广东省暴发性胃肠炎中诺如病毒的分子流行病学特点分析

目的研究广东省暴发性胃肠炎中诺如病毒的分子流行病学特点。方法对2003年至2004年的13起急性胃肠炎患者的粪便和肛拭子标本，采用针对诺如病毒的特异引物和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术进行检测，再经核苷酸序列测定分析病毒的基因型，同时收集患者相关流行病学资料。结果13起暴发性胃肠炎中有8起是由诺如病毒引起的，时间主要集中在每年的10月至12月，基因分析显示这些病毒都属基因Ⅱ组，但分属3个亚型，6株病毒属GⅡ-4型。结论诺如病毒是广东省暴发性非细菌性胃肠炎的重要病原体之一，具有分布广、流行时间集中在秋冬季的特点。引起暴发的病毒主要为基因Ⅱ组，在现阶段存在优势毒株。

人巨细胞病毒诱导ECV304血管内皮样细胞凋亡

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染ECV304血管内皮样细胞的致病机制。方法常规方法传代细胞和接种病毒。以PCR法和间接免疫荧光法检测病毒即刻早期基因(IE gene)及其蛋白表达;相差显微镜及电子显微镜观察病毒感染后细胞和细胞器形态变化;DNA梯度法和流式细胞术检测细胞凋亡。结果病毒感染后72 h开始出现胞体变圆、缩小、脱壁,胞质内颗粒增多,细胞边缘模糊不清的特征,可明显检测出病毒特异IE gene及其蛋白表达;电镜结果显示病毒感染96 h后,胞质内明显空泡化,细胞膜微绒毛减少,核染色质浓集、边缘化,线粒体出现溶酶体化、空泡化和自噬现象,呈早期凋亡特征;DNA梯度电泳结果显示感染细胞DNA片段化特征的条带;流式细胞仪检测发现感染4 d和6 d时,细胞调亡率分别为4.1%和45.7%。结论巨细胞病毒在体外细胞培养中可诱导ECV304血管内皮样细胞的凋亡。

广州地区儿童急性呼吸道感染患者中偏肺病毒的感染调查

目的了解广州地区14岁以下急性呼吸道患儿人类偏肺病毒（human metapneumovirus，hMPV）的感染情况，分析广州地区儿童感染hMPV的流行病学特征及临床特征，为hMPV的预防和治疗提供一些依据。方法2006年9月至2008年8月，在广州某医院的儿科门诊及住院部的急性呼吸道患儿中采集521份鼻咽拭子标本，提取总核酸，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增hMPV的核蛋白（N）基因的213个核苷酸片段，对16份强阳性的扩增产物进行测序和序列分析，同时对采集病例的流行病学资料进行统计分析。结果521份标本用RT—PCR方法检测后，共有39份标本为N基因阳性，检出率为7．49％，hMPV发病高峰期在10月和4月份，对N基因进行序列测序与分析，结果与北京株BJ1897N基因的同源性高达99％，与泰国AY550156株N基因的同源性高达97％，基因型别以B型为主。结论广州地区的儿童急性呼吸道感染中hMPV感染是原因之一，且以6岁以下的儿童感染为主，但不同性别的感染率差异无统计学意义，感染hMPV的临床症状主要表现为：高热、咳嗽、头痛、咽痛、卡他症状、肺部影像学改变等，其中大部分患者表现有高热和咳嗽，且有41．03％的hMPV患者合并感染其他呼吸道病毒。

广州地区急性呼吸道感染患者中偏肺病毒的研究

为了解广州地区急性呼吸道患者中人偏肺病毒（hMPV）的感染情况，分析广州地区感染人群的流行病学特征及hMPV感染的临床特征，为hMPV的预防和治疗提供资料。我们于2006年9月至2007年9月在广州医学院附属第二医院呼吸科门诊和儿科门诊采集急性呼吸道感染患者的鼻咽拭子标本648份，其中成人358例，儿童290例，所有病例由临床医生填写事先设计好的个案调查表，调查内容包括本次就诊的临床症状和体症：高热、咳嗽、头痛、咽痛、卡他症状、肺炎等。

东莞市2014—2017年Ⅰ型登革病毒流行情况及E基因序列分析

目的研究2014—2017年东莞市Ⅰ型登革病毒(DENV-1)流行情况,分析其可能的地域来源及基因特征。方法采用实时荧光PCR方法对2014—2017年东莞市疾病预防控制中心收到的登革热疫情样本进行核酸检测分型,阳性标本进行病毒分离及鉴定,扩增并测定部分分离株E基因序列,共得到8株DENV-1及其E基因序列,与Genebank中选取的世界各地DENV-1流行株及原型株进行参考对比,用DNASTAR软件进行核苷酸、氨基酸序列分析和同源性比较,用Mega4.0.2软件进行分子分型和系统进化树构建。结果 665份标本中DENV阳性251份,其中DENV-1阳性占90.0%。以9月、10月为发病高峰期,占86.7%;男女比例为0.92∶1,20～<70岁年龄组发病例数最多,占75.1%;DENV-1阳性本地病例以虎门、麻涌、南城、厚街和莞城五个镇街最多,占76.4%。序列比对显示,8株DENV-1的E基因序列核苷酸同源性为90.2%～99.6%,氨基酸同源性为96.4%～100.0%,与选取的近年世界各地流行株的核苷酸与氨基酸同源性分别为89.2%～100.0%和90.2%～100.0%。系统进化树分析显示,2014—2017年东莞8株DENV-1分离株与我国广州、深圳及新加坡、马来西亚等东南亚国家当年或往年DENV-1流行株同源性较高,分属基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ型,但以基因Ⅰ、Ⅴ型为主。所有8株分离株与原型株进化距离较远。结论 2014—2017年东莞市登革病毒流行以DENV-1为主,流行基因亚型主要为基因Ⅰ型和基因Ⅴ型,流行方式为广深等周边地市及新加坡、马来西亚等东南亚各国输入病例引起的本地暴发流行。

东莞市2015—2016年柯萨奇病毒A6型流行情况及特征分析

目的研究东莞市2015—2016年手足口病(HFMD)病例中柯萨奇病毒A6型(CVA6)的流行情况及基因特征。方法采用RT-PCR方法对HFMD疑似病例标本进行检测,CVA6阳性标本上送广东省疾病预防控制中心,进行病毒分离及鉴定,扩增并测定VP1基因序列。从GenBank中选取其他CVA6代表株进行参考比对,利用DNASTAR软件进行核苷酸、氨基酸序列分析和同源性比较,并用Mega4.0.2软件构建亲缘性进化树。结果在1 145份标本中检出CVA6阳性标本580份,阳性率为50.66%(580/1 145)。序列比对显示,20株CVA6分离株VP1基因之间核苷酸同源性为93.6%~100.0%,氨基酸同源性为97.7%~100.0%。东莞市CVA6分离株VP1与近年来全球各地流行株核苷酸和氨基酸的同源性分别为93.4%~98.5%和97.0%~99.7%,与CVA6原型株Gdula以及我国山东省1996年分离株核苷酸和氨基酸相似性仅为82.5%~85.8%和94.1%~96.4%。系统进化树分析显示,2015—2016年东莞地区CVA6与近年来流行于世界各地的CVA6分离株同源性较高,而与原型株进化距离较远。结论 2015—2016年东莞市HFMD病原以CVA6为主,流行株为近年来流行于全国各地的CVA6新变种。