规模化养殖条件下生猪肠道微生物资源分离和鉴定

肠道微生物作为机体的重要组成部分,与生猪健康密切相关。为了获取生猪肠道微生物资源,本研究同时采用有氧分离和厌氧分离技术,从12份新鲜猪粪便中分离获得174株细菌。通过16S rRNA基因比对分析对菌株进行初步鉴定后发现,有氧分离条件下获取的105株细菌隶属于8个科、13个属和19个种,其中以弗格森埃希氏杆菌(Escherichia fergusonii)居多;厌氧条件下获取的69株细菌隶属于7个科,13个属,20个种,大部分是福氏志贺氏菌(Shigella flexneri)和弗格森埃希氏杆菌(Escherichia fergusonii);其中,潜在益生菌株28株,包括粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、河流漫游球菌(Vagococcus fluvialis)和乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)。本研究有助于加深对生猪肠道可培养微生物资源和微生物生态的认识,为肠道微生态和动物益生菌的进一步研究和应用提供优良菌种资源。

深海放线菌Actinomadura cremea中的生物碱类化合物

为寻找结构新颖的海洋微生物次生代谢产物,对深海放线菌Actinomadura cremea的次级代谢产物进行了研究,经多种柱色谱技术从其A1培养基的乙酸乙酯部位分离得到13个生物碱类化合物,通过波谱学方法并结合文献数据比对鉴定其结构分别为:9H-吡啶并[3,4-b]吲哚(1)、N-乙酰基色胺(2)、N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)丙酰胺(3)、N-(4-羟基苯乙基)丙酰胺(4)、N-乙酰酪胺(5)、N-苯乙基乙酰胺(6)、戊内酰胺(7)、环(苯丙-缬)二肽(8)、环(脯-缬)二肽(9)、环(亮-缬)二肽(10)、环(丙-缬)二肽(11)、环(亮-异亮)二肽(12)和环(丙-异亮)二肽(13)。化合物1、3、4、7~13首次从Actinomadura属中发现,所有化合物均首次从深海放线菌Actinomadura cremea中得到,丰富了该菌种的次生代谢产物研究工作。

垂枝红千层内生真菌的分离鉴定及其生物活性

目的:研究垂枝红千层内生真菌的分离鉴定及其生物活性,为进一步发掘活性代谢产物奠定基础。方法:通过组织分离法分离培养垂枝红千层内生真菌,通过ITS序列分析对分离的真菌进行鉴定,并采用滤纸片法和SRB法对内生真菌的发酵液提取物进行抗菌和细胞毒活性研究。结果:共分离得到29个菌株,鉴定为17属20种,其中以黑孢霉属(Nigrospora)、间座壳属(Diaporthe)和刺盘孢属(Colletotrichum)为优势类群;菌株A797、A798和A809的发酵提取物,对金色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌均具有较好抑制活性(抑菌圈直径≥13 mm);当发酵液提取物的作用浓度为100μg/mL时,菌株A781、A785和A805对4株受试肿瘤细胞均具有较明显的抑制作用(抑制率≥90%以上)。结论:垂枝红千层内生真菌多样性丰富,部分菌株具有较好的抗菌和细胞毒活性,值得进一步深入研究。

巴戟天内生真菌Diaporthe lithocarpus的次级代谢产物及其细胞毒活性研究

目的:研究巴戟天内生真菌Diaporthe lithocarpus A740的次级代谢产物及其细胞毒活性。方法:采用正、反相硅胶柱、凝胶柱和高效液相等多种色谱技术对菌株A740的固体发酵产物进行分离纯化,并通过NMR、MS等波谱方法鉴定化合物结构,采用SRB法对得到的单体化合物进行细胞毒活性测试。结果:从菌株A740的发酵产物中分离纯化得到13个化合物,分别鉴定为:2⁃羟基苯乙酸乙酯(1)、4⁃(2⁃羟乙基)苯甲酸(2)、4⁃羟基苯乙酸乙酯(3)、4⁃甲基⁃5,6⁃二氢吡啶⁃2⁃酮(4)、(3R,4R)⁃cis⁃4⁃hydroxy⁃5⁃methylmellein(5)、viridianol 1(6)、5⁃羟基⁃7⁃甲氧基⁃4,6⁃二甲基⁃1⁃(3H)异苯并呋喃酮(7)、phomopene(8)、diaporisoindole B(9)、diaporisoindole A(10)、p⁃苯三醇(11)、异戊二烯基异苯并呋喃A(12)、lithocarin A(13)。结论:其中,化合物1~7为首次从Diaporthe属真菌中分离得到。化合物10、12和13对神经癌细胞(SF⁃268)、人乳腺癌细胞(MCF⁃7)、人肝癌细胞(HepG2)和人肺癌细胞株(A549)四株肿瘤细胞株具有细胞毒活性,其中化合物10对这四种肿瘤细胞株的IC50为23.96~35.19μmol/L。

