2-氯脱氧腺苷对多药耐药白血病细胞的毒性实验研究

目的 探讨 2 -氯脱氧腺苷 (2 - CDA)对多药耐药白血病细胞 (K5 6 2 / A0 2 )的毒性作用。方法 细胞毒实验采用 MTT法 ,二药合用时细胞毒性作用采用 Chou- Talalay联合指数法分析。结果 2 - CDA对 K5 6 2和K5 6 2 / A0 2的 IC50 分别为 (2 3.9± 2 .4) nmol/ L 和 (137.6± 12 .7) nm ol/ L(P<0 .0 5 )。 2 - CDA与柔红霉素 (DNR)联合应用时 ,对 K5 6 2细胞的联合指数分别是 1.0 ,对 K5 6 2 / A0 2细胞为 5 .1。结论 2 - CDA对敏感白血病细胞具有明显细胞毒性作用。多药耐药白血病细胞对 2 - CDA不敏感。2 - CDA与 DNR联合应用时 ,对敏感白血病细胞的毒性为相加作用 ,对多药耐药白血病细胞的毒性为拮抗作用。

血液分析仪测定白细胞分类误诊病例报告及分析

由于自动血液细胞分析仪具有全自动、多功能、多参数、快速度的功能，近年来在全国大小医院迅速普遍使用。在使用三分类或五分类自动血细胞分析仪时，有些单位便不再进行末梢血涂片分类计数，这样很容易造成漏诊或误诊。现将我们在使用ｓｙｓｍｅｘＫ—４５００（日本）三...

原发性血小板增多症按危险度分层治疗及效果

目的 探讨原发性血小板增多症 (ET)按照血栓形成危险因素进行分层治疗的临床应用。方法 回顾性分析 10例ET患者按照血栓形成危险因素进行分层治疗的情况。结果 8例为高危 ,其中 5例用细胞毒药物治疗 ,2例合用血小板分离术清除血小板 ,2例合用干扰素。 1例中危 ,用细胞毒药物治疗。 1例低危患者单用干扰素治疗。结论 以上病例中 8例符合分层治疗原则 ,2例不符合。在分层治疗原则中灵活掌握各种治疗方法仍有待进一步实践 。

儿童特发性血小板减少性紫癜外周血Th细胞IFN-γ、IL-4表达分析

目的研究儿童特发性血小板减少性紫癜(ITP)体内Th1/Th2失衡及其与疾病关系。方法采用流式细胞仪对53例ITP患儿(急性32例,慢性21例)治疗前后和28例健康者外周血CD3+、CD8-细胞内IFN-γ和IL-4表达水平进行检测分析。结果急性ITP患儿起病时Th细胞中表达IFN-γ(Th1)阳性百分比高于正常人(P<0.05),而慢性ITP患儿Th1细胞较对照组显著降低(P<0.01),治疗缓解后急性ITP患儿Th1细胞与对照组无明显差别(P>0.05),慢性ITP患儿Th1细胞比例增高(P<0.05)。结论儿童急、慢性ITP呈现不同的Th1/Th2极化失衡,与疾病的活动、缓解有一定的关系,提示Th1/Th2极化在疾病发生中可能起了重要作用。

白细胞单采术治疗高白细胞急性白血病26例临床观察

目的探讨白细胞单采术治疗高白细胞急性白血病的疗效。方法回顾性分析本院收治的26例高白细胞急性白血病患者的临床资料,观察化疗前行白细胞单采术治疗的效果。结果 26例患者中,25例临床症状缓解,外周血白细胞数显著下降,有效率达96.1%。结论白细胞单采术能迅速降低患者外周血中白血病细胞数目,减少体内白血病细胞负荷,有效防止肿瘤溶解综合征的发生,是治疗高白细胞急性白血病的有效方法。

