水禽养殖水体污染防控技术的研究进展与展望

水禽的饲养离不开水,而集约化养殖导致的水体污染对水禽养殖产业发展产生了消极的影响。养殖污水通常由于细菌滋生导致细菌、病原体等有害物质浓度升高,从而影响水禽的健康与性能。养殖污水处理是改善上述现状的常用做法。水禽养殖污水处理的解决方案目前主要有以下几种:向养殖水中添加光合细菌、枯草芽孢杆菌等生态制剂;向养殖水中添加聚铝化合物等净水剂;改变养殖模式。本文系统分析了养殖污水对水禽健康和性能的影响,介绍了水禽养殖污水防控技术的研究进展,并对未来水禽养殖污水处理综合防控技术的发展方向进行了展望。

广东省水禽种业的发展现状、存在问题及未来趋势

本文针对广东省水禽业发展实际,通过分析水禽种质资源开发与利用的现状和水禽育种与保种的工作进展,深入阐明了广东水禽育种工作中存在的问题与难点,并对未来水禽种业的发展趋势和前景进行了探讨,为广东省水禽育种工作的发展提供了建议和参考。

基于物联网的水禽健康养殖环境监控系统研究

为降低水禽养殖风险,信息化管理水平低,减少水禽供应断档问题,采用物联网和云计算技术研制了基于物联网的水禽健康养殖环境远程监控系统。该系统运用多种传感器在线采集水禽养殖环境数据,通过多种方式对设备进行动态调控,确保水禽在无应激的环境下健康生长。该系统已在广州钟村某水禽养殖实验基地稳定运行并在汕尾某水禽养殖企业应用推广。结果表明,较好地实现了水禽养殖环境在线监控和数据分析功能,能够满足水禽养殖信息化管理的需要,有效促进了水禽传统养殖模式向信息化、数字化养殖模式转型升级,具有广泛应用前景。

广东省鹅细小病毒的分离及序列分析

从广东省鹅主要养殖区分离出2株鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV),分别命名为GDQY2017和GDYJ2017,纯化后测序分析。VP基因的系统发育分析结果表明,2株GPV单独形成一个分支,与疫苗株距离较远。选择压力分析结果表明,分离株的1位点有强烈的净化选择。氨基酸分析结果显示,与疫苗株相比,分离的GPV菌株含有22个不同的氨基酸残基,并且具有阳性选择的位点(Arg116Gln)。

广东地区致雏鹅痛风鹅星状病毒的鉴定及遗传演化分析

为了解广东地区鹅星状病毒(GoAstV)的流行和变异情况,本研究于2019年~2021年从广东清远、广州、江门和汕尾4个地区采集83份疑似患痛风雏鹅的肝脏和肾脏病料样品。制备的组织病理切片结果显示,痛风雏鹅肝脏和肾脏组织出现大量的炎性细胞浸润和细胞坏死,经RT-PCR检测鉴定到其中72份样品为Go AstV阳性。从4个地区各选1份阳性样品对鉴定到的Go Ast V进行全基因组的PCR扩增,结果显示获得4株长度均为7033 bp的Go AstV全基因组序列。采用Meg Align分析的核苷酸同源性结果显示,4株Go Ast V全基因组序列的同源性为98.4%~99.4%,与报道的Go AstV-2参考株全基因组序列的同源性为97.1%~99.7%,而与Go AstV-1全基因组序列的同源性仅为57.3%~57.7%。与其他禽星状病毒相比,Go AstV与火鸡星状病毒2型(TAstV-2)的同源性最高,其全基因组序列同源性约为65.0%~65.3%。Cap蛋白的氨基酸序列分子特征分析结果显示,4个鉴定株Cap蛋白的氨基酸序列均发生了Y^(36)H突变,其中Go Ast V/Guangdong/NH2/2019和Go Ast V/Guangdong/GZ-HOD/2021 Cap蛋白氨基酸序列还发生了E^(456)D等突变。采用MEGA7.0软件构建Go Ast V全基因组和Cap基因的遗传进化树,结果显示Go AstV可划分为Go AstV-1和Go AstV-2两个分支,本研究鉴定到的4株Go Ast V均属于Go AstV-2分支。本研究首次初步揭示了广东地区鹅群Go AstV的流行特点和遗传变异情况,为Go AstV感染的防控和疫苗株的筛选提供参考。

