医学院校实验室准入制度实践与研究

实验室是学生教学、科研的主要场所,同时也是培养社会责任感的教学基地。实验室安全准入制度为其提供保障条件。文章以广东医科大学—生物化学与分子生物学实验室为例,剖析存在的主要问题,通过实践实验室的安全准入制度,阐述生物化学与分子生物学实验室安全准入制度的必要性及效果性,提升实验室的安全水平,为其他院校提供经验之谈。

BS69基因在肿瘤中的作用及分子机制的研究进展

BS69位于10号染色体p12.48,在多种癌症中表达下调,包括乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌等,因此被认为是一种潜在的肿瘤抑制因子。其在肿瘤中的作用及调控机制复杂多样,可通过NF-κB信号、JNK信号、RAS/MERK等信号通路以及与miRNA相互作用参与调控肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭和迁移。除了作为组蛋白突变体H3.3的特异性阅读器之外,BS69还被发现参与RNA剪接调控、细胞衰老、染色质重塑等。本文主要对BS69的基因结构、生理功能、信号通路作用机制、与肿瘤及各种疾病相关性展开综述。

DOTS策略下广东省结核病患者发现及登记管理的定性分析

目的 分析DOTS策略下广东省结核病患者发现和登记管理状况及存在问题,为做好新时期广东省结核病防治工作提供科学依据.方法 2014年7月至2015年7月,以广州、深圳、中山、汕头、梅州、湛江等为研究现场,对选择的各级结核病防治机构(17所)、定点医院(4所)、社区卫生服务中心(30所)相关负责人(共102名)进行深入访谈.结果 本研究共完成51场次、102名人员的个人深入访谈.访谈者中男92名,女10名;年龄38～53岁,平均年龄(43.4±5.1)岁;初级职称28名,中级职称56名,高级职称18名.广东省约80％的肺结核患者主要发现于门诊和体检,结核病患者丢失问题仍然比较严重,尤其是一些流动性较大的患者;部分地区结核病防治机构硬件建设明显落后,上门督导随访的比例并不高.结论 广东省需加强结核病患者发现及登记管理的政策支持力度,把省内经济欠发达地区结核病防治经费、基础设施建设、人力资源等方面的投入作为结核防治工作的重点.

鼻咽癌患者治疗前血脂水平的初步研究

目的探讨鼻咽癌患者治疗前血脂水平的变化,并探索是否可以作为预测鼻咽癌的指标。方法选取广西壮族自治区人民医院2013-2022年病理确诊并资料齐全的131例鼻咽癌患者作为鼻咽癌组,对照组为随机选取的119名健康体检人员,检测鼻咽癌患者治疗前的血脂参数总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)及脂蛋白a[Lp(a)]值并进行统计学分析。结果鼻咽癌组所有血脂参数与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.0001)。M分期组间比较,其中TC、LDL-C、ApoB差异有统计学意义(P<0.01)。受试者操作特征(ROC)曲线的结果显示,TC、HDL-C、ApoA1、Lp(a)、TC/HDL-C、LDL-C/HDL-C及ApoA1/ApoB的曲线下面积(AUC)>0.7,其中TC/HDL-C、LDL-C/HDL-C及ApoA1/ApoB 3个指标的AUC最大,分别为0.82、0.77、0.75,灵敏度分别为0.70、0.70、0.65,特异度分别为0.88、0.82、0.78,cut-off值分别为>3.97、>2.50、<1.24。结论鼻咽癌患者治疗前的TC、TG、LDL-C、HDL-C、ApoA1、ApoB及Lp(a)水平即发生异常。在M分期中发现鼻咽癌有远处转移组的TC、LDL-C、ApoB相比无远处转移组明显升高。TC/HDL-C、LDL-C/HDL-C和ApoA1/ApoB血脂比值参数可以作为预测鼻咽癌发生的指标,灵敏度和特异度均较好。

