完全型雄激素不敏感综合征一个家系的产前遗传学诊断

目的 对完全型雄激素不敏感综合征（CAIS）一家系进行基因突变检测；建立产前遗传学诊断方法并对高风险胎儿进行产前诊断。方法 针对一个2012及2015年在深圳市妇幼保健院就诊的完全型雄激素不敏感家系，应用聚合酶链式反应（PCR）产物直接测序方法，对患儿及母亲雄激素受体基因（AR）进行突变检测以明确突变方式，母亲再次妊娠后检测胎儿性别及是否携带突变；结合核型分析、AR基因CAG重复次数分析及产前超声检查，明确胎儿是否罹患CAIS。结果 患儿AR基因第7外显子检测到移码突变c.2546del A（p. Asn849IlefsX34），此突变尚未见报道。患儿母亲为此突变的携带者，之后2次妊娠均为单一男胎，且未遗传到此突变。CAG重复次数在此家系里具有多态性，两次妊娠胎儿均未获得与疾病连锁的重复次数。结论 明确了一个完全型雄激素不敏感家系的基因突变方式，发现一种国际上未见报道的AR基因突变类型；建立了综合利用基因突变分析、基因内部遗传标记连锁分析及产前超声检查的产前遗传学诊断方法。

两个手足裂畸形家系致病位点的定位和产前诊断

目的确定两个中国人手足裂畸形家系的致病基因位点，并为其提供遗传咨询和产前诊断。方法采集家系成员外周血和羊水标本各两份，一份外周血和羊水标本进行传统的染色体G显带核型分析，另一份外周血和羊水标本用QIAGEN试剂盒提取基因组DNA，进行微阵列比较基因组杂交（array—basedcomparativegenomichybridization，array-CGH）分析。结果家系1和家系2共4份外周血染色体G显带核型分析未见异常。家系1羊水标本G显带核型分析未见异常。家系2羊水标本G显带核型分析提示46，XN，del（7）（q21q22．1）。家系1先证者外周血标本及羊水标本array-CGH检测均提示662．3kbdup（10q24．31q24．32），家系2羊水标本array-CGH结果提示19．97Mbdel（7q11．23-q21．3）。结论Array—CGH能够检测传统核型分析无法检测的亚显微拷贝数变异，是传统的G显带核型分析的得力补充。本研究明确了两个手足裂畸形家系的致病原因，并为两个家系提供了准确的遗传咨询和产前诊断服务，避免了患儿的出生。

MLPA及测序技术在DMD/BMD家系分析中的应用

目的运用MLPA技术和DNA及cDNA测序技术对DMD/BMD进行家系分析,对患者、可能携带者基因诊断并探讨诊断流程的临床可行性。方法对2个DMD/BMD家系中6例患者、13例女性可能携带者、6例男性家系成员,6例女性和男性健康对照共31例采集外周血提取DNA,运用MLPA技术分析对以上31例的DMD基因79个外显子;患者取右侧腓肠肌10～30mg肌肉提取RNA,逆转录cDNA;分别进行DNA及cDNA序列测定,测序结果与MLPA结果进行比较。结果经MLPA检测,家系1的4例患者均缺失DMD基因Exon50,家系2中2例患者均缺失Exon43。以上结果经肌肉cDNA测序证实了相应外显子缺失。结论 MLPA技术结合DNA及cDNA测序技术进行DMD家系分析具有可靠的临床应用价值。

雄激素受体基因新突变引起的完全型雄激素不敏感综合征

目的 对1例完全型雄激素不敏感综合征（complete androgen insensitivity syndrom,CAIS）的雄激素受体（androgen receptor,AR）基因进行分析,寻找致病突变.方法 提取外周血全基因组DNA,扩增位于X染色体上的AR基因所有8个外显子及邻近外显子与内含子之间的剪切位点DNA序列,对扩增片段直接进行DNA序列测定,与基因库中的序列进行比对.结果 该病例AR基因第1外显子的441位密码子发生无义突变（GAA→TAA）,由编码谷氨酸（Glu）变为终止密码,导致雄激素受体蛋白翻译至441位时终止,产生没有功能的氨基酸多肽残段.结论 Glu441stop（GAA→TAA）是一种导致CAIS的AR基因新的突变方式,之前在世界范围内均未见报道,丰富了AR基因突变谱,增加对CAIS发病机制的了解.

微阵列比较基因组杂交技术分析一例猫叫综合征患儿的基因组拷贝数变异

目的对1例猫叫综合征患儿进行基因组拷贝数分析，寻找其致病原因。方法对患儿外周血进行常规G显带分析，应用微阵列比较基因组杂交技术进行全基因组扫描，并应用荧光原位杂交技术对异常拷贝数区域进行验证。结果患儿染色体核型为46，XY，der（5）（p？）。微阵列比较基因组杂交显示其在5p14．2-p15．3处存在23．263Mb的片段缺失，12号染色体12p31区域存在14．602Mb的片段重复。重复片段连接至5p14．2处，形成5号衍生染色体，即arr cgh 5p15．3p14．2（PLEKHG4B→CDH12）×1pat，12p13．33p13．1（IQSEC3→GUCY2C）×3pat。荧光原位杂交证实患儿存在5p末端缺失及12p末端重复。结论5号染色体不平衡易位导致患儿5p末端缺失可能是患儿的病因。微阵列比较基因组杂交技术具有高分辨、高通量和高准确性的优点，适用于全基因组拷贝变异分析。

多发性骨骺发育不良患者软骨寡聚物基质蛋白基因新突变

目的对1例多发性骨骺发育不良女性患者的软骨寡聚物基质蛋白（cartilageoligomericmatrixprotein，COMP）基因进行突变分析，为遗传咨询和产前分子诊断提供指导。方法采集患者血样，提取基因组DNA，用外显子序列捕获＋第二代测序技术对COMP基因进行基因突变的检测并用聚合酶链反应结合Sanger法核苷酸序列测定进行突变位点验证。结果该患者COMP基因第9外显子存在C．956A〉T错义突变，其COMP基因第319位密码子由原来编码天冬氨酸的密码子GAC突变为编码缬氨酸的密码子GTC（P．Asp319Val）。SIFT功能预测该错义突变将影响蛋白结构。结论该患者发病是由cOMP基因c．956A〉T突变导致，该突变国内外未见报道。

46,XX男性综合征患者的细胞和分子遗传学研究

目的探讨SRY阳性的46,XX男性综合征患者的临床及细胞分子遗传学特征。方法对其外周血淋巴细胞进行染色体核型分析;同时提取外周血基因组DNA,进行SRY基因检测,并以正常男性及女性作对照。结果患者染色体核型为46,XX,SRY基因存在。结论基因组中存在SRY基因可能与该例46,XX男性综合征患者为男性表型密切相关,对其进行检测有利于明确性反转综合征的临床诊断,通过染色体核型分析和分子遗传学检测,可为性发育异常患者明确病因,并为其治疗提供依据。