饲粮n-6/n-3 PUFA对鸭蛋中脂肪酸组成和咸蛋黄品质的影响

【目的】本试验旨在研究蛋鸭饲粮中n-6/n-3多不饱和脂肪酸(n-6/n-3 PUFA)对鸭蛋中脂肪酸组成和咸蛋黄品质的影响。【方法】试验选用健康、体重相近的21周龄福建龙岩山麻鸭180只,随机分为2组,每组6个重复,每个重复15只鸭。分别饲喂玉米-豆粕(对照组)和玉米-豆粕-亚麻籽(试验组)饲粮,n-6/n-3 PUFA分别为16和8,试验周期为12周。饲养试验结束后,采集新鲜鸭蛋测定脂肪酸组成,腌制咸蛋,测定咸蛋黄内质特性、质构特性、风味和滋味。【结果】与n-6/n-3 PUFA 16饲粮相比,n-6/n-3 PUFA 8饲粮(1)增加了鲜蛋黄中C18∶0、C20∶0、C22∶0、C22∶1n9、C18∶2n6c、C18∶3n3、C20∶3n6、C20∶4n6、n-6 PUFA以及n-3 PUFA含量,降低了鲜蛋黄中n-6/n-3 PUFA(由10.20降至5.65,P<0.05);(2)降低了咸蛋黄的硬心率和硬心比重(P<0.05),不影响出油率和沙性(P>0.05);降低了咸蛋黄的硬度,增加了弹性(P<0.05),但黏附性、内聚性、胶黏性和咀嚼性无显著变化(P>0.05);降低了咸蛋黄中醇醚醛酮类的气味(P<0.05);降低了咸蛋黄的苦味和鲜味,增加了滋味的丰富性(P<0.05),对涩味和咸味无显著影响(P>0.05)。【结论】蛋鸭饲粮n-6/n-3 PUFA由16降为8时,可降低鲜蛋黄中n-6/n-3 PUFA,改善咸蛋黄品质和风味。

基于PCA-SVR-ARMA的狮头鹅养殖禽舍气温组合预测模型

为提高狮头鹅养殖禽舍气温预测精度,提出了基于主成分分析(Principal Component Analysis,PCA)、支持向量回归机(Support Vector Regression,SVR)融合自回归滑动平均(Autoregressive Moving Average,ARMA)模型的狮头鹅养殖禽舍气温组合预测模型。在建模过程中,运用主成分分析法筛选狮头鹅养殖禽舍气温的关键影响因子,消除变量之间冗余信息,约简预测模型结构;采用SVR-ARMA构建狮头鹅禽养殖舍气温组合预测模型,先通过SVR对气温进行预测,再由基于ARMA模型的残差预测值修正气温预测结果。利用该模型对广东省汕尾市2018年7月21日至2018年7月30日期间的狮头鹅养殖禽舍气温进行预测。结果表明,该组合预测模型取得了良好的预测性能,与标准BP神经网络、标准SVR、PCA-BPNN(反向传播神经网络,Back Propagation Neural Network)、PCA-SVR和PCA-BPNN-ARMA等模型对比分析,其评价指标平均绝对误差、均方根误差和平均绝对百分比误差分别为0.1832℃、0.4540℃和0.0059,均表明所提出的组合模型具有更高的预测效果,不仅能够满足狮头鹅养殖禽舍气温实际精准调控的需要,还为狮头鹅健康养殖和种苗繁育环境精细化管理提供决策。

