在哺乳动物细胞中表达hIGF-1

目的:构建hIGF-1真核表达载体,通过293F细胞表达hIGF-1蛋白。方法:合成已知hIGF-1碱基序列,构建pMD18T-hIGF-1基因工程载体,PCR扩增得到hIGF-1基因序列,构建真核表达载体pcDNA3.1-hIGF-1。转化大肠杆菌DH5α菌株,经菌液PCR法、双酶切法鉴定阳性克隆,并送样测序确保阳性克隆的hIGF-1碱基序列正确。通过脂质体法将基因工程载体pcDNA3.1-hIGF-1转染293F细胞,Western-blot检测hIGF-1蛋白的表达。然后再对hIGF-1的核酸序列和蛋白功能结构进行生物信息学分析。结果:琼脂糖凝胶电泳显示在250bp处出现亮色条带,PCR成功扩增出目的条带,双酶切鉴定显示在5 400bp附近获得亮色条带,说明得到pcDNA3.1-hIGF-1基因工程载体,Western-blot鉴定结果表明成功表达hIGF-1蛋白。结论:成功构建真核表达载体pcDNA3.1-hIGF-1,并表达hIGF-1蛋白。