基于响应面分析的高抗原活性猪链球菌2型疫苗培养基的研制与效果评价研究

试验旨在研制具有高抗原活性的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)疫苗培养基。研究以SS2 CVCC60615株为试验对象,通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面分析得到SS2疫苗培养基。培养基发酵验证结果显示,SS2疫苗培养基菌液最大活菌数为1.09×10^(9) CFU/mL,是TSB培养基最大活菌数的2.41倍。测定SS2不同时间点的抗原活性发现,在SS2发酵培养过程中当活菌数达到最大值后的1~3 h内细菌的抗原活性最高。小鼠感染试验表明,SS2抗原活性最高时制备的灭活疫苗与商品化灭活疫苗相比具有更高的免疫球蛋白G(IgG)抗体效价和疫苗保护率。研究表明,采用研制得到的高抗原活性SS2疫苗培养基制备的灭活疫苗具有IgG抗体效价高、免疫保护力强的优点。

贝类水产品星状病毒高效NanoPCR检测方法的建立及初步应用

人星状病毒(Human astrovirus,HAstV)是导致全球腹泻的主要病原体之一,主要存在于贝类水产品中.消费者通过加工、烹饪贝类水产品等过程感染HAstV,并伴有腹泻、呕吐等临床症状.因此,为及时发现贝类水产品中的HAstV和保障消费者食品安全,本研究将纳米材料融入到PCR检测方法中,建立一种操作简便、灵敏度高和特异性强的HAstV检测方法.针对具有保守HAstVORF2基因序列设计特异性引物,通过优化纳米金颗粒含量、引物浓度及退火温度,建立HAstV纳米PCR(Nanomaterial-assisted PCR,NanoPCR)检测方法.研究发现HAstVNanoPCR检测方法具有较高的敏感性和特异性,其最低病毒检测限为2.0×10^(0)copies/μL,灵敏度是传统PCR的1000倍,与贝类水产品中其他常见的病毒无交叉反应;HAstV NanoPCR方法检测贝类水产品HAstV检出率为7.5%,而传统PCR检出率为5.35%.研究表明建立的HAstV NanoPCR检测方法适用于筛选贝类水产品中的HAstV,后续可应用于检测水产品中HAstV流行情况,为保障消费者食品安全提供技术保障.

氨基酸介导的多糖降血糖机制

2型糖尿病是一种以高血糖为表征、以糖脂代谢紊乱为特点的代谢性系统疾病。研究发现部分氨基酸可作为糖尿病病理特征标志物,比如支链氨基酸(BCAAs)和芳香族氨基酸(AAAs),其可通过哺乳动物雷帕霉素复合物1(mTORC1)信号途径或中间有毒代谢产物的积累调控胰岛素抵抗。随着代谢组学研究的不断深入,研究人员发现多糖干预2型糖尿病动物后的差异代谢物多会富集在氨基酸代谢通路上,然而,其对于血糖和胰岛素抵抗的调节机制尚不明确。解析多糖通过调节氨基酸代谢进而改善糖尿病的机制或可发掘该疾病治疗新策略。

益生菌抗流感病毒作用及其机制研究进展

流行性感冒是一种由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。在高危人群中,严重的病毒感染可导致下呼吸道感染、多器官功能衰竭,甚至死亡。益生菌是一种能提升人体健康的功能微生物,具有防止病原微生物定植、调节宿主免疫等功能。目前已有多项研究发现某些益生菌具有防治流感病毒感染的作用,且近年来关于益生菌抗流感病毒的机制研究已有了一些探索,因此,在系统解析流感病毒致病机制的基础上,本文从病毒拮抗、免疫调节、预防继发感染和平衡肠道微生态4个角度总结了抗流感病毒益生菌的作用机制,进而探讨益生菌抗流感病毒的应用模式,以期对益生菌抗流感病毒的应用提供参考。

益生菌冷冻干燥高活性保护机制研究进展

摄取足量益生菌有助于维持肠道微生物群落的稳态,对维持人体肠道健康具有重要意义。然而,在工业化应用中,益生菌抗逆能力较弱且对储存条件要求高,导致益生菌产品对运输和活性维持条件要求较高,这些产业需求对高活力益生菌的制备工艺提出了挑战。干燥处理常应用于保持益生菌活性和稳定性,其中冷冻干燥技术应用最广泛,但冻干过程中益生菌会受到各类环境压力的刺激,引起细胞损伤甚至死亡。因此,可以显著提高益生菌存活率的冻干保护剂成为目前益生菌工业应用的研究热点。本文从益生菌常用及新发现的冻干保护剂种类及其作用机制进行了系统归纳,对菌株冻干后细胞存活率的影响因素进行全面综述,并对冻干保护剂研究方向进行了展望,旨在为高活力益生菌冻干菌粉的研制提供理论支持。