对虾养殖溶解氧浓度组合预测模型EMD-RF-LSTM

溶解氧(DO)浓度是对虾养殖水质检测的核心指标。为提高对虾养殖溶解氧浓度的预测精度,本研究提出了一种基于经验模态分解、随机森林和长短时记忆神经网络(EMD-RF-LSTM)的对虾养殖溶解氧浓度组合预测模型。首先采用经验模态分解(EMD)对养殖水质溶解氧浓度时序数据进行多尺度特征提取,得到不同尺度下的固有模态分量(IMF);然后分别采用长短时记忆神经网络(LSTM)和随机森林(RF)对高、低频不同尺度IMF进行建模;最后结合各分量预测结果构建叠加模型,实现对溶解氧浓度时序数据的综合预测。本研究模型在广东省湛江市南三岛对虾养殖基地展开了试验及应用,在基于真实数据集的性能测试中,经验模态分解后EMD-ELM模型与极限学习机(ELM)模型对比,平均绝对误差(MAPE)、均方根误差(RMSE)和平均绝对误差(MAE)分别降低了30.11%、29.60%和32.95%。在经验模态分解基础上用RF和LSTM对不同特征尺度的本征模态分量分别预测后叠加求和,EMD-RF-LSTM模型预测的精度指标MAPE、RMSE和MAE分别为0.0129、0.1156和0.0844,其中关键指标MAPE较EMD-ELM、EMD-RF和EMD-LSTM分别降低了84.07%、57.57%和49.81%,预测精度显著提高。结果表明,本研究针对经验模态分解后高、低频分量分别预测的策略可有效提升综合性能,表明本研究模型具有较高的预测精度,能够较准确地实现对虾养殖水体中溶解氧浓度预测。

两种不同养殖模式对肉鹅生长性能和粪便微生物区系的影响

为了解笼养和平养模式对肉鹅生长性能和粪便微生物区系的影响,试验将70只0日龄马岗鹅随机分为笼养组和平养组,每组35只,记录肉鹅的死淘率、体重和采食量,到9周龄试验结束时,检测血液生长激素水平,并用16S rRNA测序技术分析和粪便微生物区系变化。结果显示:在整个试验期,笼养组的死淘率和料重比均高于平养组,且料重比呈极显著性升高(P<0.01),平均日增重则极显著低于平养组(P<0.01);肉鹅9周龄时,笼养组的血清GH、IGF-1和T3水平均低于平养组,ADR水平则高于平养组,但均无显著性差异(P>0.05)。与平养组相比,笼养组粪便微生物区系中优势菌群发生变化,特别是粪便中厚壁菌门和变形菌门比例降低,拟杆菌门比例升高;KEGG富集通路分析表明,平养组粪便菌群主要涉及内分泌、新陈代谢和信号转导,而笼养组粪便菌群富集通路大多数属于新陈代谢类。结果表明笼养模式通过降低肉鹅采食量和体重增长抑制肉鹅生长性能,改变粪便微生物区系组成,使粪便优势微生物富集于新陈代谢途径。

水禽StAR 基因克隆、表达及其对睾丸发育的影响

旨在获取水禽StAR基因的结构和组织表达规律,初步了解其对水禽睾丸发育的影响。本研究选取山麻鸭和狮头鹅的下丘脑和睾丸组织为材料,克隆StAR基因,并采用实时荧光定量PCR方法检测该基因在山麻鸭和狮头鹅不同组织中的表达规律,并进一步比较该基因在不同时期鹅睾丸组织中的表达差异。本试验克隆获得鸭StAR基因3个转录本(dSTAR-A、dSTAR-B和dSTAR-C),dSTAR-A和dSTAR-B编码序列相同,编码283个氨基酸,而dSTAR-C编码238个氨基酸;获得鹅STAR基因两个转录本(gSTAR-A和gSTAR-B),均编码283个氨基酸。比对分析发现,鸭和鹅StAR氨基酸序列与其他禽类的同源性较高,在物种间的保守性高。StAR基因在鸭和鹅的各个组织中均有表达,其中在睾丸中表达量最高,在腹脂、胸肌和腿肌也有较高的表达水平。比较不同时期公鹅的睾丸,发现该基因在3岁龄时表达水平极显著高于1和52日龄(P<0.01),且在成年公鹅繁殖期的表达水平极显著高于休产期(P<0.01)。结果表明,StAR基因可能是鹅睾丸发育所必需的关键基因,并参与成年公鹅繁殖性能的调控。

