禽呼肠孤病毒在我国部分地区蛋鸡群中的血清流行率和风险因素分析

禽呼肠孤病毒(ARV)在我国流行范围较广,感染家禽后使其出现病毒性关节炎、生长不良和产蛋量下降等表现,对我国养禽业造成较严重的经济损失。为了解我国蛋鸡群中ARV的流行情况及存在的感染风险因素,本试验在2022年11月—2023年3月从北京、天津、河北、山东、河南、江苏、陕西、湖北和重庆9个省市的45个蛋鸡养殖场(其中包括祖代蛋鸡群、父母代蛋鸡群和商品代蛋鸡群),收集共计45份调查问卷和968份血清样本。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中的ARV抗体,并结合调查问卷,采用单因素分析和逻辑回归分析方法找到蛋鸡出现ARV感染症状的风险因素。ELISA检测结果显示,968份血清样本中检出阳性863份,阳性率为89.15%(95%CI:87.0%~91.0%);单因素分析结果显示,全进全出饲养模式下的蛋鸡出现ARV感染症状的概率显著低于区域性全进全出饲养模式或不同日龄、不同批次混养饲养模式下的蛋鸡,且具有较强程度的关联(P<0.05,0.1<OR<0.3);生物安全防控严格的大、中型规模化养殖场(5万只以上)的蛋鸡出现ARV感染症状的概率显著低于生物安全防控存在不足的小型养殖场(2万~5万只)的蛋鸡,且具有较强程度的关联(P<0.05,0.1<OR<0.3);员工不注意对鸡舍消毒的养殖场饲养的蛋鸡出现ARV感染症状的概率显著高于员工对鸡舍具有较强或一般消毒意识的养殖场饲养的蛋鸡,具有中等程度的关联(P<0.05,1.5<OR<3.0)。综上所述,饲养模式、养殖场规模和员工对鸡舍的消毒意识可能是产蛋鸡群感染ARV的风险因素。

发酵床养殖畜禽基本技术参数的研究进展

在环保压力日益严峻的环境下,鉴于发酵床技术的潜在优势,吸引了很多业内人士对发酵床养殖畜禽技术进行不断探索。目前该技术在我国已取得一定成绩,虽然生产实践中仍存在很多盲区,但正在逐步改进与完善中。论文综述了发酵床垫料选择的原则、pH、温度、翻耙频率、含水率、含氧量及发酵菌种等基本参数的研究进展、总结了各参数的适宜范围,并指出其在生产实践中的操作,以期对发酵床养殖畜禽技术的应用与推广起一定指导作用。

广东地区小鹅瘟病毒分离鉴定及全基因序列的测定分析

本研究利用鹅胚从广东地区一鹅场送检的病死鹅病料中分离到一株小鹅瘟病毒,命名为ZJF。对其进行动物回归,发现是一株强毒。对该毒株进行了全基因序列克隆测定,拼接后获得了ZJF株的全基因序列,序列全长为5 046 bp。VP1基因与安徽2011年分离株Yan-1核苷酸、氨基酸同源性最高为99. 7%、99. 3%,进化树显示处于同一小分支中,具有相同的进化祖先;与早前广东地区分离株GDa GPV核苷酸、氨基酸同源性相对较低为94. 5%、97. 4%,进化关系也相对较远。研究结果进一步完善了我国广东地区小鹅瘟的流行病学信息。

