雷诺嗪对犬离体肾内动脉张力的影响

目的观察雷诺嗪（ranolazine）对杂种犬离体肾内动脉张力的影响及其机制。方法杂种犬体质量10~15 kg,气管插管麻醉后,肝素500 IU/kg抗凝,迅速开腹,取下肾脏,置于4℃预冷氧饱和的K-H液中,清洗干净残留血液。冰浴下显微操作分离出肾内动脉,制备成1.8~2.0 mm长的血管条,用两根直径40μm的不锈钢丝穿过血管条管腔,固定在微血管测定仪浴槽内的钳夹上,记录血管对药物作用产生的张力变化。分别给予血管收缩剂1μmol·L-1苯肾上腺素（phenylephrine,Phe）、0.1μmol·L-1血栓素A2受体激动剂（U46619）和60 mmol·L-1氯化钾刺激血管产生持续性收缩,平稳后,采用累积给药法加入雷诺嗪,观察不同浓度的雷诺嗪对不同收缩剂诱导犬肾内动脉张力的影响。结果雷诺嗪分别呈浓度依赖性舒张Phe预收缩内皮完整的、去内皮的或用内皮一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,e NOS）抑制剂L-硝基-精氨酸甲酯（Nω-nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride,L-NAME）孵育的肾内动脉环,其p D2分别为6.32±0.18、6.35±0.16、6.36±0.04,其最大舒张率（Emax）分别为97.78%±1.22%,98.05%±3.24%和94.71%±0.75%;但对U46619和60 mmol·L-1氯化钾预收缩的肾动脉环无明显舒张作用。结论雷诺嗪有呈浓度依赖性舒张Phe诱导犬肾内动脉收缩的作用,且无明显内皮依赖性。

利用超声彩色多普勒技术评价大鼠腹主动脉狭窄模型

目的利用超声彩色多普勒技术对构建的大鼠腹主动脉缩窄(abdominal aortic constriction,AAC)模型进行检测,评价动物模型的心脏结构、功能变化。方法以0.3 mm银夹缩窄双侧肾动脉上段(约0.5 cm处)的腹主动脉制备压力超负荷大鼠模型36只,按时间分为AAC-2周组、AAC-4周组和AAC-8周组及假手术(Sham)组(每组12只)。建模后2周、4周和8周时,用Vevo 2100型动物微小超声心动图仪进行M-mode超声检测心功能指标,如射血分数(ejection fraction,EF)、左心室短轴缩短率(fractional shortening,FS)、左心室舒张期前壁厚度(left ventricular end-diastolic anterior wall thickness,LVAWd)、左心室收缩期前壁厚度(left ventricular endsystolic anterior wall thickness,LVAWs)、左心室舒张期后壁厚度(left ventricular end-diastolic posterior wall thickness,LVPWd)、左心室收缩期后壁厚度(left ventricular end-systolic posterior wall thickness,LVPWs)、左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic internal dimension,LVEDd)、左心室收缩末期内径(left ventricular endsystolic internal dimension,LVEDs);和超声彩色多普勒测量腹主动脉缩窄前、后的血流量,二尖瓣E/A值;测量左心室质量指数(left ventricular mass index,LVMI)等。结果(1)同Sbam组比较,AAC-2周组的EF、FS、LVEDd、LVEDs明显降低(P<0.01),而LVAWd、LVAWs、LVPWd、LVPWs均明显增加(P<0.05);腹主动脉缩窄前段血流量与管腔增大,缩窄后段血流量和管腔显著变小;且出现E/A值和LV MI改变明显(P<0.01),AAC-2周组左心室肥厚明显。(2)同AAC-2周组比较,AAC-4周和AAC-8周组EF、FS、LVAWd、LVAWs、LVPWd、LVPWs明显降低,而LVEDd、LVEDs明显增加,且缩窄后段血流速度、血流量明显变小,而E/A值及LVMI增加明显(P<0.05)。AAC-4周组与AAC-8周组心脏体积、左心室腔明显增大呈心力衰竭病变。结论利用动物微小彩色多普勒技术能直观、准确地检测和评价以银夹缩窄腹主动脉的大鼠模型;AAC模型2周时心肌肥厚明显、4周时出现心力衰竭,8周时心力衰竭严重。

CircRNA＿005647通过结合miR-27b-3p抑制小鼠心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达

目的研究环形RNA circRNA005647对小鼠心肌成纤维细胞(CFs)纤维化表型的影响及分子机制。方法利用血管紧张素Ⅱ缓释泵[1.46 mg/(kg·d),2周]诱导建立小鼠高血压心肌纤维化模型,采用Masson染色观察心肌纤维化程度。实时荧光定量PCR检测发生纤维化的小鼠心肌及血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠CFs中circRNA005647的表达。利用放线菌素D和RNase R实验检测circRNA005647的稳定性。利用重组circRNA005647腺病毒(rAd-circRNA005647)感染小鼠CFs,检测CFs中纤维化相关基因Col1a1、Col3a1、Acta2的mRNA和蛋白表达变化。双荧光素酶报告基因实验、RNA反义纯化实验及RNA Pulldown实验验证circRNA005647与微小RNA miR-27b-3p的结合作用。结果 RT-qPCR结果显示,circRNA005647在高血压诱导纤维化的小鼠心肌和Ang-II处理的小鼠CFs中表达增强(P<0.01)。放线菌素D和RNase R实验证实circRNA005647比其宿主基因Myo9a mRNA具有更好的稳定性(P<0.01)和抵抗RNase R的降解作用。过表达circRNA005647可显著抑制小鼠CFs中纤维化相关基因Col1a1、Col3a1和Acta2表达(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验、RNA反义纯化实验及RNA Pull down实验一致性地证实了circRNA005647与miR-27b-3p之间存在特异结合作用,miR-27b-3p具有促进小鼠CFs的纤维化表型作用(P<0.05),并可减弱circRNA005647对小鼠CFs中纤维化相关基因表达的抑制作用。结论 CircRNA005647在心肌纤维化中表达增强,并通过结合miR-27b-3p发挥抑制心肌纤维化作用。