基于平行向量自回归时间序列VAR(2)的蛋鸭室外养殖环境预测模型

养殖环境的精准预测一直是水禽养殖业亟需解决的棘手难题。本文以温度、湿度、风向和太阳辐射等室外养殖环境参数为研究对象,通过平行向量自回归时间序列VAR(2)(Vector Autoregressive (2))模型预测方法,优化具有效率高、精度高的蛋鸭养殖环境线性预测模型,实现了蛋鸭健康养殖环境精准预测、预警与控制。

白藜芦醇对急性热应激条件下鸭肝抗氧化能力和细胞凋亡的影响

旨在探索饲粮中添加白藜芦醇对急性热应激条件下山麻鸭肝抗氧化能力和细胞凋亡的影响,确定添加白藜芦醇对山麻鸭肝组织SIRT1信号通路、抗氧化酶系统及凋亡相关基因的作用。试验选取120只60日龄体重相近且健康的雌性山麻鸭,随机分为2组,每组60只,既对照组(C,饲喂基础饲粮)和白藜芦醇组(RES,饲喂添加400 mg·kg^(-1)白藜芦醇的基础饲粮)。两组动物均在常温(24℃±2℃)下饲养,15 d后,两组动物体重无明显差异。随后分别将每组动物随机分为3组,每组20只,在39℃环控仓中分别放置0、30、60 min。热应激处理后,采集鸭血清样本及肝组织,应用qRT-PCR、Western blot、TUNEL技术对SIRT1信号通路及凋亡相关基因的mRNA、蛋白水平和细胞凋亡数进行检测。采用生化法检测血清及肝中的氧化指标。结果显示,与对照组相比,白藜芦醇组HSP70和HSP90 mRNA表达有所升高。同时,白藜芦醇激活了SIRT1途径,增加了下游PGC-1α、TFAM mRNA表达,显著增加了热应激60 min条件下Nrf1、Nrf2核蛋白的表达。白藜芦醇提高了血清中T-AOC水平,在热应激60 min时,白藜芦醇显著提高了血清中SOD、CAT、AIHR的水平并显著降低MDA的含量。在同一热应激条件下,RES组肝中T-AOC、CAT、GSH-Px均高于C组,RES组MDA的含量显著低于C组。在急性热应激条件下,RES组的肝细胞凋亡数显著低于C组,且白藜芦醇降低了Bax、Bak1、Bax/Bcl-2 mRNA的表达量,同时增加了Bcl-2蛋白的表达量,降低了Bax、Caspase3、Bax/Bcl-2蛋白的表达量。综上所述,饲料中添加400 mg·kg^(-1)白藜芦醇可以激活鸭肝SIRT1信号通路,使促凋亡基因的表达量下降,抗凋亡基因的表达量增加。白藜芦醇可提高鸭肝的抗氧化能力和抗细胞凋亡的能力,能够改善急性热应激对鸭肝的氧化损伤。

白术多糖缓解环磷酰胺诱导的岭南黄鸡氧化应激和肝脏细胞凋亡

本研究旨在探索白术多糖(PAMK)对环磷酰胺(CTX)诱导的岭南黄鸡氧化应激和肝脏细胞凋亡异常的调节作用。选用240只健康1日龄岭南黄鸡,随机分成4个组,每组6个重复,每个重复10只鸡。对照组和环磷酰胺组(CTX组)饲喂基础饲粮,白术多糖组(PAMK组)和白术多糖+环磷酰胺组(PAMK+CTX组)饲喂添加400 mg/kg PAMK的基础饲粮。在20、21、22日龄时,CTX组和PAMK+CTX组的岭南黄鸡腿肌注射20 mg/kg CTX,对照组和PAMK组的岭南黄鸡腿肌注射0.5 mL生理盐水。试验期27 d。结果显示:与CTX组相比,PAMK+CTX组肝脏细胞凋亡现象有所缓解,肝脏细胞状态有所恢复,炎性浸润程度有所降低,点状坏死灶数量明显减少;此外,血清丙二醛(MDA)含量显著下降(P<0.05),血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.05),肝脏组织半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)的蛋白相对表达量和半胱氨酸蛋白酶9(Caspase9)的mRNA相对表达量显著下调(P<0.05)。由此可见,PAMK能够缓解由CTX引起的岭南黄鸡氧化应激和肝脏细胞凋亡增多的现象。

