广东省烟草青枯菌的菌系和遗传多样性

从广东省韶关和梅州2个烟草产区采集了来自8个县市的共38个烟草青枯菌菌株,对病菌的生物型、致病型和遗传多样性进行了测定,结果表明广东烟草青枯菌全部为生物型Ⅲ。通过在红花大金元,K326,岩烟97和系3等4个烟草鉴别品种上的致病性反应,将广东烟草青枯菌分为强致病力、中等致病力和弱致病力3种致病型,其中以中等致病力菌株为主,占78.9%;强致病力菌株占13.2%;弱致病力菌株占7.9%。从116个RAPD通用引物中筛选出10条引物,用于对38个烟草青枯菌株DNA的RAPD分析,扩增条带表现出明显的多态性,条带主要聚集在0.3～4.0 kb之间。聚类分析这38个菌株可分为2个组群,即组群A和组群B。组群A中又可以分为7个亚组(A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7);组群B也含有4个亚组(B1、B2、B3、B4)。研究结果还表明,广东烟草青枯菌菌株RAPD组群的划分与菌株的寄主来源有一定的相关性,但与地理区域、生物型和致病型没有明显的相关性;生物型不能反映烟草青枯菌菌系的差异。

广东省烟草土壤生态适宜性评价

土壤环境及相关因子对烟草内在品质具有特殊影响。在Ecocrop 1数据库中筛选土壤生态环境重点因子为评价指标,应用GIS空间分析技术,在GIS平台系统分析了全省土壤生态特征,对广东省土壤的烟草适宜性进行了网格化评价。结果显示,广东省土壤总体上适宜烟草种植,且实际情况与评价结果相符,该结果对寻找新的烟草种植区域具有良好的指导作用。

广东省烟区烟草花叶病主要病原鉴定

为明确广东省烟草病毒病种类及其主要侵染病原,对广东2个主要烟区(韶关地区和梅州地区)进行了病毒病害调查,并对采自田间的62个花叶病样本,通过鉴别寄主、ELISA和RT-PCR法进行了病原种类鉴定。结果表明:在上述2个主要烟区,主要是花叶病危害,很少发现其他病毒种类;病原鉴定方面,在62个花叶病样本中,61.29%为单TMV侵染,20.97%为单CMV侵染,17.74%为TMV和CMV复合侵染。

广东省烟草侵染性病害的种类、分布及为害

通过１９８９－１９９１年对广东省烟草主产区的调查，发现广东省烟草侵染性病害３２种。其中真菌病害１８种、粘菌病害１种、细菌病害４种、病毒病害７种、类菌原体病害１种和线虫病害１种；１４种为广东省烟草病害新记录，烟草黑腐病（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｐｅｓｔｒｉｓ）为国内外首次报道的新病害。

广东省生态烟区的划分及其烟叶质量评价

调查分析了广东省烟叶产区的气象资料和土壤化学成分,对各烟叶产区烤烟品种的烟叶质量进行了调查研究。根据调查研究结果,将广东省烟叶产区划分为3个生态烟区:南雄、始兴、五华生态烟区,乐昌、乳源生态烟区,粤东生态烟区。其中南雄、始兴、五华生态烟区的烟叶香型为较典型的浓香型到偏中香型,是广东优质烟叶产区;粤东生态烟区的烟叶香型为中间香到中偏清香型,烟叶感官质量稍差;乐昌、乳源生态烟区的烟叶香型为中偏浓到浓偏中香型,烟叶感官质量介于其他两个烟区之间。

广东烟草青枯病菌菌系研究

广东主要烟区南雄县和梅州市的烟草青枯病菌（Ｒａｌｓｔｏｎｉａｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）没有本质上的差异。供试的菌株对烟草、茄子、番茄、辣椒都有强致病力，均为小种１，对２个花生品种（汕油７１，蔓生型）的致病力均分化为３个类型。所有菌株都能利用３糖３醇产酸，为生化型Ⅲ。琼脂双扩散试验结果表明，绝大部分菌株都能与南雄菌株和大埔菌株的抗血清形成３条吻合相连的沉淀带，说明这两个烟草青枯病菌菌株的亲缘关系十分密切。