铁死亡与衰老

铁死亡(ferroptosis)是Dixon等人在2012年首次提出的一种新的细胞程序性死亡方式,它以细胞内铁水平过载和氧化性损伤为主要特征。衰老(aging)是由多种因素共同导致的不可避免的一种生理功能逐渐退化的过程,随着细胞衰老的进行,机体组织器官的生理功能会出现渐进性紊乱和衰退,从而增加机体患病和死亡的风险,例如,神经退行性疾病、癌症和心血管疾病等。目前,已经陆续有学者发现铁死亡与衰老之间存在千丝万缕的联系,特定类型的细胞衰老以及衰老相关疾病有时会伴随着细胞铁死亡的相关特征。但是,铁死亡与衰老之间是否存在因果关系,目前并未定论。本文综述了铁死亡与衰老的特点,并对两者之间的共有特征进行总结,例如,DNA损伤、氧化还原稳态失衡和线粒体功能障碍等。另外,本文还讨论了铁死亡与部分衰老相关疾病的联系,包括帕金森症、阿尔茨海默症,以及部分癌症。本文通过对铁死亡和衰老两个领域之间潜在的联系进行分析和总结,可以为铁死亡与衰老的基础性研究提供新的视角,进而为相关临床疾病的治疗提供有价值的线索。

衰老脂肪组织的微环境

脂肪组织是人体重要的能量储存库,也是最大的内分泌器官,在衰老过程中发生显著变化。脂肪组织中衰老的细胞通过分泌细胞因子、释放代谢物质等与邻近细胞相互作用,可造成脂肪组织功能异常,并引发全身性的慢性炎症或代谢紊乱。目前,对衰老过程中脂肪组织微环境的变化及其机制并不完全清楚。本文概述了衰老脂肪组织微环境的改变,包括脂肪组织中多种细胞类型的变化、细胞外基质堆积造成的纤维化、细胞因子等分泌表型和代谢物的改变;归纳总结了衰老脂肪组织微环境如何影响脂肪组织功能以及全身慢性低度炎症、胰岛素抵抗和早衰等;最后介绍了几种有望延缓脂肪组织衰老的策略,包括改善脂肪细胞产热、衰老细胞消融药物、饮食和锻炼。本综述对衰老脂肪组织微环境的深入探讨,有望为衰老相关疾病的治疗提供理论支撑。

脂代谢紊乱在肾脏衰老和肾纤维化中的作用

肾间质纤维化是终末期肾脏病的病理基础,肾脏衰老是肾间质纤维化的危险因素。越来越多的研究证明,脂代谢紊乱会导致肾脏衰老和肾间质纤维化。脂代谢紊乱引起的脂质堆积,会造成脂毒性和细胞应激性损伤,从而诱发衰老与细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的分泌。维持脂代谢稳态有助于减轻肾脏衰老与肾间质纤维化的发生发展。脂代谢途径的关键酶和调控蛋白有望成为改善肾脏衰老和肾间质纤维化的潜在靶点。本综述概括了脂代谢紊乱在肾脏衰老和间质纤维化中的作用,并对脂代谢中肾脏衰老和间质纤维化的预防靶点和策略进行了总结,为治疗肾纤维化发现新靶点提供了参考。

pcDNA3.1/mB7-H4-Fc在小鼠体内表达的实验性研究

目的获得重组pcDNA3.1/mB7-H4-Fc在肝内的高效稳定表达。方法采用流体动力法将表达mB7-H4-hIg融合蛋白的真核表达载体输注小鼠体内,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)和实时定量PCR(RT-PCR)的方法,定量检测pcDNA3.1/mB7-H4-Fc在小鼠体的内表达。结果经尾静脉注射的pcDNA3.1/mB7-H4-Fc能在肝组织中稳定表达,在48h时间点分泌的量达到最高,最大量约120ng/mL。结论成功将pcDNA 3.1/mB7-H4-Fc表达载体导入了小鼠肝脏,并获得了pcDNA3.1/mB7-H4-Fc在肝内的高效稳定表达。