鸭干扰素因子7基因克隆及组织表达特异性分析

【目的】构建樱桃谷鸭干扰素调节因子7(interferon regulatory factor 7,IRF7)基因CDS区序列的真核表达载体,分析IRF7蛋白结构和生物特性,检测不同组织内IRF 7基因的表达水平,为进一步对鸭天然免疫系统开展研究奠定基础。【方法】利用RT-PCR扩增樱桃谷鸭IRF 7基因的CDS区,构建真核表达质粒,利用Western blotting检测蛋白表达。使用荧光显微镜观察Poly(I∶C)对IRF7蛋白核移位的影响。对IRF 7基因序列进行核苷酸相似性比对,构建系统进化树,并通过生物信息学方法在线分析预测IRF7蛋白的分子和结构特征。实时荧光定量PCR检测不同组织中IRF 7基因的表达特异性。【结果】成功克隆樱桃谷鸭IRF 7基因CDS区,长1536 bp,共编码512个氨基酸,通过对重组质粒的真核表达,提取细胞总蛋白,Western blotting检测蛋白表达,结果显示重组蛋白大小约为110 ku。Poly(I∶C)处理鸭胚成纤维细胞促使pCMV-C-EGFP-IRF7的核内定位增加。核苷酸相似性结果显示,樱桃谷鸭与绿头鸭和鸡的IRF 7基因核苷酸序列相似性分别为99.1%和80.8%,与非洲爪蛙的相似性仅为41.8%。系统进化树结果显示,樱桃谷鸭与绿头鸭和鸡亲缘关系最近,与非洲爪蛙亲缘关系最远。IRF7蛋白表现为结构不稳定的疏水性蛋白,主要由α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲构成。IRF 7基因在各个组织内均有表达,在胆囊中表达量最高,在肺脏中表达量最低。【结论】樱桃谷鸭IRF 7基因的CDS区序列大小为1536 bp,编码512个氨基酸,IRF7蛋白为结构不稳定的疏水性蛋白,Poly(I∶C)刺激可引起IRF7发生核移位,该基因在不同组织表达差异较大。

LPS通过ROS/p38/MAPK信号通路对鹅胚肝细胞凋亡的影响

【目的】建立鹅胚肝细胞的分离培养技术,探索脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)影响鹅胚肝细胞凋亡的作用机制,为鹅肝脏功能相关研究提供参考依据。【方法】选取16~18日龄无特定病原鹅胚,无菌条件下取鹅胚肝脏并用2%胶原酶Ⅳ消化,过细胞筛后分离培养鹅胚肝细胞并进行PAS染色鉴定。在鹅胚肝细胞中添加不同浓度(0(对照组)、0.1、1.0、10μg/mL)LPS,分别于12、24、36 h收集细胞,采用试剂盒检测鹅胚肝细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR检测细胞凋亡关键基因(caspase3、caspase9、p38)mRNA表达量。【结果】试验成功从鹅胚中分离出肝细胞并进行培养,鹅胚肝细胞形态完整,贴壁率高,存活率高,能稳定生长。PAS染色结果显示,鹅胚肝细胞质呈深浅不一的紫红色,肝细胞核呈蓝色。添加不同浓度LPS后发现,鹅胚肝细胞有氧化损伤情况,其中1.0μg/mL LPS组鹅胚肝细胞内ROS水平升高。添加LPS后鹅胚肝细胞晚期细胞凋亡受到抑制,除36 h外,细胞凋亡关键基因caspase 3、caspase 9、p 38表达量均显著降低(P<0.05)。【结论】本研究建立了较稳定的鹅胚肝细胞分离培养方法,添加不同浓度LPS后鹅胚肝细胞内ROS水平升高,激活p38/MAPK通路,且细胞凋亡受到一定抑制。