宏转录组测序技术在一起仔猪病毒性腹泻疾病诊断中的运用及分析

为了确定2023年春季广西贺州地区猪场仔猪腹泻病原,采用宏转录组测序技术筛查该地区猪群发病和感染情况,为当地仔猪腹泻疾病的防控提供依据。采集2023年3月广西贺州地区10 km范围内6个相邻并同时暴发腹泻的猪场仔猪的肛拭子和粪便,运用MGISEQ 200测序平台进行宏转录组测序开展猪病原感染组学研究,系统性地筛查该区域仔猪腹泻的病原谱,使用实时荧光定量RT-PCR对最主要病毒进行确认,定量分析各病原的丰度并选取鉴定到的病毒基因序列进行系统发育分析,Pearson分析解析病原混合感染的相关性。结果显示:通过宏转录组测序技术在这些样品中共检测到17种致病性细菌、12种病毒和3种寄生虫。病毒以猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)代表的腹泻相关病毒为主,包括猪札幌病毒(porcine sapovirus, SaV)、猪嵴病毒(porcine kobuvirus, PKV)、猪星状病毒(porcine astrovirus, PAstV)、猪猴禽猪肠病毒(porcine sapelovirus, PSV)、轮状病毒A(rotavirus, RVA)等;细菌主要包括3种肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、3种乳杆菌科(Lactobacillaceae)、2种芽胞杆菌科(Bacillaceae)等;寄生虫包括两种滴虫和碘阿米巴原虫。来自5个场区的PEDV刺突基因(spike gene,S基因)系统发育分析显示,毒株均属于G2c簇群,毒株之间核苷酸相似性为99.99%,毒株S基因存在重组情况;其中,一发病猪场还检测到P[6]基因型的rotavirus A部分VP4序列,与人源轮状病毒的核苷酸相似性最高。此外,在4个猪场检测到2种以上的仔猪腹泻相关病毒,系统发育分析结果提示,此区域存在腹泻病原多谱系共同流行的情况。病原相关性分析显示,PEDV/PSV(P<0.001)、PEDV/猪环曲病毒(porcine torovirus, PToV)(P<0.001)和PEDV/PAstV(P<0.05)有显著的负相关,而PEDV/PKV(P<0.05)有显著的正相关。以上结果提示,在该地区相邻养殖区域中,仔猪腹泻的病原谱具有多样性,其中,直接致病病原是PEDV,同时,PEDV与样品中其他腹泻相关病毒之间存在关联。本研究较为全面地展示该地区仔猪腹泻病原的感染谱,并鉴定出导致腹泻发生最直接的病原体;同时也能分析小范围养殖区域内腹泻相关病原的相关性,为该区域仔猪腹泻疾病防控提供更加精准的参考和指导。

几种猪用饮水器节水效果对比及肉猪养殖期总排污量的测定

【目的】明确不同猪用饮水器的节水效果与肉猪饲养过程的实际粪污排放量,为小型猪场的环保治理方案提供参考数据。【方法】对比了4种猪用饮水器的日用水量、浪费水量、导出水量及其水质情况;在肉猪的5个生长阶段分别连续收集3 d以上的肉猪产粪量、污水产量,并计算出养殖过程的总排污量。【结果】节水效果从高到低依次为圆珠饮水器>碗式饮水器>鸭嘴饮水器(CK)>鸭嘴饮水器+水泥导水槽,其中圆珠饮水器比鸭嘴饮水器平均可节水27.87%,用水泥槽导出的鸭嘴饮水器滴漏水量占其肉猪日用水量的46.59%。肉猪养殖过程中的平均日产废水量为10.84 L/头,占其日用水量的45.87%。由于清粪频率及猪只踩踏原因所致,试验中肉猪的头均日清粪量为0.439 kg。【结论】应用节水式饮水器并配合清污分离措施可以源头减少至少30%养殖废水。小栏舍饲养、干清粪、不冲栏、鸭嘴饮水器饮水的猪场,每头肉猪在28~177日龄期间累积产生废水约1.4 m3,累积清粪量为58.25 kg。

广东地区一株塞内卡病毒的分离及基因组分析

A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)感染主要引起猪群水泡性疾病,该病临床症状与其他水泡性疾病较难区分。本研究通过RT-PCR检测发现广东某规模化猪场发生的水泡性疾病为SVA感染。通过在HEK293T细胞上进行病毒分离,成功获得了一株SVA毒株并命名为SVA/China/KP-01-2017 (KP-01)。KP-01第2代即能引起HEK 293T细胞明显的细胞病变。该毒株多聚蛋白基因长6 546 nt,编码长2 181 aa的多聚蛋白。同源性及遗传进化分析表明,该毒株与国内外分离的毒株相似性较高,与Colombia/Co-01/2016株在遗传距离较近。本研究成功分离1株SVA,为SVA深入研究奠定了基础。

