膜反向斑点杂交法检测广东人G6PD基因6种常见突变

【目的】探讨膜反向斑点杂交法在广东人G6PD基因6种常见突变同步检测中的应用。【方法】用高铁血红蛋白还原试验和G6PD/6-PGD酶活性比值法进行G6PD缺乏症筛查。应用多重PCR方法扩增G6PD基因目的片段。用Premier Primer6.0软件设计和优化针对广东人常见6种G6PD基因突变型的特异性寡核甘酸探针,用乙基-3-二甲氨基丙碳二亚胺(EDC)法处理尼龙膜并固定探针,制成G6PD基因突变检测用膜条。多重PCR扩增产物与固定在膜条上寡核苷酸探针进行杂交,通过显色反应判读结果。以G6PD基因测序为金标准,对膜反向斑点杂交法进行评价。【结果】26例标本中膜反向斑点杂交法检测结果:95A→G突变型5例,1024C→T突变型3例,1376G→T突变型8例,1388G→A突变型7例,392G→T突变型1例,未发现1311C→T突变型,有两例检测为阴性。膜反向斑点杂交法未能测出的2例标本经基因测序证实存在392G→T突变,其余24例膜反向斑点法与基因测序法的结果完全一致,符合率为92.3%(24/26)。【结论】在优化探针设计和杂交条件前提下,膜反向斑点杂交法可用于广东人G6PD基因6种常见突变型的同步检测。

Sysmex XE-5000血液分析仪复检规则的改进与临床应用

目的利用Sysmex XE-5000(简称XE-5000)血液分析仪的报警系统,对血液分析结果异常的"阳性"标本进行人工镜检,并对不符合复检标准的"阴性"标本重新进行形态学检查,建立适合我院的血细胞组合复检规则。方法对1 000份符合复检标准的"阳性"及不符合复检标准的"阴性"标本(不包括血液病区的标本)重新进行形态学检查;然后,参考国际血液学复检专家组制定的"41条"规则,通过计算出其真阳性率、假阳性率、真阴性率、假阴性率和统计分析,从而推断出适合我院的血细胞组合复检规则。结果 XE-5000血液分析仪的检测结果阳性预测值为66.7%,阴性预测值为99.2%,复检率(阳性率)为25.8%,漏诊率(假阴性率)为3.4%。在25.8%的复检率中,假阳性率为10.5%。并且其中无血液病细胞漏检情况。结论采用XE-5000血液分析仪新组合复检规则后,复检率和漏诊率都较低,具有临床可操作性和有效性,使技术人员在有限的时间内能够完成异常标本的复检,减少其劳动强度,提高其工作效率。

慢性荨麻疹患者幽门螺杆菌检测的意义

目的:研究慢性荨麻疹与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)感染的相关性,探讨HP检测在慢性荨麻疹患者诊疗中的意义。方法:选取2014年4月至2015年7月门诊治疗的慢性荨麻疹患者420例,并随机选取同期体检中心健康体检者450例为健康对照组,采用胶体金法检测患者及健康体检者血清HP尿素酶抗体,分析慢性荨麻疹组和健康对照组两组HP的阳性情况;同时将162例慢性荨麻疹HP阳性患者分为实验组88例和对照组74例,对照组患者应用常规荨麻疹治疗,实验组患者在对照组治疗基础上增加抗HP三联疗法,分析HP检测阳性的慢性荨麻疹患者采用不同治疗方法的临床疗效。结果:慢性荨麻疹组HP阳性率为38.6%,健康对照组HP阳性率为14.4%,差异有统计学意义(P<0.05);HP检测阳性患者实验组临床疗效有效率显著高于对照组的有效率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:慢性荨麻疹与HP感染之间存在密切的相关性,HP检测对慢性荨麻疹患者的诊疗具有重要的临床意义。

妊娠期甲状腺功能指标参考区间的建立

目的：建立广东省人民医院孕早期和孕中期甲状腺功能指标参考区间。方法参照美国国家临床生化学院（NACB）指南排除标准并结合广东省人民医院产科临床筛选出279名正常单胎孕妇（孕早期147名和孕中期132名），用化学发光免疫法测定血清游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）和促甲状腺激素（TSH），对其结果进行统计分析，建立相应的参考区间，并按中华人民共和国卫生行业标准WS/T402进行验证。结果以中位数（M）及双侧限值（P2.5和P97.5）表示参考区间：（1）FT3：3.48～5.20 pmol/L（孕早期）、3.26～5.46 pmol/L（孕中期）；（2）FT4：8.05～14.86 pmol/L（孕早期）、7.09～12.12 pmol/L（孕中期）；（3） TSH：0.10～2.98 mIU/L（孕早期）、0.05～2.48 mIU/L（孕中期），均验证通过。除FT4孕早期外，各孕期的FT3、FT4和TSH检测结果与非妊娠对照组的结果相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论各实验室需要建立本实验室妊娠期甲状腺功能指标参考区间，才能准确评估和判断妊娠期妇女的甲状腺功能状态。