广东烟草青枯病发生与流行因素研究

烟草青枯病是炯草上重要细菌病害，其发生流行因素复杂。研究结果表明，目前广东主栽烟草品种中，没有高抗品种，中抗品种有RG17和云烟87；烟草青枯病菌最适宜生长的温度范围为28～34℃，最低温度范围为12～15℃，最高生长温度为41～42℃，但广东韶关和梅州两大烟区烟草青枯病菌生长的温度和速度存在一定差异。通过南雄和五华两大烟区3年定点观察，结合气象资料分析，广东烟草青枯病一般在4月底至5月初开始发病，5月中下旬至6月中下旬为发病高峰，高温多雨天气到来越早，发病越早，越严重。南雄烟区的紫色土壤中烟草青枯病发生轻，耕作制度的改变对烟草青枯病发生有较大影响。

发展现代烟草农业的思考与对策——以广东南雄为例

为了探索现代烟草农业的发展道路,促进广东省烟草产区从传统烟草农业向现代烟草农业发展,以广东省烟草主要产区(南雄市)烟叶生产的发展现状为立足点,分析南雄市发展现代烟草农业存在的主要问题,包括农村劳动力外流、种烟效益低下、烟叶生产环境恶化等问题,并在分析这些问题的基础上提出培育文化素质高的烟农,加强农田基础设施条件及各种保障机制,走科技兴烟与发展烟草合作社道路等对策建议。

广东省4种花卉青枯病的病原鉴定

采用传统和分子生物学方法,对广东省发生的美人蕉、姜花、黄穗和百日草4种花卉青枯病的病原进行了鉴定。通过病菌形态观察、染色试验、生理生化性状测定以及细菌16S rDNA序列分析,结果表明4种花卉青枯病病原为茄科劳尔氏菌Ralstonia solanacearum。这4种花卉的青枯病均为国内首次报道,且这4种花卉均为茄科劳尔氏菌R.solanacearum的新寄主。

广东烟田主要杂草类型与不同轮作方式杂草种类调查

采用对角线5点取样法调查广东13镇主要烟田杂草发生情况。结果表明:广东省烟地杂草有17科45种,根据对每种杂草优势度的评价可知,最主要的杂草有铁苋菜、酸模叶蓼、狗尾草、雨久花、胜红蓟、牛繁缕、无芒稗、空心莲子草、加拿大飞蓬、马唐、棒头草、稗草、蚤缀等13种;广东各地烟田主要杂草优势种各有差异,南雄市各地以铁苋菜、狗尾草、无芒稗、酸模叶蓼、香附子为主,其中铁苋菜发生尤为严重;梅州各地以雨久花、酸模叶蓼、水蓼、胜红蓟为主,其中雨久花发生量较大。烟旱轮作田优势种杂草为铁苋菜、酸模叶蓼、狗尾草、胜红蓟、牛繁缕、加拿大飞蓬、空心莲子草、蚤缀等;烟稻轮作田优势种杂草为酸模叶蓼、雨久花、铁苋菜、狗尾草、无芒稗、马唐、胜红蓟、稗草、莲子草等。铁苋菜、酸模叶蓼、狗尾草、胜红蓟为烟旱轮作田和烟稻轮作田共有的常见优势种杂草。

苯并噻二唑(BTH)诱导烟草抗青枯病活性与抗病机理研究

利用离体叶片注射感病的方法,测定了BTH在100、50、25、12.5、6.25μg/mL浓度下,诱导烟草抗烟草青枯病的活性。结果表明:经BTH处理的烟叶病情指数均显著低于对照处理。处理14 d后,50μg/mL BTH处理的烟叶相对诱导活性达到50%以上。检测与抗性相关的防御酶系活性的动态变化发现,在25μg/mL的BTH浓度下,处理叶片的4种防御酶:苯并氨酸解氨酶(PAL),过氧化物酶(POD),多酚氧化酶(PPO)及超氧化物歧化酶(SOD)活性都有所提高,与对照比提高率分别达127.5%,54.9%,47.1%和70.3%。表明BTH诱导烟草抗青枯病的机理与激活植物体内防御酶活性有关。