复发或难治性急性非淋巴细胞白血病细胞周期及P-糖蛋白临床测定

目的 探讨复发或难治性白血病细胞增殖状况与多药耐药基因产物P -糖蛋白的表达对化疗的影响。方法 应用流式细胞术对 15例复发或难治性白血病骨髓单个核细胞进行DNA含量和P -糖蛋白 (P -gp)测定 ,以 10例缺铁性贫血、原发性血小板减少性紫癜作为对照。结果 复发或难治疗性白血病细胞G0 /G1期比例低于对照组 ,S -G2 M期比例高于对照组。P -gp测定均为阴性。化疗完全缓解率 3 0 %。结论 复发或难治性白血病细胞多处于增殖期 。

国产粒细胞集落刺激因子动员健康供者造血干细胞的临床观察

目的:观察国产粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对32名健康供者外周血造血干细胞动员效果及不良反应。方法:选取2017年4-11月期间32名健康供者应用G-CSF 5~10μg/(kg·d)连续5 d皮下注射,若第4天白细胞低于30×10~9/L,第4.5天开始采集前2 h加用G-CSF 5μg/kg皮下注射,用COBE Spectra血细胞分离机采集外周血造血干细胞,若采集数量不够,第5.5天再采集1次。观察供者动员前后血常规的变化和采集造血干细胞结果,以及出现的不良反应。结果:动员后第4.5天白细胞明显高于动员前,差异均有统计学意义(P<0.05)。32名供者均成功采集,外周血单个核细胞(PBMNC)8.5(3.17~20.95)×10~8/kg、CD34^+6.43(2.15~17.5)×10~6/kg,其中4名供者需采集2次,余28名供者均采集1次。10名供者出现腰背部酸痛,3名出现乏力,均能耐受;4名供者采集过程中出现口唇、四肢麻木,予静滴钙剂后均缓解。结论:所有供者经G-CSF动员后均可成功采集,并能耐受其不良反应,可替代进口G-CSF供临床使用。

血小板膜糖蛋白自身抗体检测新方法——流式微球技术

目的 建立流式微球技术检测血小板膜表面糖蛋白特异性自身抗体（GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/IX）,探讨其在特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者体内表达情况及其与激素治疗效果之间的关系.方法 取67例ITP患者及30例健康对照组的外周血,分离、裂解血小板与单抗包被微球共同孵育后加入PE标记多克隆抗体,流式细胞仪分析,评价ITP患者激素治疗效果.结果 ITP患者血小板GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/IX自身抗体荧光强度为4.58（0.22～30.20）、4.78（0.56～22.00）,对照组为0.92（0.23～2.28）、0.87（0.22～2.13）.以微球荧光强度比率（测定/对照）CD41a＞0.025%、CD42＞2.12%定为阳性,用流式微球技术同时检测两种抗血小板抗体,诊断ITP敏感性为95.5%（64/67）、特异性为90.9%,阳性预测值为96.7%.ITP患者激素治疗效果与抗体检测结果呈负相关（r=-0.318）.结论 流式微球技术检测血小板膜糖蛋白自身抗体对ITP诊断的敏感性、特异性较高,对治疗及预后也有一定临床指导意义.

肝细胞癌患者细胞免疫功能的变化及意义

目的探讨肝细胞癌患者细胞免疫功能测定及其临床意义。方法采用流式细胞仪法对37例肝细胞肝癌患者、40例肝脏良性肿瘤患者和50例正常对照的血样进行检测并作对比分析。结果肝细胞癌患者CD4、CD4/CD8比值及NK细胞百分比分别明显低于良性肿瘤患者。Ⅲ、Ⅳ期肝细胞癌患者CD4+、CD4+/CD8+比值及自然杀伤(natural killer,NK)细胞百分比明显低于Ⅰ、Ⅱ期患者(P<0.05)。结论细胞免疫功能的检测对肝细胞癌患者的综合治疗提供了参考,具有重要临床意义。