早老症的分子机制

儿童早老症（Hutchinson Giford Progeria Syndrome，HGPS）是由于基因突变导致的疾病，它的发病率很低，大概是八百万分之一，患者出生的早期就开始出现衰老的容貌。

敲除PAMM基因对小鼠白色和棕色脂肪组织基因表达的影响

目的:巨噬细胞集落刺激因子诱导单核细胞活化的类过氧化物酶2(peroxiredoxin-like 2 activated in M-CSF stimulated monocytes,PAMM)是一种具有抗炎、抗氧化功能的蛋白,在脂肪组织中高表达,本文拟利用基因敲除小鼠,探究PAMM对白色和棕色脂肪组织形态及基因表达等的影响,以期为其功能研究提供新思路。方法:利用CRISPR-Cas9等技术构建PAMM基因敲除(knockout,KO)小鼠,用野生型(wild-type,WT)小鼠作为对照。收集腹股沟皮下白色脂肪组织(inguinal adipose tissue,IAT)和背部棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT),通过HE染色观察组织形态,利用RNA-seq和RT-qPCR检测相关基因的表达。结果:通过基因组PCR及测序,证明基因敲除小鼠构建正确。敲除PAMM后IAT和BAT形态无明显变化,但E2F靶点、未折叠蛋白反应等基因集在IAT或BAT中富集。比较WT和KO小鼠组织,发现33个基因的变化趋势在IAT和BAT中保持一致;而仅在IAT中出现变化的基因,分布在胞外、胞膜等部位,参与免疫和趋化反应等,与钙信号通路等相关;仅在BAT中出现变化的基因,分布在胞外基质、胞核等部位,参与葡萄糖稳态、生物节律等过程。RT-qPCR检测钙通路及生物节律相关基因,变化趋势与测序结果类似。本文还观察了敲除PAMM对IAT和BAT之间差异表达基因的影响,发现WT和KO小鼠BAT/IAT的差异基因和通路大多相同,但也有部分基因和通路发生了变化。结论:PAMM敲除对IAT和BAT的形态结构无明显影响,但显著影响了二者的基因表达及相关信号通路,还可能影响IAT和BAT之间的相互作用。

脂肪因子PAMM的生物学功能及其临床应用前景

PAMM(Peroxiredoxin-like 2 activated in M-CSF stimulated monocytes)是一种氧化还原调节蛋白,在脂肪组织中高表达,具有广泛的生物学作用,是脊髓损伤的标志物及某些肿瘤治疗的候选靶点。该文就PAMM的生物学功能及其临床应用前景作一综述。

鼻咽癌预后评估分子标志物的研究进展

复发和转移是影响鼻咽癌患者预后和生存质量的主要原因。目前临床上主要使用基于解剖学的TNM分期标准,并不能准确反映患者的预后情况,因此需要开发新的更为精准的鼻咽癌预后判断标准。通过对鼻咽癌发病机制的研究,分子标志物在鼻咽癌预后过程的预测价值日益引起关注。本文总结了近年来在鼻咽癌增殖、生存和侵袭转移等方面的研究进展,以及在这些研究过程中发现的相关分子标志物和它们在临床预后评估中的作用,综合分析这些分子标志物差异性表达与临床患者生存之间的相关性,证明了这些分子标志物在评估患者预后中的潜在价值。随着对鼻咽癌发病机制研究的深入,将会发现更多有价值的分子标志物,这为建立更为精准的鼻咽癌预后评估方法提供了可能。

