CPR技术在颅内血流导向装置植入术中的应用

目的探索曲面重建技术(curved plannar reconstruction,CPR)在颅内血流导向装置植入术中的应用价值。方法选取我院神经介入科采用血流导向装置治疗颅内动脉瘤的20例患者,术中使用锥体束CT(cone beam computed tomography,CBCT)稀释造影,分别使用最大密度投影技术(maximal intensity projection,MIP)和CPR两种算法重建图像评估血流导向装置贴壁情况。由3位神经介入科医师采用VAS(visual analogue scale)盲法评分,比较两种技术重建图像的质量。结果血流导向装置植入术中CBCT扫描后采用CPR技术处理VAS评分为(4.49±0.35),采用MIP技术处理VAS评分为(2.03±0.43),P值为0.0001,差异有统计学意义。结论在血流导向装置植入术中CBCT稀释造影,CPR重建图像质量优于MIP,更有利于观察血流导向装置贴壁情况。

基于c-Met抗体的近红外荧光探针用于肝癌的活体成像研究

目的探靶向近红外荧光成像为肝癌的精准诊疗带来了重要的契机,而且细胞间质表皮转化因子(c-Met)在肝癌中的表达显著高于正常肝组织。因此,本研究拟采用靶向c-Met的近红外荧光探针SHRmAb-IR800进行肝癌的活体成像研究。方法从TCGA和HPA数据库中获取并分析c-Met mRNA和蛋白的表达信息。通过Western Blot分析人肝癌细胞系中c-Met蛋白的表达情况。采用流式细胞技术和共聚焦成像实验评估SHRmAb-IR800与肝癌细胞的体外特异结合能力。构建肝癌皮下瘤模型,进行活体成像分析,并量化SHRmAb-IR800的成像肿瘤背景比。结果通过数据库分析发现肝癌中的c-Met mRNA和蛋白表达增加。Western Blot分析也显示人肝癌细胞系表达c-Met蛋白。流式细胞术和共聚焦成像实验均显示探针能特异性靶向c-Met阳性的人源肝癌细胞株;肝癌皮下瘤模型的近红外荧光成像显示靶向探针在皮下瘤的聚集显著高于对照探针(P<0.05),并且探针在96 h的成像肿瘤背景比达到(2.01±0.18)。结论本研究发现靶向c-Met近红外探针能够特异识别c-Met阳性的肝癌细胞和组织,有助于肝癌的诊断,在肝癌的手术导航方面具有潜在应用价值。

搭载达沙替尼的巨噬细胞膜囊泡用于缺血性脑卒中的治疗研究

目的研究开发靶向缺血性大脑和跨血脑屏障的纳米载体,帮助达沙替尼(DAS)有效地输送到大脑,以减轻缺血性脑卒中(IS)后局部炎症反应和神经损伤。方法提取巨噬细胞膜构建搭载DAS的纳米囊泡。经尾静脉给药IS小鼠后,通过各器官组织切片HE染色分析载药囊泡的生物安全性。采用荧光标记载药囊泡,利用活体成像和免疫荧光分析载药囊泡的大脑靶向性和生物分布。对不同治疗处理组做神经功能评分、死亡率统计和神经细胞计数,评估载药囊泡的神经保护作用。结果载药囊泡在活体内具有良好的生物安全性,可快速高效靶向缺血侧脑组织内并被神经细胞摄取。对比单纯的DAS治疗,载药囊泡治疗可明显改善IS小鼠的神经功能,降低死亡率,减少神经细胞的凋亡。结论研究证实搭载DAS的巨噬细胞膜纳米囊泡可安全高效靶向缺血侧大脑递药,有效发挥抗炎和神经保护作用,可为改善IS后药物治疗提供新思路。

PLK3基因Y318H罕见突变促进视网膜母细胞瘤的生长

目的运用全外显子测序(whole exome sequencing,WES)技术检测我国视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)患者的关键突变基因,并通过生物学功能研究探索该基因在Rb进展中发挥的功能作用。方法对我国82例RB1基因突变阴性(RB1-/-)的Rb患者血液样本行WES筛选罕见突变基因;进一步检测基因罕见突变位点所引起的编码蛋白表达改变情况;构建敲低和过表达上述基因的体外、体内模型,观察其对Rb细胞增殖、迁移功能和肿瘤大小的影响。结果运用WES和罕见突变富集分析[SNP-set(sequence)kernel association test,SKAT],我们在RB1-/-的Rb患者中发现PLK3基因的罕见突变(Y318H),Y318H是一种致病性突变。转染突变质粒(Y318H)的Rb细胞株PLK3蛋白表达量减低。敲低PLK3促进Rb细胞的增殖和迁移,而过表达PLK3抑制Rb细胞的增殖和迁移。同时,PLK3表达改变可调控小鼠Rb皮下瘤的生长。结论PLK3基因罕见突变(Y318H)是我国患者Rb进展的重要致病因素,Y318H突变可介导PLK3蛋白表达减低,继而促进Rb细胞增殖和迁移,最终导致Rb的生长。上述研究表明PLK3基因突变可作为Rb早期筛查的分子标志物,为疾病的诊疗提供新靶点。

血管内皮细胞Ddx24基因条件性敲除鼠构建以及对视网膜血管新生的影响

目的构建血管内皮细胞Ddx24基因条件性敲除小鼠(Cdh5-Cre×Ddx24^(flox/flox)),并利用该模型探索Ddx24基因对小鼠胚胎发育和视网膜血管新生的影响,为进一步探讨DDX24基因在内脏血管畸形中发挥的功能作用和具体分子机制提供动物模型。方法运用Cre-LoxP系统构建Ddx24基因的Flox修饰小鼠,并与血管内皮细胞特异性表达Cre酶的Cdh5-Cre小鼠进行繁育,以建立Cdh5-Cre×Ddx24^(flox/flox)小鼠模型。利用PCR和琼脂糖凝胶电泳进行基因鉴定,然后利用Western blot或qPCR实验验证Cdh5-Cre×Ddx24^(flox/flox)小鼠血管组织中DDX24蛋白和mRNA的表达改变,最后通过H&E染色和免疫荧光实验观察Cdh5-Cre×Ddx24^(flox/flox)小鼠胚胎和视网膜血管发育的变化。结果成功构建Cdh5-Cre×Ddx24^(flox/flox)小鼠,并通过Western Blot和qPCR检测发现Cdh5-Cre×Ddx24^(flox/flox)小鼠血管组织中DDX24表达显著下降;在血管内皮细胞中敲除Ddx24基因后无胚胎致死性,可导致幼鼠视网膜血管新生异常增多。结论利用Cre-LoxP系统获得Cdh5-Cre×Ddx24^(flox/flox)小鼠,发现血管内皮细胞条件性敲除Ddx24基因可使幼鼠视网膜血管新生异常增多,为研究DDX24在内脏血管畸形中的作用提供了有效动物模型。