烟草品种GDSY-1的青枯病抗性与遗传分析

为比较广东地方晒烟品种GDSY-1和传统抗源DB101的青枯病抗性与遗传规律,于2011—2016年在温室和大田、苗期和成株期共7次对GDSY-1、DB101和长脖黄(感病品种)等3个品种的青枯病病情进行调查,并配制组合GDSY-1×长脖黄、DB101×长脖黄和GDSY-1×DB101,对其P1、P2、F1和F2代群体的青枯病发生情况进行比较,利用主基因+多基因混合遗传模型联合分析方法进行遗传分析。结果表明,GDSY-1的青枯病抗性优于DB101;DB101的抗性遗传以加性效应为主,符合2对加性主基因+加性-显性多基因模型(E-4),主基因遗传率低;GDSY-1的抗性遗传表现为部分显性,符合2对加性-显性-上位性主基因+加性-显性-上位性多基因模型(E-0),第1对主基因的加性效应值和显性效应值分别为-2.690 9和-2.690 9,抗病对感病完全显性,第2对主基因的加性效应值和显性效应值分别为-1.219 4和-0.230 7,抗病对感病呈部分显性,2对主基因存在互作效应,主基因遗传率高,为85.02%。GDSY-1的抗性遗传显性程度高、主基因遗传率高,具有较大的育种利用价值。

拮抗烟草青枯病菌的内生细菌筛选、鉴定及定殖研究

从不同烟草品种的根茎叶组织中大量分离内生细菌,通过平板拮抗试验方法,筛选出拮抗青枯菌的内生细菌菌株16个。从中选择B7、H4-2、C3、DR8、D3、B8、33共7个拮抗菌,进行16S rDNA鉴定,并构建系统发育进化树,结果表明:H4-2、C3、DR8、B8、33与芽孢杆菌属(Bacillus)的菌株亲缘关系最近。利用B8菌株的抗链霉素菌株B8-5,研究其在土壤和烟草植株根、茎、叶中的定殖能力及其对烟草青枯病的防治效果。结果表明,B8-5可定殖于烟草根表土壤和体内,具有良好的宿主体内定殖与传导能力,田间对烟草青枯病的防治效果达66.64%。

烟草内生细菌及其对烟草青枯病的生物防治研究

对烟草内生细菌的来源、数量动态变化、与青枯病抗性的关系,以及内生细菌防病和促进种子萌发等方面进行了研究。结果表明烟草内生细菌可来源于种子内部,在烟草不同生育期,抗病品种中内生细菌的总数量以及对青枯病菌具有拮抗作用的内生细菌数量均高于感病品种,部分内生细菌具有促进烟草种子萌发和防治烟草青枯病的作用。

二氯喹啉酸在烟草水培液中的消解动态及对烟苗生长的影响

在烟草水培液中添加二氯喹啉酸，采用高效液相色谱分析法检测烟苗移栽后0、3、7、24h和30天二氯喹啉酸的消解率，结果表明：当添加量为0．36mg／L时，其消解方程为Cx=0．1833e^-0.03876t，半衰期为11．81天，r为0．9386；当添加量为0．18mg／L时，其消解方程为Cx=0．1048e^-0．0276t,半衰期为17．79天，r为0．8495。二氯喹啉酸对烟草幼苗生长的影响测定结果表明，在0．0005-5mg／L浓度范围内，烟苗的根短、茎长、鲜重轻，根长和烟芽鲜重明显受到抑制；在浓度为5mg／L时，畸形苗率达35％。

烟草和香芋上斜纹夜蛾的自然种群生命表

应用作用因子生命表方法,组建烟草和香芋上第2、3代斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fabricius)自然种群生命表,分析作用因子对斜纹夜蛾种群数量的控制作用。结果表明,2005和2006年烟草和香芋上第2、3代斜纹夜蛾种群的增长倍数均以香芋高于烟草。无论烟草还是香芋上第2、3代斜纹夜蛾,均以“捕食及其它”的排除作用控制指数最大。如排除所有天敌等作用因子的作用,2005年烟草上第2、3代斜纹夜蛾自然种群趋势指数将分别增长31.2029和50.0371倍,香芋上第2、3代斜纹夜蛾自然种群趋势指数将分别增长29.3492和41.2873倍;2006年烟草上第2、3代斜纹夜蛾自然种群趋势指数将分别增长33.1421和75.4167倍,香芋上第2、3代斜纹夜蛾自然种群趋势指数将分别增长31.5357和70.5355倍。说明天敌等自然作用因子对斜纹夜蛾种群数量有较为明显的控制作用,而烟草上的自然作用因子的作用要强于香芋上的自然作用因子。