正常人外周血Th17细胞的频率、表型及其功能特征

目的:研究正常人外周血Th17细胞的频率、表型及其功能特征。方法:分离正常人外周血单个核细胞(PBMCs),加入刺激剂PMA和离子霉素,同时加入蛋白转运抑制剂BFA,细胞置于37℃、50mL/LCO2培养箱培养4～5h。收集细胞,以荧光素-mAb标记后,用流式细胞仪检测。结果:正常人PBMCs经PMA+Ionomycin刺激后,Th17细胞的频率为(1.63±0.72)%,细胞表达CD45RO(99.32±0.79)%、CCR6(97.37±3.04)%和CCR4(96.27±3.49)%;约15%的Th17细胞表达IFN-γ,超过80%的Th17细胞表达IL-2,但Th17细胞几乎不表达IL-10或IL-4。结论:正常人外周血中存在记忆性Th17细胞,该细胞表达趋化因子受体CCR6和CCR4,且具有不同于Th1和Th2细胞的功能特征。

老年消化道肿瘤患者外周血CD4^+ CD25^(high)调节性T细胞的表达及其临床意义

目的:通过对CD4+CD25high调节性T细胞(CD4+CD25high Treg)在老年消化道肿瘤患者外周血中表达情况的研究,探讨其与肿瘤发生、发展的关系。方法:采用流式细胞术检测26例健康青年人、26例健康老年人及41例老年消化道肿瘤患者外周血CD4+CD25high Treg的水平,并进行统计学分析。结果:与健康青年人相比,健康老年人外周血CD4+CD25high Treg水平升高[(1.98±0.50)%vs(1.73±0.22)%,P<0.05];而老年消化道肿瘤患者外周血CD4+CD25high Treg水平比健康老年人显著升高[(3.53±1.83)%vs(1.98±0.50)%,P<0.01];进一步的分层分析显示:随着疾病的进展,外周血CD4+CD25high Treg水平升高,在肿瘤进展期(Ⅲ～Ⅳ期)尤其明显,与Ⅰ～Ⅱ期比较,差异有统计学意义[(4.06±1.24)%vs(2.82±0.76)%,P<0.05]。结论:老年消化道肿瘤患者外周血CD4+CD25high Treg比率升高,可能在老年消化道肿瘤的发生、发展中起重要作用。

人类凝血因子Ⅻ基因一种新突变的发现与确证

目的对一例凝血因子Ⅻ缺陷症患者进行凝血因子Ⅻ(FactorⅫ,FⅫ)基因序列分析,以发现可能存在的基因变异。方法 PCR结合直接测序方法对该患者FⅫ基因全部14个外显子及其侧翼序列进行分析,应用PCR产物反向测序法或等位基因特异PCR技术对突变位点进行确证,随机选择100名体检健康人作为正常对照。结果该患者FⅫ基因第14外显子存在G1706A错义突变,5'非翻译区的46位核苷酸为TT纯合子;等位基因特异PCR证实在100名体检健康人中未发现FⅫG1706A突变。结论 FⅫ基因的G1706A错义突变及5'非翻译区的46TT多态性可能与本例患者FⅫ缺陷有关。

一种新的3.8kb缺失α地贫基因的鉴定

目的首次报道一种新的3.8 kb缺失α地贫基因,利用gap-PCR技术建立该缺失片段检测方法。方法采集先证者及其母亲外周血,进行血液学参数常规地贫基因检测,对常规基因检测结果存在疑问标本重新设计新gap-PCR引物及体系以测试发现证实新的缺失α地贫基因类型。结果先证者检出新的α珠蛋白基因缺失,缺失片段大小为3814 bp,确认先证者α地贫基因型为-α4.2/-α3.8,其母亲基因型为αα/-α3.8。结论本研究首例报告了一种新发现的3.8 kb缺失α地贫基因,丰富了世界地中海贫血突变基因数据库,特异性gap-PCR的建立为该类型地贫基因检出提供方便、有效的检测手段。