传染性法氏囊病毒新型变异株荧光定量RT-PCR检测方法的建立

传染性法氏囊病病毒新型变异株(Novel variant Infectious bursal disease virus,nVarIBDV)给我国养禽业防控法氏囊带来更大的挑战。目前缺乏快速、灵敏的针对nVarIBDV的检测方法。为解决这一问题,该试验根据已发表的nVarIBD的VP2基因序列,设计了一对引物和一条特异性Taq Man探针,建立了一种nVarIBD的Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法,该方法可通过特异性扩增nVarIBD VP2基因来确定样品是否为IBDV新型变异株。通过构建重组质粒pMD18-T-VP2对引物和探针进行灵敏性和重复性试验,以及特异性检测,最后使用该检测方法对临床样品进行验证。荧光定量RT-PCR结果显示灵敏性可达1.32×10^(1)copies/μL,高于常规RT-PCR的100倍。批内和批间重复试验变异系数(CV)均小于0.5%,结果表明该检测方法有良好的重复性与稳定性。该方法与常见禽病毒核酸无交叉反应,说明检测方法具有较好的特异性。综合本研究结果表明,该研究建立的nVarIBD荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、灵敏性高、重复性好,可用于临床样品中IBDV新型变异株的监测。

一例小窗改造对帐幕式环控鸡舍生产成绩提升的案例分析

近年来,畜禽养殖业的集约化发展为当地农业经济发展做出了很大的贡献。为继续提升农户养殖效益,养殖场硬件条件也随之迭代升级,鸡舍逐步由开放式向密闭式环控鸡舍升级。但在发展过程中,标准环控舍硬件条件配置的不完善也直接影响了生产成绩和经济效益。特别是侧墙通风小窗的缺失对养殖内环境的负面影响极为深远。

验证生产操作中有效消毒对非洲猪瘟病毒的消毒效果

本文旨在阐述现场消毒操作有效性的关键点,通过相关实验验证了非洲猪瘟病毒在有机物中的存在会减轻消毒剂对病毒的杀灭作用,清洁到位是确保消毒有效的先决条件,阳性位点的灭源消毒也要遵循清洁的原则,食材等物资要尽可能确保源头可控以避免消毒不彻底的风险,消毒剂需按比例配制好并按规范使用。有效的现场消毒操作对于控制传染病具有重要的。

中国畜禽粪污资源化种养循环现状与效益分析

畜禽粪污已成为农业面源污染的主要来源,合理进行畜禽粪污资源化利用,构建种养循环农业体系是解决畜禽粪污污染问题的有效途径。通过对中国大部分地区进行实地调研,发现当前各地均具有发展种养循环农业的良好条件,但仍存在原位安全消纳标准体系缺乏和周边消纳农田面积不足等问题。当前沼气工程和好氧发酵是实现畜禽粪污资源化和促进种养循环的重要纽带,结合个案分析表明种养循环模式较于达标排放减少企业环保投资72.4%。最后建议要因地制宜地实现畜禽粪污还田无害化处理及资源化利用,同时建立种养结合数据库及运行长效机制。

层叠式笼养鸡舍环境参数与鸡群产蛋率的相关性分析

[目的]研究层叠式笼养模式下鸡舍内不同位置环境参数的变化规律以及与鸡群产蛋率的相关性。[方法]以广东温氏食品集团股份有限公司某规模化种鸡场密闭笼养黄羽肉种鸡为对象,对鸡舍内不同位置的环境参数进行持续监测,分析不同位置、不同季节的温湿度、有害气体和粉尘浓度差异和分布规律,同时每天记录鸡群产蛋率。[结果]夏季鸡舍前后最大温差2.1℃,上下温差1℃,一楼比二楼温度高0.5℃;冬季鸡舍温差较大,鸡舍中部温度最高,前端温度最低,前后最大温差3.7℃,上下最大温差4.5℃,一楼比二楼温度高1℃;与冬季相比,夏季鸡舍内通风量大、湿度大,舍内有害气体含量低,粉尘和CO含量低;位置越高粉尘含量越大,其中冬季后端粉尘大,夏季前端粉尘大;由于舍内饲养密度和自动环控的原因,冬季舍内最低平均温度不低于19.8℃。[结论]冬季19.8~23.3℃范围内,温度越低,产蛋率越高。