单克隆抗体在急慢性白血病分型中的应用

本文应用国风产一系列抗非淋巴细胞单克隆抗体(单抗),以免疫荧光技术,对45例急性非淋巴细胞白血病(ANLL)和36例慢性粒细胞白血病(CML)的细胞表面抗原进行了检测与分型,比较了ANLL免疫学分型与细胞形态学分型的关系和CML急变期与慢性期抗原的不同点;并对4例形态上难以分型的急性白血病(AL)进行了免疫学分型。结果发现:国产的一系列抗非淋巴细胞单抗,可把FAB_(M1～M5)分为原粒、早幼粒及幼单单核细胞型;ANLL免疫学分型与形态学分型有关,但又不完全一致;28例慢性期CML全部与一个中性粒细胞的单抗反应,而8例急变期CML原始细胞无此抗原表达。4例细胞形态学分型困难的AL经单抗进行免疫学分型,3例为急淋,1例为急非淋。

自体骨髓移植治疗急性白血病3例

两例急淋和1例急非淋（M2）分别于确诊后11月，17月和33个月进行ABMT，3例CR到移植的时间为1例不详，1例为5个月，1例为2个月，3例移植前都曾行颅脑照射32.5GY,21GY和20GY。预处理在ALL患者为CTX60mg/kg×2,马法兰150mg×1,

常染色体短串联重复序列基因座复合扩增等位基因丢失现象的研究

目的探讨常染色体短串联重复序列（STR）基因座复合扩增等位基因丢失现象的特征和原因，以及亲子鉴定中STR基因座等位基因疑似突变的确认策略。方法选择2017年1月至6月，于深圳市血液中心接受三联体亲子鉴定的3个家庭的9例家庭成员为研究对象。研究对象纳入标准：STR基因座等位基因初检结果不符合孟德尔遗传规律，疑为STR基因座等位基因丢失者。采用美国ABI公司生产的GlobalFiler Express试剂盒对受试者血斑片样本的21个常染色体STR基因座等位基因进行分型。采用美国Promega公司生产的PowerPlex 21复合扩增系统对受试者血斑片样本的STR等位基因分型结果进行验证。采用PCR-直接测序（SBT）法，检测受试者DNA样本人类白细胞抗原（HLA） -A/-B/-C/-DR/-DQB1基因座等位基因，并且对受试者HLA基因座单倍型进行分型，作为个体识别的补充验证。本研究所遵循的程序符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》，并且与受试者或其监护人签订知情同意书。结果①本研究3个家庭的三联体亲子鉴定中，6例受试者丢失的等位基因分别发生在STR的3个基因座CSF1PO、D1S165和TH01，并且突变步数均不相同。上述丢失的等位基因，既可能为父源性，亦可能为母源性。②家庭1中，对母亲和孩子的CSF1PO基因座等位基因分型的初检结果显示，等位基因均为纯合子；验证结果显示，等位基因均为杂合子；二者的CSF1PO基因座等位基因初检结果均丢失等位基因10。③家庭2中，对父亲和孩子的D1S1656基因座等位基因分型的初检结果显示，等位基因均为纯合子；验证结果显示，等位基因均为杂合子；二者的D1S1656基因座等位基因初检结果均丢失等位基因16。④家庭3中，对母亲和孩子的TH01基因座等位基因分型的初检结果显示，等位基因均为纯合子；验证结果显示，等位基因均为杂合子；二者的TH01基因座等位基因初检结果均丢失等位基因9。⑤于3个家庭的9例受试者DNA标本中，共检出12种HLA-A/-B/-C/-DRB1/-DQB1基因座单倍型，并且HLA基因座单倍型遗传方式符合孟德尔遗传规律。结论对于疑似存在STR等位基因突变的STR基因座复合扩增中，采取单一的检测方法，可能存在漏检等位基因的风险，采用不同试剂盒进行验证其等位基因突变的真实性，能获得更加可靠的鉴定结果。

