非人灵长类动物急性肝功能衰竭模型的建立

目的:构建一种稳定的非人灵长类大动物急性肝衰竭模型.方法:将15只食蟹猴随机分成3组,经颈外静脉分别注射0.45、0.3和0.15g/kgD-氨基半乳糖胺,构建食蟹猴肝衰竭动物模型.动态检测给药前(0h)、给药后12、24、36、48、60、72、96h生命体征、颅内压(ICP)及血清丙氨酸转氨酶(ALT)、凝血酶原时间(PT)、总胆红素(TBIL)、血氨(NH3)的变化.观察动物临床表现及病程进展情况,记录动物生存时间,动物死亡后行组织病理学检查.结果:0.45g/kg和0.3g/kg组动物全部死亡,生存时间分别为56.1h±8.1h和109.8h±11.2h,0.15g/kg实验猴除1只98h死亡外其余全部存活.0.45g/kg和0.3g/kg组动物各时点的ALT、TBIL、PT、NH3及ICP均明显高于基线值(0h),差异有统计学意义(P<0.05),0.15g/kg实验猴各指标在60h后渐恢复正常.死亡动物组织病理检查见肝细胞坏死,肝内炎性细胞浸润.结论:以0.3g/kg的D-氨基半乳糖胺诱发食蟹猴急性肝功能衰竭动物模型,符合急性肝功能衰竭的临床表现、病理变化,可用于急性肝功能衰竭的动物实验研究.

巢式PCR检测食蟹猴和猕猴中SRV和SFV

目的利用巢式PCR方法检测圈养的食蟹猴(Macaca fascicularis)和猕猴(Macaca mulatta)中猴D型逆转录病毒(Simian Type D Retrovirus SRV)和猴泡沫病毒(Simian foamy virus SFV)。方法针对SRV-env和SFV-pol基因的保守区序列设计特异性外引物,然后再设计特异性内引物。将外引物扩增出的片段克隆到PJET1.2blunt载体中作为阳性对照,运用NCBI中BLAST软件比对测序结果。用巢式PCR方法分别检测食蟹猴和猕猴中SRV和SFV。结果发现食蟹猴中SFV感染率为65.2%,SRV感染率为9.5%,猕猴中SFV感染率为60.5%,SRV感染率为12.8%。结论圈养的食蟹猴和猕猴SFV的感染率均较高,SRV感染率很低。

性成熟前食蟹猴生精细胞的发育进程

目的阐明性成熟前食蟹猴生精细胞的发育进程。方法分别采集性成熟前不同年龄(0岁、0.5岁、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁)食蟹猴睾丸,制作石蜡切片,进行HE染色和PAS/H染色。根据生精细胞的染色特性,分析性成熟前食蟹猴生精细胞的发育进程,并对食蟹猴精原干细胞进行初步鉴定。结果 HE染色结果显示,1岁及以下食蟹猴生精上皮上生精细胞仅有精原干细胞(包括Ad、At及Ap型精原细胞),1.5岁食蟹猴生精上皮上开始出现B型精原细胞,3岁食蟹猴生精上皮上出现精母细胞,4岁食蟹猴生精上皮上出现从精原干细胞到精子的所有生殖细胞。PAS/H染色结果显示,1～2.5岁食蟹猴Ad型精原细胞胞质呈PAS阳性,At型精原细胞胞质呈PAS弱阳性,Ap型精原细胞胞质呈PAS阴性;其他生精细胞及支持细胞胞质呈阴性;0.5岁及以下,3岁及以上食蟹猴生精细胞的胞质PAS/H染色特性与前者存在差异。结论本文详细阐述了性成熟前食蟹猴生精细胞随年龄增长的渐次性发育模式,并建立了性成熟前食蟹猴精原干细胞原位鉴定的一种新方法,这些研究结果为食蟹猴精原干细胞的其他相关研究奠定了基础。

3种食蟹猴早孕诊断方法的比较

本试验旨在对3种食蟹猴早孕诊断方法进行比较,找出比较准确、可靠的诊断方法。在食蟹猴怀孕第20天时用直肠触诊、B超检查和孕酮值检测3种方法进行早孕诊断,在怀孕第30天时B超确诊是否怀孕。结果表明,B超检查的准确率为96.4%;直肠触诊的准确率为92.9%;孕酮值检测的准确率为64.3%。因此B超检查准确率高,是食蟹猴怀孕诊断的金标法;直肠触诊准确率较高且方便、经济,适合基层生产中进行大批量诊断;孕酮值检测确诊率较低,但可作为早孕诊断的辅助方法。

食蟹猴妊娠早期血清生殖激素的变化

目的:通过研究食蟹猴妊娠早期生殖激素的变化,为进行食蟹猴胚胎-胎仔发育毒性试验提供数据支持。方法:食蟹猴在怀孕第0天(gestation day 0,GD0)和怀孕第20天(GD20)采血分离血清检测孕酮水平。怀孕的雌猴于GD27～GD100每周采血1次,采用化学发光法检测血清中雌二醇、孕酮和催乳素的水平。结果:怀孕雌猴GD20的孕酮水平显著高于GD0。GD0～GD27孕酮水平缓慢上升,GD27达到高峰后下降,在GD48至最低,随后至GD100呈逐渐上升趋势。GD0～GD27雌二醇水平也缓慢上升,之后降低,在GD34达到最低水平,随后呈上升趋势,至GD100达到最高。催乳素水平从CD0开始缓慢上升,GD69达最高,后趋于平稳。结论:食蟹猴妊娠早期主要生殖激素随妊娠发展呈现动态变化,孕酮水平可作为早孕诊断的辅助参考。

食蟹猴精原干细胞体外培养体系的初步建立

为了掌握食蟹猴(Macaca fascicularis)精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养生长特性,并建立其培养体系。手术法获得幼年期食蟹猴单侧睾丸,改良的两步酶消化法获得其细胞悬液,添加特定培养液进行体外培养,以碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定培养细胞,并评价不同饲养层细胞和不同接种密度对SSCs体外培养的增殖效果。结果表明,含10%FCS等补充物的DMEM液可支持食蟹猴SSCs的体外存活与增殖,培养3～5 d可观察到SSCs集落,AKP染色呈阳性;以支持细胞为饲养层体外培养SSCs 3 d和7 d,SSCs集落形成率均显著高于皮肤成纤维细胞饲养层(P<0.05),且以1×105个/mlSSCs接种密度是较好的原代培养开始。该培养体系的初步建立可为体外研究非人灵长类精子发生机制和SSCs基因修饰提供便利。