B亚型禽偏肺病毒对黄羽肉鸡致病性分析及其灭活疫苗免疫效果评价

为评价B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗对黄羽肉鸡的免疫保护效果,本研究将制备的灭活疫苗LN16-I株以0.5 mL·只^(-1)的剂量通过肌肉注射的方式免疫3周龄黄羽肉鸡,免疫后3周,以相同的注射方式和剂量加强免疫1次。采集1~6周内的血清,并测定ELISA抗体效价及中和抗体效价,结果显示,初次免疫后6周,免疫组血清ELISA抗体平均滴度可达4.2×10^(4),平均中和抗体效价可达7.42 log2,阳性率均为100%。加强免疫3周后,使用强毒株LN16对各组鸡进行攻毒,攻毒剂量为5000 TCID 50·只^(-1),结果显示,攻毒对照组的鸡出现流混浊或黏稠样鼻涕、甩头等临床症状,发病率为85%(11/13),而免疫组均未发病;进一步通过荧光定量PCR方法检测鼻腔拭子中的病毒拷贝数,结果显示,攻毒对照组在第3天时出现排毒高峰,病毒拷贝数为4.9×10^(6)copies·mL^(-1),而免疫组相比于攻毒对照组排毒量下降约99.43%;病理结果显示,攻毒对照组鸡的鼻甲和气管出现明显的病理损伤,而免疫组鸡均未出现病理损伤。本研究结果首次表明,B亚型禽偏肺病毒感染,可引起黄羽肉鸡明显发病,灭活疫苗LN16-I株可以对黄羽肉鸡提供良好的免疫保护效果。本研究为我国黄羽肉鸡B亚型禽偏肺病毒病的流行病学调查研究及有效防控提供了理论支持与技术指导。

非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型的双重实时荧光定量PCR检测方法建立

随着基因Ⅰ型非洲猪瘟(GenotypeⅠASFV)在我国开始流行,使我国对ASF的诊断、预防和控制更具挑战性。本研究使用中国动物疾病预防控制中心(CADC)推荐使用的B646L引物与探针,结合针对GenotypeⅠASFV EP402R基因保守特异性区域设计引物与探针,建立了一种在诊断ASF的同时可对ASFV进行GenotypeⅠASFV鉴别的快速检测方法,并对其灵敏性、特异性进行检测。结果显示,该方法具有良好的灵敏性以及特异性,可有效用于ASFV的临床诊断以及GenotypeⅠASFV的监测。

一种快速检测非洲猪瘟病毒I177L基因缺失毒株的荧光定量PCR方法

本研究旨在建立一种特异、灵敏、快速的ASFV-G-ΔI177L实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法。针对ASFV I117L基因的保守区域设计特异性引物/探针对,通过优化反应条件和反应程序,从而提高检测方法的灵敏性,并验证检测方法的重复性和特异性。对170份临床样品进行了检测,并与OIE推荐的检测方法进行对比。结果表明,基于ASFV I117L基因所设计的特异性引物/探针对,能扩增2.2×10^(1)~2.2×10^(10)copies·μL^(-1)的pMD18-I177L标准质粒,建立的标准曲线R 2可达0.9957,最低检测模板浓度为2.2×10^(1)copies·μL^(-1);该方法扩增反应采用一步法,耗时35 min,批内、批间变异系数均<1.8%;针对ASFV I177L基因特异性扩增,但对其他5种常见猪病毒核酸样品及无酶水未见阳性扩增;用该方法对170份临床样品进行检测,本方法和OIE推荐的检测方法具有良好的一致性。本研究成功建立了一种特异、灵敏、快速ASFV-G-ΔI177L检测方法,为临床非洲猪瘟病毒的监测诊断提供了良好的技术支撑。

猪场四周批次化生产方案

随着散养户的退出和规模化猪场的增加,我国养猪业已迈入规模化饲养时代。长期以来猪场实行的连续式繁殖生产模式,造成了不同繁殖状态的母猪混养,不同时间断奶的仔猪同舍混养,保育舍与生长育肥舍无法实现猪群的全进全出。不同日龄猪的混养会增加疫病交叉感染风险,猪舍不能彻底消毒,严重影响猪场内部的疫病防控效果。通过研究母猪对不同生殖激素调控的应答效应及其机制,优化母猪定时输精程序,结合同期分娩等技术,建立了母猪批次化生产工艺,制定了相应生产技术规范和生物安全水平,本文重点解说了生产效率最高的四周批次化生产方案。