多发性骨髓瘤细胞流式细胞术检测方法研究

目的:研究以CD45/CD138设门检测多发性骨髓瘤细胞的方法。方法:将35例多发性骨髓瘤患者以骨髓瘤细胞/有核细胞>10%或<10%分为瘤细胞高比例组和低比例组,以CD45/CD138或CD45/SS两种方法设门检测两组患者的免疫表型,对两种设门方法进行比较。结果:两种方法设门检测,高比例组、低比例组免疫表型相近:瘤细胞主要阳性检出CD138、CD38、CD56,阴性检出CD10、CD19、CD20、CD22、CD33、CD34、CD2、CD3、CD25、CD5、CD7、HLA-DR、CD11c。但两种方法比较:前者目标细胞群/有核细胞比值显著性低于后者,CD38及CD56抗原阳性检测值显著性高于后者;瘤细胞高比例组CD38、CD56检出率显著性高于低比例组。以CD45/CD138设门,除了能区分骨髓瘤细胞群,还能区分浆细胞群。结论:CD45/CD138较CD45/SS更适合设门用于多发性骨髓瘤的诊断和微小残留病的检测;骨髓瘤细胞未见异质性抗原表达;CD/CD设门,可以区别骨髓瘤细胞群和成熟浆细胞群。

643例中国北方汉族急性淋巴细胞白血病患者人类白细胞抗原连锁不平衡分析

目的分析643例中国北方汉族急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）患者组和20359名健康对照组的人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）HLA—AB、BDR和A—B-DR单倍型频率及连锁不平衡分布差异。方法应用最大似然性算法（expectation—maximization，EM）计算患者组和对照组的HLA-A-B、B—DRB1和A—B—DRB1单倍型频率及连锁不平衡参数，采用x^2检验比较其分布差异。结果HLA-A30-B13、A2-B46、A33-B58，B13-DR7、B46-DR9、B52-DR15、B58-DR17，A30-B13DR7、A33-B58-DR17和A1-B37-DR10单倍型是两组常见、共有呈强连锁不平衡单倍型。A30—B13、A2-B46、A33-B44、B13-DR7、A30-B13-DR7和A2-B46-DR9的单倍型频率和连锁不平衡水平，患者组低于对照组，差异有统计学意义（x^2〉3．84，P〈0．05）。A2-B52、A2-B27、A24-B8，B60-DR9、B27-DR4、B52-DR14、B44-DR17、B27-DR12、和A11-B27-DR12的单倍型频率和连锁不平衡水平，患者组高于对照组，差异有统计学意义（x^2〉3．84，P〈0．05）。结论643例北方汉族ALL患者组HLA-A-B、B-DRB1、A—B-DRB1单倍型频率分布及连锁不平衡遗传特征和对照组具有高度的同源性。患者组与对照组之间的部分HLA单倍型频率及连锁不平衡分布存在统计学差异。本研究结果为ALL与HLA疾病相关性及HLA相合供者的寻找提供了基础数据。

HLA-DRB1＊1218新等位基因克隆测序鉴定及内含子序列分析

目的鉴定中国人群人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）DRB1＊1218新等位基因，分析新等位基因第1和2内含子序列信息。方法采用聚合酶链反应一序列特异寡核苷酸探针反向杂交法（polymerase chain reaction-sequence specific oligonucleotide probes，PCR—SSOP）对广东地区随机正常人群进行HLA常规基因分型，发现1个与HI。A-DRB1＊120201相近的未知基因，对先证者DNA应用组特异性引物扩增HLA—DRB1位点第2外显子，PCR产物经克隆到质粒载体中以获得单链，对克隆所得产物进行HLA—DRB1基因的第2外显子及第1和第2内含子双向测序分析，并与DRBl＊120201基因序列的第2外显子和DRBl＊03010101等位基因内含子相比较。结果发现该个体的一个HLA—DRB1＊080302基因被确认，而另一个HI。A—DRB1基因为新等位基因，其序列被GenBank接受（编号为FJ481086）。新等位基因与最相近的DRB1＊120201相比，在第2外显子上有1个核苷酸的不同，即第262位G—C（密码子59GAG—CAG，氨基酸59G1u—GIn）。DRB1＊1218与DRB1＊03010101等位基因第2内含子序列完全相同，而与DRB1＊03010101等位基因第1内含子序列相比较有12个碱基不同。结论发现并鉴定一个新的HLA等位基因，经世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA—DRB1＊1218．