LDL—C非配套试剂检测室内质控血清靶值确定初探

目的探讨非配套试剂检测LDL—C室内质控血清靶值的确定方法。方法笔者参照CLSI的EP9-A2文件，用贝克曼-库尔特生化分析仪配套LDL广C试剂为比较方法（X）、非配套试剂（四川迈克）为实验方法（Y）检测患者血清和3个水平待定值的质控血清。以CLIA’88的1／2EA为判断标准对Y和X检测患者血清结果进行临床可接受性分析：若临床可接受，Y常规检测质控血清均值（n=20）为暂定靶值；3个月后取10份患者血清进行比对，若满意（PT≥80％），Y检测LDL—C的质控血清累积在控均值确定为靶值。结果X，Y两组患者血清结果（mmol／L）分别为3．26±1．37，3．19±1．32，P〉0．05（P=0．812）；相关性分析r=0．994，Y=0．962X＋0．053，医学决定水平2．58，4．10和4．91mmol／L处SE分别为0．046，0．104和0．135，均小于1／2EA，Y结果临床可接受，3个水平质控血清暂定靶值为1．61，2．46，3．37；3个月后患者血清比对结果满意（PT=100％），3个水平室内质控血清靶值为1．60，2．51和3．44。结论同一项目使用不同试剂检测时，应在患者血清比对结果具有可比性的基础上确定非配套试剂检测室内质控血清靶值。

495例血小板相关免疫球蛋白检测结果的临床资料分析

血小板自身抗体可导致血小板破坏增加或生成障碍,导致患者发生出血性疾病。血小板自身抗体可分为特异性糖蛋白自身抗体、药物相关自身抗体、抗同种血小板抗体和血小板相关免疫球蛋白（platelet associated immunoglobulin,PAIg）等。PAIg包括PAIgG、PAIgM、PAIgA[1]。流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）检测PAIg具有快速、灵敏、

丁型肝炎病毒抗体IgM与乙肝表面抗原相关性探讨

目的:探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测丁型肝炎病毒抗体Ig M(抗-HD Ig M)与乙肝表面抗原(HBs Ag)之间的相关性。方法:检测某三甲医院4 428例门诊和住院患者抗-HD Ig M;经阻断试验和巯基乙醇破坏试验后确认抗-HD Ig M真假阳性;真阳性样品同时用ELISA和电化学发光法(ELC)检测HBs Ag;假阳性样品进行类风湿因子(RF)的检测。结果:经ELISA检测有155例抗-HD Ig M阳性样品,确认有118例是真阳性、37例假阳性。118例抗-HD Ig M真阳性样品用ELISA和ELC法检测HBs Ag都有超过50%是阴性;37例抗-HD Ig M假阳性样品有28例RF阳性。结论:抗-HD Ig M阳性同时HBs Ag阴性主要可能是HBV隐匿性感染;HDV急性感染时HBs Ag大量消耗、浓度太低、难以检测等原因。

儿童与成人慢性荨麻疹患者过敏原检测结果的比较分析

慢性荨麻疹（Cu）是一种反复发作的变应性皮肤黏膜疾病，病程〉6周，病因复杂，治疗困难，严重影响患者的身心健康。随着环境中具有抗原性的物质逐渐增多，近年来，CU发病率有上升趋势。有研究发现，

非免疫缺陷者马尼菲青霉病致左肩脓肿1例

马尼菲青霉病（penicilliosis mameffei,PSM）是由马尼菲青霉（Penicillium mameffei,PM）感染所引起的一种深部真菌感染性疾病,既往报道PSM多继发于免疫低下的患者）,鲜见于免疫正常者,临床表现无特异性,若对其认识和警惕性不足,极易误诊。