基于分子动力学模拟研究温度对乳酸脱氢酶活性的影响

乳酸脱氢酶是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一,它能够催化丙酮酸形成乳酸,在食品发酵工业中具有很高的应用价值,但该酶易受高温影响,导致乳酸制品产量下降。为了研究不同温度对乳酸脱氢酶的构象及活性的影响,采用分子动力学模拟的方法,针对4种不同温度条件下(37、55、70和85℃)的乳酸脱氢酶分别进行了80 ns的计算模拟,分析了构象变化及酶活性中心的差异。研究发现,在37和55℃条件下,乳酸脱氢酶比较稳定;当温度升高至70和85℃,乳酸脱氢酶的均方根误差、均方根波动、回旋半径值和溶剂可及表面积显著增加,而85℃时的蛋白二级结构已发生较大改变,这表明高温会导致蛋白质构象不稳定。对比37和85℃条件下该酶的底物丙酮酸的结合能力,发现高温会导致丙酮酸的结合位点残基之间的距离增大,进而破坏底物分子结合的微环境。因此,乳酸脱氢酶在温度超过70℃时发生变性,并随着温度的升高变性程度增加,进而导致酶活性丧失,不利于其在食品发酵等方面的应用。本研究在原子水平上分析了4种不同温度对乳酸脱氢酶的影响,揭示了其酶活性及构象变化的关键信息,为乳酸制品在发酵过程中选择合适温度提供了理论支撑。

细胞衰老分子机制的研究进展

衰老是随着个体年龄的增长,细胞、组织、器官发生系统性病变,从而导致衰老相关疾病发生和寿命终结的现象。细胞衰老引起的细胞增殖能力的减退是造成器官衰老、机能衰退的根本原因之一。细胞衰老具有典型的细胞周期停滞、衰老相关分泌表型、大分子损伤及代谢紊乱4大特征。该文综述了非编码RNA与细胞衰老、细胞应激反应与衰老、能量代谢与衰老、衰老相关分泌表型、干细胞衰竭、免疫与衰老等方面的研究进展。

抑癌基因BLU在肿瘤中的作用及分子机制研究进展

BLU是位于3号染色体p21.31区域的一个重要的抑癌基因,BLU基因主要通过调节NF-κB信号、JNK信号和EPK-RAS-RAF-MEK(细胞外信号激酶)等信号通路来调控细胞周期、诱导细胞凋亡等发挥抑癌作用。BLU基因在许多实体肿瘤中表观遗传失活或者下调,可能原因是BLU启动子甲基化,去甲基化药物治疗后能够内源性恢复BLU基因的表达,恢复正常的抑癌作用。抑癌基因甲基化在肿瘤中经常发生,有望成为肿瘤诊断、预后的标志物和抗肿瘤的治疗靶点。现着重阐述BLU基因的结构、生物学作用、信号传导通路机制以及BLU基因与肿瘤相关性的研究进展。

microRNAs调节卵巢癌耐药分子机制的研究进展

卵巢癌是目前病死率最高的妇科恶性肿瘤,而化疗是卵巢癌术后治疗的主要手段,但其治疗效果却受限于耐药性。肿瘤耐药的产生机制复杂多样,包括药物运输蛋白的异常、细胞凋亡敏感性下降、自噬作用加强、DNA修复能力加强、药物代谢和靶点改变等。越来越多的证据表明,microRNAs通过调控多种耐药相关基因表达,在卵巢癌耐药产生中发挥重要作用。该文综述了近年来microRNAs影响卵巢癌化疗药物耐药的研究进展。

分子动力学模拟探索乳克鲁维酵母来源的β-半乳糖苷酶热变性条件

为了研究乳克鲁维酵母中β-半乳糖苷酶可能的熔解温度,采用分子动力学模拟的方法,分别对4种不同温度条件下(35、50、65、80℃)的β-半乳糖苷酶进行了50 ns的计算模拟,分析了酶的构象变化以及酶活性中心的差异。研究在原子水平揭示了β-半乳糖苷酶的温度耐受等关键信息:35℃为最适酶活温度,该温度下的β-半乳糖苷酶的整体构象最稳定;该酶在50℃时的原子波动性显著增加,表明此温度可能趋近熔解温度临界值;蛋白在大于65℃条件下丧失柔性,说明蛋白已经变性;进一步的构象分析发现80℃高温会破坏β-D-半乳吡喃糖(GAL)结合位点微环境。

