密斑刺鲀(Diodon hystrix)gnrh基因的克隆及表达分析

密斑鲀刺(Diodon hystrix)不仅具有食用价值,同时也是传统的中药及保健食品,但目前关于密斑刺鲀的生殖内分泌调控研究较少,限制鲀了密斑刺的人工繁育基础理论的发展。总所周知,促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是生殖内分泌调控的关键因子之一。利用转录组分析及分子克隆技术,获得密斑刺鲀促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)gnrh2和gnrh3基因的cDNA开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)序列,并利用生物信息学的方法,获鲀得密斑刺gnrh2 cDNA开放阅读框共279 bp,可编码92个氨基酸残基;密斑鲀刺gnrh3 cDNA开放阅读框共270 bp,可编码89个氨基酸残基。通过系统进化分析表明,密斑鲀刺GnRH与鲀科类的鱼具有较近的亲缘关系。通过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)半定量的方法检测gnrh2和gnrh3基因在密斑刺鲀各组织中的分布,结果发现gnrh2和gnrh3基因在脾、鳃和垂体中的表达量较高,而在心脏中的表达量最低。此外,利用鲀实时荧光定量的方法检测了密斑刺gnrh2和gnrh3基因在性腺发育不同时期的表达模式,结果显鲀示密斑刺gnrh2基因在不同的性腺发育时期中没有显著性的变化,而gnrh3基因随着性腺发育成熟而不断升高。研究主要获得两个创新性的重要结果:首鲀先是证实了密斑刺存在两种gnrh基因(gnrh2和gnrh3),其次是提示了gnrh3基因可能是鲀密斑刺生殖调控的主要gnrh类型。研究结果可为深鲀入研究密斑刺生殖内分泌调控机理提供研究方向和基础。