不同品种乳鸽胸肌发育的差异比较及转录组分析

试验旨在探究不同品种乳鸽肌纤维特征的差异和分子调控机制。试验以23日龄银王鸽、石岐鸽和欧洲肉鸽乳鸽的胸肌为研究对象,通过HE染色观察胸肌肌纤维表型差异,并通过转录组测序筛选可能影响不同鸽品种胸肌发育差异的基因,进行实时荧光定量qPCR验证。结果显示:三个品种乳鸽活体重、屠体重、屠宰率、肌纤维直径和密度在品种和性别间均存在较大差异;在不同品种的公鸽胸肌转录组数据中筛选出与肌肉发育和脂肪代谢相关的99个差异表达基因(DEGs),发现DEGs主要参与肌肉收缩和脂肪酸氧化代谢过程,并构建了5个基因互作网络。结果表明,不同品种不同性别乳鸽肌纤维特征存在较大差异,而筛选到的不同品种、性别中差异表达的成肌和成脂基因将为今后进一步开展肉鸽生长性能分子标记辅助育种提供数据基础。

通过比较转录组分析鉴定山麻鸭开产调控基因

蛋鸭开产与卵巢发育有紧密联系,本实验旨在探索山麻鸭开产前后卵巢形态变化及基因表达的差异,鉴别参与启动开产的关键基因,为后期蛋鸭开产相关的分子遗传机制研究奠定基础。在山麻鸭开产前后的S1期(81日龄)和S2期(137日龄)分别选取3个个体的卵巢基质进行转录组测序,对转录组数据开展差异表达分析、功能富集分析及关键基因筛选,同时对关键基因进行荧光定量PCR(qRT-PCR)验证。在差异倍数log2转换的绝对值(|log2(FoldChange)|)大于1.5、矫正P值<0.05的筛选条件下鉴别出382个差异表达基因。基于382个差异表达基因的GO功能注释发现与卵泡生长和卵巢功能调节相关的通路:细胞外基质的组织、细胞外基质结构成分和含有胶原蛋白的细胞外基质相关途径;KEGG富集分析发现上述基因显著富集于ECM受体相互作用和PI3K-Akt信号通路。在涉及上述重要富集通路的基因中有9个基因交集:CD44、COL1A1、COL6A1、CREB3L1、ITGB2、THBS2、VWF、VEGFC、WNT5B,通过qRT-PCR验证了这9个基因在转录组数据差异表达方面的可靠性。在这9个基因中,COL1A1、COL6A1、ITGB2和VWF已在之前研究中报道与卵泡发育有关,而CD44、CREB3L1、THBS2、VEGFC、WNT5B基因为本研究新发现。本研究为后期山麻鸭开产相关性状的分子遗传机制研究及分子标记辅助选择奠定基础。

