miR-23b-3p靶向PALM3对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的研究miR-23b-3p对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症的作用及机制。方法将肺泡上皮细胞A549细胞分为对照组、感染组、转染组、感染组+转染组;对照组A549细胞常规培养,感染组用1×108 CFU/mL肺炎链球菌培养A549细胞,转染组转染不同载体,感染组+转染组在A549细胞被肺炎链球菌处理前48h进行转染。qRT-PCR检测细胞中miR-23b-3p和paralemmin-3(PALM3)mRNA的水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中PALM3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax),酶联免疫法(ELISA)检测肺炎链球菌诱导后细胞培养上清中白介素-6(interleukin 6,IL-6)和白介素-10(interleukin 10,IL-10)的含量;双荧光素酶报告系统验证miR-23b-3p与PALM3的关系。结果与对照组相比,感染组A549细胞中miR-23b-3p、IL-10、Bcl-2含量明显降低(P<0.05),PALM3、IL-6、Bax水平及细胞凋亡率明显升高(P<0.05);过表达miR-23b-3p和干扰PALM3表达均可抑制肺炎链球菌诱导的A549细胞凋亡和炎症;miR-23b-3p靶向负调控PALM3的表达;过表达PALM3逆转了过表达miR-23b-3p对肺炎链球菌诱导的A549细胞凋亡和炎症的作用。结论 miR-23b-3p靶向PALM3抑制肺炎链球菌诱导的A549炎症和细胞凋亡。

肌醇依赖酶1α调控下胰岛β细胞凋亡和衰老的关系

目的探讨肌醇依赖酶1α(IRE1α)信号通路调控的胰岛β细胞凋亡与衰老的关系。方法取雄性野生型C57BL/6小鼠50只,另将胰岛β细胞特异性敲除IRE1α的小鼠作为实验组(IRE1α-IKO),IRE1αflox/flox小鼠(RIP cre阴性)作为对照组(IRE1α-WT),每组各20只。检测不同周龄C57BL/6小鼠随机血糖、IRE1α信号通路的激活水平及胰岛增殖/凋亡相关分子表达水平。检测不同周龄对照组、实验组小鼠的随机血糖及血清胰岛素水平、糖耐量和胰岛素耐量水平,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测对照组、实验组56周龄小鼠胰岛中增殖和凋亡相关分子的表达水平。结果随着周龄增加,野生型C57BL/6小鼠随机血糖水平、IRE1α磷酸化水平及caspase 3水平均增加,胰岛增殖相关分子胰腺十二指肠同源盒-1(PDX-1)和细胞周期素D2(cyclin D2)表达水平降低(P <0.05)。随着周龄增加,实验组小鼠的随机血糖、胰岛素水平及糖耐量、胰岛素耐量较对照组明显改善(P <0.05)。高龄(56周龄)实验组小鼠的cyclin D2表达水平较对照组明显增加,chop表达水平明显降低(P <0.05)。结论 IRE1α信号通路激活参与衰老引起胰岛β细胞凋亡增加、增殖减少的过程。