基于分子对接的三角帆蚌酪氨酸酶抑制肽筛选及活性评价

【目的】筛选和鉴定三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)珍珠层蛋白酶解产物中的酪氨酸酶抑制肽,为美白肽的研究与开发提供依据。【方法】以三角帆蚌珍珠层粉为原料,基于其蛋白组成特性,采用物理改性和可控酶解技术制备珍珠层活性肽(Peptides from nacre powder,P-NP),通过测定其2,2′-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH)的清除能力、酪氨酸酶抑制活性以及对紫外线B(UVB)辐照损伤人永生化角质形成细胞(HaCaT)的影响,探究其体外活性。采用液质联用技术(LC-MS/MS)和分子对接技术从P-NP中鉴定并筛选出三角帆蚌酪氨酸酶抑制肽,并进行固相合成和体外活性验证。【结果】P-NP的ABTS和DPPH自由基清除效果较佳,肽质量浓度为1.00、14.00 mg/mL时,两者清除率分别为41.58%和11.23%;P-NP的酪氨酸酶活性抑制能力良好,其半抑制浓度(IC_(50))值为7.51 mg/mL。P-NP质量浓度在83.22μg/mL时,显著提高UVB损伤HaCaT细胞的生长活力(P<0.05)。P-NP经LC-MS/MS鉴定后筛选出相对分子质量集中在500~1000的61条肽序列作为候选肽库,分子对接筛选出3条潜在的酪氨酸酶抑制肽,其主要通过氢键与酪氨酸酶活性中心及其以外的位点相结合,从而达到抑制其活性的作用。其中,Tyr-Pro-Asn-Pro-Tyr(YPNPY)对酪氨酸酶抑制作用最强,IC_(50)为(0.545±0.028)mmol/L,主要抑制类型为竞争型抑制。【结论】三角帆蚌珍珠层活性肽具有良好的清除自由基和酪氨酸酶抑制活性。

不同方法提取马氏珠母贝外套膜胶原蛋白理化性质比较

【目的】系统分析不同方法提取的马氏珠母贝(Pinctada martensii)外套膜胶原蛋白的理化性质及生物学功能。【方法】分别采用酸-酶法和热水法从外套膜中提取得到两种胶原蛋白(A-PSC(Pm)和HSC(Pm)),对其氨基酸组成、微观结构及热变性温度等理化特性进行比较分析。【结果】HSC(Pm)提取率高于A-PSC(Pm);HSC(Pm)中,Gly、Glu与Arg相对含量较高,分别为20.16%、17.57%和10.07%;而A-PSC(Pm)中,Glu、Asp与Arg相对含量为19.67%、11.63%和10.07%;紫外光谱和红外光谱分别显示,两种胶原蛋白均在220 nm左右有强吸收峰,且具有典型的胶原蛋白特征带(酰胺A、B、Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ带);扫描电镜结果显示,A-PSC(Pm)呈致密多孔网状结构,HSC(Pm)则基本为薄片状;DSC分析结果表明,HSC(Pm)具有更好的热稳定性。【结论】酸-酶法及热水法提取的胶原蛋白均具有类V型胶原蛋白特性,其结构特征及其理化性质均存在差异,可根据需求选择特定的胶原蛋白提取方法用以开发不同类型的产品。

牡蛎及其酶解产物抗皮肤光老化的初步研究

文章探讨了香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)肉粉(Oyster meat,OM)及其酶解产物(Oyster hydrolysis,OH)对紫外线诱导的小鼠(Mus musculus)皮肤光老化的保护作用。紫外线(UVA+UVB)每天照射构建小鼠皮肤光老化模型并灌胃OM和OH,分为低、中、高三组(30、90、180 mg·kg^(−1))给药,持续8周。结果表明,OM和OH可减轻小鼠皮肤皱纹,提高皮肤弹性,减少皮下血管的萎缩,防止血管通透性增加;皮肤HE染色结果表明,中高剂量的OM和OH可显著减缓表皮层过度角化增厚(P<0.05);Masson染色和醛品红染色结果表明,OM和OH可减少胶原纤维的卷曲和降解,避免弹性纤维的异常增生,恢复真皮细胞外基质网络的排列;与模型组相比,OM和OH可使皮肤中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)的活力显著提高,同时使丙二醛(MDA)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)的浓度降低(P<0.05);OM和OH可抑制基质金属蛋白酶(MMP-3、MMP-9)的表达,显著降低真皮中羟脯胺酸(Hyp)的降解;此外,高剂量的OH可显著降低皮肤中炎症因子细胞白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达,并通过提高转化生长因子(TGF-β)来提高皮肤抗炎能力。

牡蛎酶解超滤组分对TM4小鼠睾丸支持细胞的氧化损伤保护作用

该研究通过雷公藤甲素(TP)损伤TM4细胞构建生殖细胞损伤模型,探究了香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)酶解超滤组分对TP诱导的TM4小鼠(Mus musculus)睾丸支持细胞氧化损伤的保护作用,并检测了牡蛎酶解超滤组分的分子量分布与微量金属元素含量,比较分析了各个超滤组分对TP诱导的TM4细胞存活率以及还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醇(MDA)和活性氧(ROS)水平的影响。结果表明,牡蛎酶解超滤组分富含铜(Cu)、锌(Zn)、锰(Mn)和硒(Se)等微量金属元素;经超滤分级,小分子与大分子物质得到有效分离;与模型组相比,各个超滤组分均不同程度地提高了经TP诱导的TM4细胞存活率,其中<3、3~5和5~10 ku超滤组分的细胞存活率高于>10 ku超滤组分;而<3 ku超滤组分可有效抵抗TP诱导的TM4细胞氧化应激损伤,减少细胞内ROS产生和脂质过氧化,增强TM4细胞的抗氧化能力。