鸭巴氏杆菌病的流行特点与防治措施

鸭巴氏杆菌病又称鸭霍乱,是一种急性败血性传染病,发病死亡率通常在30%~80%之间。鸭巴氏杆菌病是目前危害养鸭业的主要细菌性疾病之一,在世界各地均有发生,给养鸭业造成了巨大的经济损失。本病的病原为多杀性巴氏杆菌,为革兰氏阴性菌。

NADC34-like PRRSV荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为了建立一种特异性强、灵敏度高、重复性好的NADC34-like PRRSV[我国近年来猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)主要流行株之一]快速检测方法,针对NADC34-like PRRSV的保守基因ORF5设计并合成特异性引物(F/R)和探针(P),筛选最佳引物、探针浓度组合,建立NADC34-like PRRSV实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测方法,并对该方法进行方法学分析和临床阳性样品检测验证。结果表明:该方法反应体系中,引物(F/R)和探针(P)的最佳工作浓度分别为0.4μmol/L和0.2μmol/L;该方法荧光定量RT-PCR曲线在1.56×10^(1)~1.56×10^(10)拷贝/μL范围内呈现良好线性关系,灵敏度可达1.56×10^(1)拷贝/μL[高于常规RT-PCR(1.56×10^(3)拷贝/μL)],批内和批间重复实验变异系数均小于0.50%;采用新建立的荧光定量RT-PCR方法检测132份NADC34-like PRRSV阳性样品,均获得荧光信号曲线。实验结果说明:所建立的NADC34-like PRRSV荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于临床样品NADC34-like PRRSV检测。

猪流行性腹泻防控研究概况

猪流行性腹泻病毒(PEDV)主要的致病特点是引起仔猪急性腹泻、呕吐、脱水及死亡,PEDV的感染也可引起怀孕母猪腹泻、厌食,从而影响母猪的正常繁殖功能。自2010年以来,PEDV变异毒株的流行已对全球的生猪产业造成严重影响,而已有的防控措施已经不能应对新的流行态势。近年来,针对PEDV变异毒株流行变化以及防控措施的研究越来越多,许多新的技术及手段已经应用到本病的控制中。论文以此为基础,分析了当前猪流行性腹泻病毒的流行特点,重点讨论不同检测方法和疫苗制剂的研究进展,以及其应用于变异毒株防控中的现状及前景。

番鸭种蛋孵化前清洗用药物浓度的研究

种蛋入孵前的洗蛋工艺是番鸭巷道式孵化技术的关键环节之一,是影响番鸭孵化成绩的重要指标。研究旨在探讨番鸭孵化前洗蛋药水的适宜浓度,根据洗蛋药水浓度将不同产蛋时期种蛋分成0.12%组、0.16%组、0.20%组和0.24%组4个处理组。结果表明:番鸭产蛋前期种蛋较适宜的洗蛋药水浓度为0.16%~0.24%,4个处理组中孵化成绩最好的是0.24%组;产蛋中期种蛋较适宜的洗蛋药水浓度为0.12%~0.20%,孵化成绩最好的是0.16%组;产蛋后期种蛋较适宜的洗蛋药水浓度为0.16%~0.24%,4个处理组中孵化成绩最好的是0.24%组。由此建议:番鸭产蛋前期和产蛋后期种蛋可同期混合洗蛋,洗蛋浓度设置为0.24%;产蛋中期种蛋单独洗蛋,洗蛋浓度设置为0.16%。

三种喹诺酮类药物在鸡蛋中残留消除规律的研究

建立了一种检测三种喹诺酮类药物在鸡蛋中残留的高效液相色谱-荧光检测法。利用建立的方法对三种喹诺酮类药物在产蛋期蛋鸡用药后鸡蛋中的浓度进行了测定,并根据测定值研究了鸡蛋中药物的残留消除规律。400 kg水中分别添加不同含量的诺氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星,连续给药3 d,使用高效液相色谱法对鸡蛋中三种喹诺酮类药物残留进行分析。结果表明,停药8 d时,鸡蛋中检出的诺氟沙星和氧氟沙星的浓度均低于10μg/kg;停药12 d时,鸡蛋中检出的恩诺沙星的浓度低于10μg/kg。建议诺氟沙星和氧氟沙星在临床上蛋鸡产蛋前10 d左右停用,恩诺沙星在临床上蛋鸡产蛋前14 d左右停用。