半旱养模式下不同换水频率对马冈鹅雏鹅胸腿肌发育的影响

本试验旨在研究在半旱养模式下,洗浴池不同的换水频率对马冈鹅雏鹅胸腿肌肌肉发育的影响,为改善鹅养殖环境,提高鹅生长效率提供有益借鉴。选取225只1日龄健康雏鹅,预饲20 d后随机分为3组:每天换水组(E组)、每3 d换水组(T组)和不换水组(N组),试验期4周。于试验第1、2、3、4周采集水样进行内毒素和菌落数进行检测;称量所有鹅体重;每组随机选取6只翅下采血,分离血清进行内毒素测定;采集胸腿肌组织进行HE染色,检测相关基因和蛋白表达量。结果显示:N组洗浴池水体总细菌、内毒素和雏鹅血清内毒素高于E、T两组(P<0.05),且雏鹅存活率较E组有所降低。与E组相比,N组雏鹅胸肌肌纤维密度降低(P<0.05),直径先增加(P<0.05)后降低,腿肌肌纤维密度先降低(P<0.05)后增加,直径降低(P<0.05)。实验第1周时,N组胸腿肌炎症因子TNF-α和IL-6均有N组高于E组趋势(P>0.05),N组雏鹅胸肌成肌增殖相关基因MyoD和分化相关基因Myogenin的相对表达量高于E组(P<0.05),N组腿肌成肌增殖相关基因IGF1,MyoD和Myogenin的相对表达量高于E组(P<0.05)。与E组相比,N组雏鹅胸肌IL6蛋白表达量降低(P<0.05),TNFα蛋白表达量升高(P<0.05);腿肌IL6蛋白表达量升高(P>0.05),MyHC蛋白表达量降低(P<0.05)。因此,在半旱养模式下,不更换洗浴池水会导致雏鹅存活率降低,并可能通过影响炎症因子和成肌增殖分化相关基因和蛋白的表达抑制胸腿肌生长。

LPS诱导马冈鹅法氏囊损伤相关基因的筛选

【目的】研究脂多糖(LPS)对马冈鹅法氏囊组织损伤和氧化应激的影响,并探究其调控机制。【方法】选择100只1日龄马冈鹅(公母各半),随机分为对照组和LPS组,每组5个重复,每个重复10只。LPS组雏鹅分别于24、26和28日龄时腹腔注射2 mg/kg LPS,对照组注射等量生理盐水。于28日龄注射1 h后,无菌采集法氏囊进行组织学观察、氧化应激指标检测,并构建法氏囊转录组文库。通过差异表达基因鉴定、GO功能和KEGG通路富集及蛋白互作网络分析筛选出与LPS诱导法氏囊损伤有关的候选基因;随机挑选10个差异表达基因,利用实时荧光定量PCR验证其表达情况。【结果】马冈鹅法氏囊组织学观察结果表明,LPS组法氏囊结构完整性明显降低,囊泡内细胞排列紊乱、空泡数量增加。与对照组相比,LPS组法氏囊谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著降低(P<0.05);LPS组共获得507个差异表达基因,其中277个基因上调,230个基因下调。GO功能和KEGG通路富集分析显示,差异表达基因主要富集在与炎症和免疫反应相关的条目,涉及Cytokine-cytokine受体相互作用、Notch和Hedgehog等信号通路。结合蛋白互作网络分析,共筛选到TNF超家族成员10(TNFSF10)、CREB结合蛋白(CREBBP)、中心粒旁物质1(PCM1)、蛋白酪氨酸磷酸酶非受体6型(PTPN6)等27个差异表达基因。实时荧光定量PCR结果显示,转录组测序结果准确可靠。【结论】本研究探究了LPS诱导马冈鹅法氏囊损伤前后法氏囊组织中的差异表达基因,筛选到了影响法氏囊组织损伤的Cytokine-cytokine受体相互作用、Notch和Hedgehog等信号通路以及TNFSF 10、CREBBP、PTPN 6等相关基因,为了解LPS诱导鹅法氏囊损伤的分子机制提供理论参考。

鹅新城疫病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立

本研究拟建立一种能在基层实时、便捷诊断鹅新城疫病毒(goose Newcastle disease virus,GNDV)的检测方法。根据GenBank中公布的GNDVF基因的高度同源保守序列设计特异性引物,并在反应体系中添加钙黄绿素/氯化锰指示剂,建立可视化RT-LAMP检测方法。结果显示,建立的方法能特异地检测出GNDV及NDV Lasota疫苗株,而小鹅瘟病毒(GPV)、禽流感病毒(AIV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)等其他病毒均为阴性。所建立的GNDV可视化RT-LAMP检测方法对RNA的最低检测限为10pg,反应过程不需PCR仪等复杂的仪器,50min即可完成反应,可经肉眼观察反应体系颜色判定结果。该方法特异性强、灵敏度高,且操作安全、简便、快捷,可满足基层筛查GNDV的需求。