沉香药材商品规格等级划分研究

目的:对沉香药材进行商品规格等级划分研究。方法:采用相关性分析、单因素二元logistic回归分析及K-均值聚类分析等方法进行分析,探讨各样品间萜类化合物理化反应鉴别、醇溶性浸出物含量(T)、GC-MS指纹图谱相似度、GC-MS指纹图谱表观丰度与GC-MS指纹图谱共有组分之间的内在联系。结果:醇溶性浸出物含量与γ-桉叶油醇、喇叭茶萜醇和马兜铃酮含量呈显著或极显著正相关(P<0.05或P<0.01);可依据醇溶性浸出物含量将沉香药材分为3个等级(一等:T≥30.0%;二等:30.0%>T≥20.0%;三等:20.0%>T≥10.0%)。结论:醇溶性浸出物含量可作为沉香药材等级划分的指标,GC-MS指纹相似度可作为等级标准的辅助指标。

巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae中ProL蛋白的表达纯化及性质分析

【目的】从巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae中克隆proL基因,异源表达ProL蛋白并研究其理化性质,为解析ProL在合成Cytorhizins类新骨架活性化合物途径中的生物学功能奠定基础。【方法】利用PCR技术从C.rhizophorae中克隆proL基因,通过同源重组的方法将proL基因片段插入到pET28a原核表达载体,在大肠埃希菌Escherichia coli中异源表达,使用尿素对ProL蛋白梯度复性,采用SDS-PAGE技术和质谱测序对ProL蛋白进行分析和鉴定,运用生物信息学方法对ProL蛋白的氨基酸序列相似性进行分析,推测其编码蛋白的结构和功能。【结果】克隆得到proL基因的编码序列,开放阅读框全长909 bp,编码303个氨基酸,ProL蛋白分子式为C1495H2320N424O444S13,相对分子质量为33754.22,原子数为4696,等电点为5.69,为酸性蛋白。ProL蛋白在大肠埃希菌中以包涵体的形式大量表达,尿素梯度复性获得了纯度为98.9%的ProL蛋白。生物信息学分析发现ProL氨基酸序列在已知蛋白中与Aspergillus ibericus XP025570169.1的酰胺水解酶2相似性最高,为59.40%,其三维结构模型中包含8个α-螺旋和8个β-折叠,保守氨基酸序列为207~216位。【结论】ProL蛋白属于酰胺水解酶超家族,预测其为一种新颖蛋白,该蛋白可能在生成高度氧化的二苯甲酮类化合物途径中起水解作用。

微波结合真菌发酵液辅助水蒸气蒸馏法提取马来沉香挥发油的工艺优化

目的采用正交试验设计优化微波结合内生真菌发酵液浸泡辅助水蒸气蒸馏法提取马来沉香挥发油的提取工艺。方法对真菌发酵液浸泡时间、料液比及微波时间3个因素进行考察,将不同工艺所得挥发油的乙醚萃取液进行GC-MS分析,以总峰面积和倍半萜、芳香族类化合物的总峰面积作为综合指标,优化最佳工艺条件。结果真菌发酵液浸泡时间对沉香挥发油提取工艺具有显著影响,最佳工艺参数为发酵液浸泡4 d,料液比1∶8,微波时间对提取没有影响。结论真菌发酵液浸泡辅助水蒸气蒸馏法可用于沉香挥发油的提取。

罗霄山脉大型真菌区系分析与资源评价

本文采用踏查法对罗霄山脉地区大型真菌资源进行了为期5年的调查,共采集标本5,100多号。结合形态学与分子生物学方法,鉴定出大型真菌2门7纲20目72科218属672种,其中幕阜山脉115种、九岭山脉168种、武功山脉77种、万洋山脉220种、诸广山脉193种;新增罗霄山脉新记录属37个、新记录种514种。对罗霄山脉大型真菌物种组成分析表明,含10种以上的优势科有18科,其物种数占物种总数的73.36%,为多孔菌科、蘑菇科、粉褶蕈科等;含5种以上的优势属有34属,其物种数占物种总数的55.36%,包括粉褶蕈属(Entoloma)、鹅膏属(Amanita)、小皮伞属(Marasmius)等;在该山脉发现中国特有属2个,中国特有种46个。大型真菌资源利用价值评估表明,罗霄山脉有食用菌133种、药用菌136种、毒菌87种,部分种类具有良好的应用前景。本研究为该地区大型真菌资源的保护、利用和管理提供了较重要的科学依据。