不同类型及品种烟草特有亚硝胺含量的分析

为了解不同类型及品种烟草间TSNAs含量的差异,采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测了白肋烟、晾晒烟和烤烟等不同烟草类型烟叶调制前后的TSNAs含量。结果表明:①几种类型烟草调制后烟叶TSNAs含量增加明显,白肋烟调制前后烟叶TSNAs含量的平均值最大,烤烟次之,晾晒烟最小;且同一类型不同品种间TSNAs含量也存在较大的差异,其中白肋烟品种间TSNAs含量的变异系数最大,而晾晒烟品种间最小。②部分烟草品种调制前烟叶中的TSNAs含量较高,且显著高于一些品种调制后烟叶TSNAs含量;调制前烟叶中TSNAs含量与调制后呈显著的正相关。调制前烟叶中的TSNAs含量可作为筛选低TSNAs含量烟草品种的评价指标。

利用荧光MFLP标记技术分析烟草种质的遗传多样性

微卫星锚定片段长度多态性(MFLP)是一种新型分子标记技术,本研究依据该技术原理,通过将M13通用荧光接头连接在设计的SSR引物上对扩增产物进行荧光标记,建立了适合于烟草的荧光MFLP标记体系;在此基础上,利用该技术从144对选择性扩增引物组合中筛选出15对适宜的引物组合,对32份来自于不同国家和地区的烟草种质材料的遗传多态性进行了分析。试验结果显示,这些引物组合扩增的产物在32个烟草种质中的多态性范围为2～13个,平均4.3个;利用种质材料间遗传多态性开展的遗传相似性分析表明,32份烟草种质间的相似系数在0.40到0.83之间。运用UPGMA聚类分析和主坐标分析法,有效地将这些烟草种质材料的来源和类型进行了分类。结果表明,荧光MFLP标记技术能有效地发现供试烟草材料的DNA多态性,表明该技术适用于烟草遗传特性分析的研究和应用。

利用SSR荧光标记技术分析烟草种质的遗传多样性

针对中国烟草栽培品种遗传基础狭窄的情况,分析烟草种资资源的遗传多样性将可为烟草新品种选育、引种和资源保护提供重要信息。据此,利用20个SSR引物组合,采用荧光SSR标记法对来自不同国家和地区的50个烟草种质材料的遗传多样性进行分析。研究结果显示,20对SSR引物在50份烟草种质中检测到81个等位变异,平均每个SSR为4.1,平均多态性位点比率为68.4%;其中引物PT20457的鉴别能力最高,它的扩增多态位点数为6个,多态位点比率为100%,PIC值为0.944。研究的UPGMA东聚4个晒类组烟分群,析组8结个群果亚Ⅱ在类包遗。括传22种相个分似白析系肋方数烟法约,组均为群较0Ⅲ.好65包地处括揭将来示5自0了份4烟烟个草草国属家种种的质间明4或7显个栽分品培成种种了。品3主种个坐类组标型群分间,析的组将遗群所传Ⅰ有多中种样只质性有分与1个成亲缘广了关系,可为烟草遗传育种和遗传连锁图谱构建的杂交亲本选择提供科学依据。

烟草种质材料TSNA含量的关联分析

为寻找与烟叶TSNA含量显著关联的标记位点,利用分布于烟草24个染色体具多态性的SSR标记和MFLP标记,分析24份烟草种质材料的遗传多样性,在此基础上对烟叶中烟草特有亚硝胺(TSNA)含量的表型变异与标记多态性进行关联分析。结果显示,33对MFLP引物和28对SSR引物在24份烟草材料中共发现188个多态位点;群体结构分析将24份烟草材料分为3个亚群,且亚群划分与烟草类型(烤烟、晾晒烟和白肋烟)基本一致;关联分析发现1个SSR位点和6个MFLP位点至少与1种TSNA含量的相关性在0.01水平上显著,其中标记MFLP26与烤后烟叶中NNN含量的相关性在0.001水平上显著,表型变异解释率最高(R2=0.5831)。这些显著关联的分子标记可为筛选低TSNA含量的烟草材料提供参考。