超声微泡造影剂携雷帕霉素对人膀胱肿瘤系T24细胞增殖及凋亡影响的实验研究

目的对超声微泡造影剂携雷帕霉素(RPM)抑制膀胱癌系T24细胞生长活性的作用进行分析,探究超声微泡造影剂携RPM在膀胱肿瘤患者中的应用前景;方法建立空白对照组、RPM组以及超声微泡造影剂携RPM组处理T24细胞温育24h后,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)和流式细胞仪测定T24细胞生长和凋亡情况,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)以及蛋白免疫印迹法(Western blot)方法测定增殖细胞核抗原(PCNA)的mRNA以及蛋白的表达情况,进一步研究RPM抗肿瘤作用机制和超声微泡造影剂的应用价值,为临床应用提供实验依据;结果 MTT法测定结果显示RPM和超声微泡造影剂携RPM处理过后的T24细胞生长能力明显下降,其中超声微泡造影剂携RPM组与空白对照组、RPM组存在显著差异(P<0.05);流式细胞仪检测表明经RPM和超声微泡造影剂携RPM处理过后的处于G1期的T24细胞数量明显高于对照组(P<0.05),并且T24细胞出现大量凋亡;RPM组和超声微泡造影剂携RPM组两组PCNA的mRNA表达产物光密度值与对照组之间存在显著差异且T24细胞PCNA的蛋白的表达量明显减少,其中超声微泡造影剂携RPM也明显低于RPM组。结论超声微泡造影剂携RPM具有良好的抑制T24细胞生长的作用,为膀胱癌的治疗提供了实验参考,表现出良好的临床应用前景。

分子动力学模拟揭示MTHFR的温度耐受性机制

为了研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的温度耐受性,我们采用分子动力学模拟的方法,构建了四种模拟体系(37、45、55和65℃)并对MTHFR分别进行了100ns的计算,分析了酶活性中心的差异及其引起的构象变化。研究发现,在37和45℃条件下,MTHFR整体构象比较稳定;大于55℃时,蛋白的三维结构可能丧失柔性,这表明蛋白质可能已达到熔解温度,通过构象分析发现高温会破坏FAD结合位点微环境。本研究在原子水平揭示了MTHFR的温度耐受等关键信息。

胞孢子酮B对雄激素剥夺促发的前列腺癌细胞侵袭的逆转作用和机制

目的:探讨胞孢子酮B(cytosporone B,Csn-B)对雄激素剥夺治疗所促发的前列腺癌细胞侵袭的作用和分子机制。方法:培养人雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP并加药处理,实验分为对照(control)组、Caso⁃dex(抗雄激素药物)组、MDV3100(雄激素受体拮抗剂)组、Csn-B+Casodex组和Csn-B+MDV3100组。通过Transwell法检测各组细胞的侵袭能力;分别提取细胞核和细胞质组分,并应用Western blot法检测神经生长因子诱导克隆B(nerve growth factor-induced clone B,NGFI-B/Nur77)蛋白水平;通过RT-qPCR和Western blot法分别检测基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的mRNA及蛋白表达水平;分别提取微管蛋白β-tubulin的聚合和游离组分,通过Western blot法检测其表达水平。结果:与control组相比,Casodex组和MDV3100组LNCaP细胞的侵袭能力显著增强,胞核和胞质中Nur77蛋白水平均显著下调,MMP-9的mRNA和蛋白表达水平显著上调,β-tubulin蛋白的聚合/游离(polymerized/soluble,P/S)比值显著减小(P<0.05);分别与Casodex组和MDV3100组相比,Csn-B+Ca⁃sodex组和Csn-B+MDV3100组LNCaP细胞侵袭能力显著减弱,胞核和胞质中Nur77蛋白水平均显著上调,MMP-9的mRNA和蛋白表达水平显著下调,β-tubulin蛋白的P/S值显著增大(P<0.05或P<0.01)。结论:胞孢子酮B能逆转雄激素剥夺促发的前列腺癌细胞侵袭,其机制可能依赖于Nur77蛋白分别在细胞核和细胞质中主导的双重分子通路。