表达人血清反应因子(serumresponsefactor,SRF)基因,制备鸡卵黄抗SRF抗体并鉴定其特性。方法构建SRF表达载体PGEX-T-2-SRF,并在大肠杆菌中以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达。表达产物经谷胱甘肽-S转移酶(glutathione-S-transferase,GST)亲和层析柱纯化后,用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulphatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE)进行鉴定。用纯化的SRF免疫海蓝白母鸡,制备鸡抗SRF抗体。抗体的效价及特异性用蛋白质印迹技术进行测定和分析,免疫荧光鉴定其在心肌细胞中的定位。结果构建的重组质粒PGEX-4T-2-SRF在大肠杆菌中得到高表达,诱导表达的蛋白存在于包涵体和细菌裂解上清液中,纯化的SRF经SDS-PAGE鉴定呈单一条带。以纯化的SRF免疫制备了鸡抗SRF抗体。蛋白质印迹技术结果表明,该抗体可与原核表达的SRF特异性结合,抗体效价为1∶5000。免疫荧光证实该抗体可以和心肌细胞的细胞核特异性结合。结论在原核细胞中表达了SRF制备的鸡抗SRF的抗体对SRF能进行特异性结合。

淬炼新时代全面过硬的民兵队伍

民兵是中国共产党领导的不脱产的群众武装组织,是中华人民共和国武装力量的重要组成部分,是中国人民解放军的助手和后备力量。“血火里诞生,风雨中长成,战歌中走来中国民兵。支前的车轮,胜利的枪声,歌唱着我们光辉的历程。保卫祖国我们是战斗队,建设祖国我们是排头兵……”这首《中国民兵之歌》展现了民兵的光辉历程,诠释了民兵的光荣使命。