EGFR可溶性胞外段的表达、纯化及鉴定

利用大肠杆菌表达表皮生长因子受体胞外段(ED-EGFR),将目的基因片段插入到p ET28a载体中,将插入目的基因载体转化入BL21表达。利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(ITPG)诱导BL21表达ED-EGFR,破碎后80%的ED-EGFR为可溶性表达,其他则存在包涵体中,将菌液离心上清通过镍柱亲和层析纯化,纯化蛋白样品经过胶浓度为12%SDS-PAGE电泳,条带在相对分子质量58 k左右出现单一条带,并且纯度达到95%以上。通过BCA检测蛋白浓度,利用CCK8方法检测ED-EGFR具有较高活性,人肺非小细胞癌细胞(H1648细胞)增殖明显被抑制,并且在浓度320 ng/m L下抑制效果最好。