酪氨酸激酶抑制剂调控宿主抗结核作用的研究进展

尽管现有的抗结核治疗方案在药物敏感结核病患者的治疗中取得了显著成效,但是药物毒性及耐药菌株的问题日益突出。因此,研究者们开始寻找新的药物和治疗策略,以期更好地治疗结核病。宿主导向治疗(host-directed therapy,HDT)可利用小分子化合物调节宿主的免疫反应,进而保护组织并清除病原体。HDT的主要目的是增强宿主的抗结核免疫功能,同时缩短传统抗生素治疗的时间,提高治疗效果,被视为治疗结核病的一种有前景的方法。酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)主要参与激活细胞信号转导,从而调节细胞生长、增殖、死亡等一系列生理生化过程。酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)是一种新型抗癌药物,在多种恶性肿瘤中可靶向过表达细胞通路,也可通过诱导自噬并激活其他信号通路发挥抗肿瘤活性。研究发现,TKI也可以在巨噬细胞中调节信号转导过程,降低胞内结核分枝杆菌的载量,具有巨大的治疗潜力。因此,TKI可作为HDT的潜在候选药物,应用于临床辅助治疗结核病。笔者将从PTK及信号转导入手,针对潜在的HDT治疗结核病的靶向药物研究进行综述,旨在为HDT疗法更好地应用于现有药物及研发新药,从而辅助治疗结核病提供参考。

3种常见核酸染料的安全性和灵敏度研究

目的探讨Gold View、溴化乙锭(EB)、SYBR GreenⅠ3种实验室常用核酸染料的安全性与灵敏度,筛选出具有较高安全性和灵敏度的核酸染料。方法采用正常人胚肾细胞为研究对象,对比研究Gold View、EB、SYBR GreenⅠ对细胞增殖和细胞周期的影响;分别使用3种核酸染料对凝胶中的DNA进行染色,比较其灵敏度。结果 SYBR GreenⅠ对HEK-293细胞的周期与增殖影响最小,Gold View的影响最大。SYBR GreenⅠ和Gold View对DNA染色的灵敏度相当,略低于EB。结论 SYBR GreenⅠ具有较高安全性和较高的灵敏度。

应用CRISPR/Cas9技术建立敲除AIFM1基因的稳定肺癌细胞株

目的利用CRISPR/Cas9技术在肺癌细胞系A549和NCI-H3255中敲除凋亡诱导因子1(AIFM1)基因,并通过筛选,获得稳定的细胞株。方法利用在线数据库GEPIA、CPTAC、Prognosis和SangerBox分析AIF在肺癌的表达和功能。以AIFM1基因为靶点,设计向导RNA(sgRNA)并利用CRISPR RGEN Tools分析其脱靶效率,CRISPR/Cas9技术敲除肺癌细胞的AIFM1基因和倍比稀释法筛选稳定的单克隆细胞株。采用Western blot检测细胞AIF表达水平。结果TCGA和GTEx数据集结果显示,AIF蛋白在肺癌组织阳性表达率比正常组织高,差异有统计学意义(P<0.05);单因素cox和多因素cox分析发现,pT分期和pN分期是独立危险因素(P<0.05);CPTAC数据库显示,与正常阶段相比,AIF蛋白在肺癌的不同分级分期阶段的表达增加(P<0.05)。AIFM1基因在TCA循环、亨廷顿氏症疾病、氨基酸-核苷酸-糖的代谢和氧化性磷酸化通路中富集显著,差异有统计学意义(|NES|>1,P<0.05);3条sgRNA的序列脱靶效率均为0;与野生型肺癌细胞株相比,用CRISPR/Cas9基因编辑技术修饰的肺癌细胞未检测到表达AIF蛋白,且筛选的杀死A549和NCI-H3255的嘌呤霉素浓度分别为0.60~0.80μg/mL和0.60μg/mL。结论AIF在肺癌中表达上调。利用CRISPR/Cas9技术成功建立AIFM1基因敲除的肺癌细胞株,这将为研究AIF在肺癌发生发展机制提供合适的研究材料。

组胺上调THP-1细胞IL-37的表达

目的探讨组胺对单核细胞THP-1的白介素-37(IL-37)表达的影响。方法分别用1、10、100μmol/L等不同浓度的组胺作用THP-1细胞1 h,用实时荧光定量PCR检测THP-1细胞中IL-37 m RNA表达水平的变化,然后分别用10和100μmol/L组胺作用THP-1细胞20 h,用Western blot检测THP-1细胞中IL-37蛋白表达水平的变化。结果实时荧光定量PCR检测显示THP-1细胞分别经1、10和100μmol/L等不同浓度组胺刺激后,与对照组比较,THP-1细胞IL-37 m RNA表达水平分别升高约2.7倍、5.8倍、18.6倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测显示THP-1细胞分别经10和100μmol/L组胺作用后,其IL-37蛋白表达水平均明显上升。结论组胺诱导THP-1细胞IL-37的上调表达。

间充质干细胞在结核病治疗中的研究进展

间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是一种多能干细胞,具有自我更新、多向分化、免疫调节和抗炎的能力,在组织修复和再生中发挥着重要作用。已有临床前和临床研究证明,MSCs在治疗结核病(tuberculosis, TB)方面具有潜在的应用价值。因此,了解MSCs的生物学和免疫学特性,对规范和优化基于MSCs的再生治疗具有重要意义。现重点介绍MSCs在TB中的作用机制以及基于MSCs在TB临床试验的最新进展。

卡介苗促进肺间充质干细胞IL-10和TGF-β1表达

目的研究卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin, BCG)对肺间充质干细胞(lung-resident mesenchymal stem cells, LR-MSCs)增殖、细胞凋亡、细胞因子及相关蛋白表达,探讨LR-MSCs在结核病(tuberculosis, TB)发生、发展中的作用。方法采用CCK-8法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡及表面蛋白(CD45、CD19、CD34、CD14、CD90、CD105、CD29、CD44和CD73)、ELISA检测IL-10含量、Western Blot检测相关蛋白表达(STAT3、p-STAT3和TGF-β1)。结果 BCG对LR-MSCs细胞增殖(P=0.530,P>0.05)、凋亡(P=0.650,P>0.05)、表面标志物表达和相关蛋白STAT3表达均无显著影响(P>0.05);BCG促进LR-MSCs细胞IL-10产生(P<0.05)、TGF-β1和p-STAT3表达(P<0.05)。结论 BCG感染可能通过促进LR-MSCs细胞IL-10和TGF-β1表达,激活STAT3磷酸化,从而影响TB的发生、发展。