灰树花活性多糖构效关系研究进展

灰树花是一种珍贵的食药用菌,具有降血糖、抗肿瘤、免疫调节和抗病毒等多种生物活性。灰树花多糖是其主要的活性成分,多糖的生物活性与多糖的结构密切相关。本文综述了从20世纪80年代起国内外已报道的灰树花活性多糖的结构表征。部分研究认为多糖的降血糖活性可能与β-1,6-葡聚糖主链化学结构相关,而灰树花多糖结构为β-1,6主链或β-1,3主链葡聚糖时具有较好的抗肿瘤活性。然而多糖结构异常复杂,精细结构的解析困难,导致目前灰树花多糖结构表征一般止步于单糖组成、分子量、糖苷键类型、分支结构和粗略分子链构象,但二维核磁(two dimensional nuclear magnetic resonance,2D-NMR)和高分辨质谱联用等技术的发展将有助于解开灰树花多糖构效关系,并为灰树花活性多糖的开发利用提供理论依据。

克罗诺杆菌属细菌数值鉴定系统的研制与效果评价

【背景】克罗诺杆菌属(Cronobacter)细菌的分离鉴定是临床医学中精准治疗的理论基础,然而,目前的生化鉴定方法仅可将其鉴定至属水平。【目的】开发一种简便、可靠的克罗诺杆菌属生化分种鉴定方法,建立克罗诺杆菌属细菌数值鉴定系统并对其鉴定性能进行评价。【方法】将鉴定系统所需的生化反应配方浓缩整合到一组注塑件中制得鉴定条,辅以数值鉴定理论构建克罗诺杆菌属细菌数值鉴定系统,利用克罗诺杆菌属标准株及分离株对其鉴定准确度进行验证。分离株的鉴定以fusA基因序列分析方法的鉴定结果作为参考标准,与数值鉴定法的检测结果进行比较。【结果】创建了用于鉴别克罗诺杆菌属内9个种/亚种的生化反应阳性概率数据库,同时确定了数值法中的计算方法和结果评价标准,并完成了数值鉴定系统软件的开发。5株克罗诺杆菌属标准株通过细菌数值鉴定系统均得到了正确鉴定,结果评价为极好的鉴定结果;其中,DSM 18707被准确鉴定为都柏林克罗诺杆菌奶粉亚种(C.dublinensis subsp.lactaridi)。测试集的84株克罗诺杆菌属分离株的数值鉴定法与fusA基因测序法的总鉴定一致率为100%;除C.sakazakii IV型(1株)及C.dublinensis III型(1株)的数值鉴定为不可接受的鉴定结果外,其余菌株均得到了明确的鉴定。【结论】本研究开发的克罗诺杆菌属细菌数值鉴定系统操作简便、价格低廉、准确率高,可为临床诊断及相关食品安全检测提供实验依据,具有良好的应用推广前景。

基于响应面分析的高抗原活性鸭疫里默氏杆菌疫苗培养基的研制及其效果评价

【背景】鸭疫里默氏杆菌广泛存在于养殖场,引起雏鸭发生传染性浆膜炎,严重危害养鸭业的发展。【目的】提高鸭疫里默氏杆菌发酵培养水平和抗原活性,为鸭疫里默氏杆菌灭活疫苗的研制提供技术指引。【方法】利用单因素及响应面的试验设计方法,针对鸭疫里默氏杆菌进行疫苗培养基的研制,并探究不同发酵时间点该菌的抗原活性,选择抗原活性最高点时制备灭活疫苗,通过动物免疫保护试验评价疫苗免疫效果。【结果】使用研制的疫苗培养基发酵培养鸭疫里默氏杆菌,其活菌数能够达到4.68×10^(10) CFU/mL,较市面上该菌专用的培养基提高2.29倍。该菌发酵12 h后抗原活性达到最高,在此时制备的灭活疫苗诱导小鼠产生的抗体水平显著高于商品化灭活疫苗,攻毒保护率达到了100%。【结论】本研究研制的培养基具有优异的增菌效果,可作为生产鸭疫里默氏杆菌灭活疫苗抗原的发酵培养基,疫苗生产过程中可选择菌株抗原活性达到最高时收集菌体。

基于响应面法的高抗原活性禽多杀性巴氏杆菌疫苗培养基的研制与效果评价

【背景】禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)引发的禽霍乱疫情造成了巨大的危害,而现有培养基存在培养菌密度较低的问题。【目的】研制高抗原活性的禽多杀性巴氏杆菌疫苗培养基。【方法】通过单因素试验、Plackett-Burman试验和响应面分析方法对禽多杀性巴氏杆菌培养基的成分进行调整,并对不同发酵阶段的菌体进行免疫原性测定。最后使用该培养基培养细菌后制备疫苗并通过动物攻毒试验评价其保护效果。【结果】使用研制的培养基培养禽多杀性巴氏杆菌,活菌密度能够在6 h达到约1.84×1010 CFU/mL,增菌效果是对照培养基的2.6倍;免疫原性测定结果显示在生长平台期菌体的抗原活性最高;攻毒试验表明制备的疫苗能够很好地抵抗禽多杀性巴氏杆菌的侵袭。【结论】研制出了高抗原活性的禽多杀性巴氏杆菌疫苗培养基,为疫苗的生产奠定了基础。