抗人B型钠尿肽噬菌体抗体库的构建及噬菌体抗体的筛选

目的利用噬菌体表面展示技术构建抗人B型钠尿肽(BNP)的单链噬菌体抗体库及筛选抗人BNP的特异性单链噬菌体抗体。方法从正常人外周血淋巴细胞提取总RNA,扩增抗体重链和轻链可变区基因片段,加入连接子并构建单链噬菌体抗体库。用人BNP包被的免疫管筛选噬菌体。经过4轮的富集筛选,从最后一轮噬菌体感染的大肠杆菌TG1中随机挑选20个单菌落,用ELISA方法测定阳性噬菌体抗体,并将这些噬菌体抗体与BSA进行交叉反应试验。结果ELISA测试表明,20个单菌落中有8株吸光度较高而且交叉反应较弱的阳性噬菌体抗体,DNA测序符合预期目标。结论成功构建人B型钠尿肽噬菌体抗体库,并筛选出表达人源性BNP单克隆抗体噬菌体,为下一步抗BNP单链抗体的表达纯化及临床应用打下了基础。