冠心病患者中CD_(163)的表达水平及CRP变化与冠状动脉病变的关系

目的:观察外周血单核细胞表面血红蛋白清道夫受体CD163在冠心病患者中的表达及CRP的变化。方法:按WHO冠心病诊断标准并经冠状动脉造影确诊的86例冠心病患者作为研究对象分为三组。用流式细胞术检测4组患者单核细胞表面CD163表达水平,以平均荧光强度mfi为单位,同时测定C-反应蛋白(CRP)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),并与CD163进行相关性分析。结果:4组患者外周血单核细胞表面CD163表达水平有明显差异(P<0.01)。冠心病各亚组血清CRP含量均较对照组升高(P<0.05),其中UA组和AMI组CRP升高明显(P<0.01)。冠心病患者外周血单核细胞表面CD163表达水平亦与CRP呈正相关(r=0.765,P<0.001),与(LDL-C)呈正相关(r=0.748,P<0.001)。结论:不同类型冠心病患者外周血单核细胞表面CD163的表达水平不同,随着冠心病病情加重,CD163的表达水平逐渐升高,反应了冠状动脉病变的严重程度,CD163与炎症和脂质过氧化反应有关。CRP与冠心病严重程度有关。

Wnt/β-catenin基因对骨髓瘤患者间充质干细胞成骨潜能的影响

目的:探讨Wnt/β-catenin基因和多发性骨髓瘤骨病的关系。方法:分离培养多发性骨髓瘤患者和正常人的骨髓间充质干细胞(MSCs),体外诱导分化成骨细胞,茜素红实验检测矿化物沉积、荧光定量RT-PCR方法检成骨指标(OPN、OC、ALP、Cbfal)和Wnt/β-catenin mRNA表达,分析MSCs细胞成骨能力变化及两组间Wnt/β-catenin mRNA表达差异。结果:骨髓MSCs体外成骨诱导后,茜素红染色阳性,呈现明显红色钙化结节;MSCs体外诱导成骨细胞,试验组与对照组比较,成骨指标OPN、OC、ALP、Cbfαl mRNA表达降低(P<0.05);骨髓MSCs体外成骨诱导后β-catenin mRNA表达降低(P<0.05)。结论:骨髓MSCs体外可成功诱导分化为成骨细胞;多发性骨髓瘤患者MSCs向成骨细胞分化潜能比正常人降低,Wnt/β-catenin可作为多发性骨髓瘤骨病潜在治疗靶点。

儿童慢性特发性血小板减少性紫癜Th1和Th2功能极化分析

目的探讨Th1/Th2极化改变与儿童cITP之间关系。方法流式细胞仪检测21例cITP患儿糖皮质激素治疗前后和28例健康者外周血CD3＋CD8-细胞内IFN-γ和IL-4表达。结果cITP患儿治疗前Th0、Th1细胞和Th1/Th2比值较对照组显著降低（P〈0.01）,治疗后Th0、Th1细胞和Th1/Th2比值较治疗前显著增高（P〈0.01）,与对照组比较,治疗后cITP患儿Th0、Th1细胞增高（P〈0.05）,Th2细胞和Th1/Th2比值无显著差异（P〉0.05）。结论cITP患儿起病时表现为Th1减低,Th2相对优势表达,治疗有效者表现为Th1显著增高,Th2无改变,cITP起病时Th1分泌的IFN-γ分泌减少可促进产生自身抗体,糖皮质激素治疗主要通过增加IFN-γ的分泌达到治疗目的。