艰难梭菌感染临床特征与危险因素分析

目的初步研究广东省人民医院艰难梭菌感染(CDI)的临床特征,并对其相关危险因素进行分析,为提高临床CDI的诊治水平及采取积极有效的预防控制措施奠定基础。方法收集2015年1月-2015年8月间120例住院腹泻患者的粪便标本,进行艰难梭菌毒素A/B检测、厌氧培养,结合临床症状诊断是否为CDI;收集所有患者的临床资料,分析CDI的临床特点和发病相关的危险因素,采用SPSS 17.0对数据进行统计分析。结果 120例腹泻患者中,共检出CDI 24例占20.0%;单次送检、双次送检、三次及以上送检的阳性检出率分别为10.3%、22.2%、73.3%,差异有统计学意义(P<0.05);单因素分析结果显示,年龄≥65岁、男性、糖尿病、帕金森病、广谱青霉素的使用与CDI的发生有关(P<0.05),多因素分析未发现CDI发生的独立危险因素。结论年龄≥65岁、男性、糖尿病、帕金森病、广谱青霉素的使用可能是CDI的危险因素,多次送检粪便标本可以提高CDI的阳性检出率。

临床实验室定量项目不确定度评估方法选择与评价

目的:探讨临床实验室定量项目不确定度评估方法。方法:以临床样本批内变异(CVW%)、长期室内质控累积变异(CVB%)、室间质评偏倚(CVBias%)、校准品不确定度(CVCal%)为分量,按不同方法合成不确定度。结果:9个项目以AACB方法(CVB%、CVCal%)合成u1%,以CVW%、CVB%、CVCal%合成u2%,按国内专家建议以CVW%、CVB%、CVBias%(2010)合成u3%,u2%与u1%、u3%相关性好(P<0.05),u2%与u3%差异无显著性(P>0.1)。以CVW%、CVB%、CVBias%(2009)合成u4%,由于PSA、FPSA分组差异,CVBias%(2009)较大,u4%与u2%、u3%差别有统计学意义(P<0.05),无相关性(P>0.05)。扩展至21个项目,u1%、u2%、u3%均相关(P均<0.01),u2%与u3%差别无显著性(P>0.05)。结论:以CVW%、CVB%、CVCal%为分量评估不确定度方法可行,合理的室间质评偏倚可作为不确定度分量。

临床化学定量项目测量的不确定度评估分量的分析

目的:对临床化学定量项目测量的不确定度评估分量进行分析。方法:1.用三种方法(方法 1:u1%=[CVB%2+CVCal%2]1/2、方法 2:u2%=[CVW%2+CVB%2+CVCal%2]1/2和方法 3:u3%=[CVW%2+CVB%2+CVBias%2]1/2)评估钾等10个项目测量的不确定度。2.用方法 2评估封闭检测系统的项目,方法 3评估开放检测系统参加EQA的项目及酶类项目。结果:1.钾等10个项目得到u2%与u1%的r=0.985(P<0.01)、u2%与u3%的r=0.949(P<0.01),u2%与u1%、u3%差异无统计学意义(P均>0.05)。2.封闭检测系统的项目u2%中CVB%为主要分量。3.开放检测系统参加EQA的项目及酶类项目u3%中CVB%、CVBias%为主要分量。结论:三种方法评估临床化学定量项目的测量的不确定度均可行,可根据不同的检测系统采用不同方案。室内质控累积变异、室间质评偏倚是影响测量的不确定度评估的重要分量。

2011-2013年广州地区发热呼吸道感染患者的人流感病毒监测及其亚型的流行特征分析

目的了解2011-2013年广州地区发热呼吸道症候群患者的人流感病毒及其亚型流行特征。方法收集广州市2011-2013年5家哨点医院共2 085例发热同时伴随有呼吸道感染症状病人的咽拭子标本及相关临床信息,对人流感病毒进行筛查,并结合临床信息,分析其流行特征。结果 2011-2013年收集到的2 085份样本中237例经普通PCR检测为人流感病毒阳性,检出率为11.4%,其中人流感病毒甲型和乙型阳性的标本分别为202例和35例（阳性率分别为9.68%和1.68%）,以甲型流感为主;人流感病毒阳性率最高组别为学生（大中小学生）组,就诊率最高科室为儿科;男女比例1.34：1,性别发病率差异无统计学意义;亚型流行高峰呈不均匀分布,其中流感病毒甲型发病高峰为3-5月;流感病毒乙型分布较为分散;广州地区人流感病毒是以0~岁组、7~岁组及18~39岁年龄组易感,各年龄组发病率差异有统计学意义;广州地区甲型流感病毒也是以18~39岁组高发,各年龄组发病率差异无统计学意义;乙型感染则以7~17岁组发病率最高。结论 2011-2013年广州并未暴发大型的人流感病毒疫情,人流感病毒以甲型流感为主,乙型流感也有散发,未发现丙型流感病毒感染;流行高峰出现在3-5月,18~39岁年龄组发病率最高。