胆道闭锁中胆固醇活化CD177^(+)中性粒细胞致胆管损伤的实验研究

目的通过实验研究胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿总胆固醇(total cholesterol,TC)对胆管损伤的影响,并探讨其免疫学机制。方法回顾性收集2011-2020年间广州市妇女儿童医疗中心收治的118例经术中胆管造影确诊的BA患儿、80例同龄婴儿肝炎综合征(infantile hepatitis syndrome,IHS)患儿以及165例无肝病学证据且无肝功能异常的同龄正常对照(normal control,NC)儿童外周血TC含量。分析TC与胆管损伤各指标及多种与BA形成相关免疫细胞之间的关联。在体外CD177^(+)中性粒细胞与胆道上皮细胞(biliary epithelial cell,BEC)共培养体系中加入胆固醇,观察其对BEC凋亡的影响,同时观察加入胆固醇刺激后CD177^(+)中性粒细胞内相关指标的变化;根据外周血TC检测数值将BA患儿分为高胆固醇BA组、正常胆固醇BA组,通过RNA测序分析,比较高胆固醇组、正常胆固醇组BA患儿CD177^(+)中性粒细胞基因表达差异。结果BA患儿外周血TC含量为4.9(4.0,6.1)mmol/L,高于NC组的3.7(3.1,4.1)mmol/L及IHS组的4.2(3.3,5.4)mmol/L,差异有统计学意义(P<0.05);BA患儿外周血TC含量[4.9(4.0,6.1)mmol/L]与胆管损伤指标γ-谷氨酰转移酶(gamma-glutamyltransferase,GGT)含量[497.0(298.5,843.0)U/L]呈正相关(r=0.401,P<0.05),同时与直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)、总胆汁酸(total bile acid,TBA)含量呈正相关(r=0.338,P<0.05;r=0.235,P<0.05);在肝脏组织胆管细胞凋亡数量比例层面,高胆固醇BA组为0.724±0.146,正常胆固醇BA组为0.232±0.141,NC组(患儿年龄相近门静脉海棉样变儿童)为0.242±0.228,高胆固醇BA组与其余两组间差异有统计学意义(P<0.05);BA患儿外周血TC含量[4.4(3.1,5.5)mmol/L]与外周血CD177^(+)中性粒细胞比例[(26.5±6.4)%]呈正相关(r=0.503,P<0.05),与外周血单核细胞[1.0(0.8,1.2)×10^(9)/L]、中性粒细胞[(3.2±1.4)×10^(9)/L]无相关性(P>0.05);BA患儿外周血TC含量[(4.7±1.6)mmol/L]与外周血T细胞数量(4952.1±1985.0)个/μL呈正相关(r=0.488,P<0.05),与外周血B细胞971.0(664.8,1636.1)个/μL无相关性(P>0.05);与正常胆固醇BA组相比,高胆固醇BA组线粒体氧化磷酸化相关基因(CYBB、CALR、MT-CYB、MT-ND5、MT-ND1)表达显著上调,差异有统计学意义(P<0.05);在胆固醇刺激下,CD177^(+)中性粒细胞中代表线粒体氧化磷酸化的指标TOMM20及DNA 8-OHdG的平均荧光强度分别为73.47±6.36、159.07±10.17,较刺激前差异有统计学意义(P<0.05),而CD177^(+)中性粒细胞胞外诱捕网指标MPO和H2B分别为60.51±4.26、157.46±9.40,较刺激前差异有统计学意义(P<0.05);同时在CD177^(+)中性粒细胞与BEC共培养体系中,加入胆固醇刺激后BEC细胞活率较刺激前差异有统计学意义(P<0.05)。结论胆道闭锁中胆固醇可上调CD177^(+)中性粒细胞线粒体氧化磷酸化水平,促进胞外诱捕网的释放,引起胆管损伤。

比较两种营养风险筛查工具在先心病病儿中的诊断效能研究

目的:比较儿科营养不良筛查工具(STAMP)与营养状况和生长风险筛查工具(STRONGkids)在先心病住院病儿营养风险筛查中的诊断效能。方法:应用STAMP、STRONGkids对广州市妇女儿童医疗中心研究期间入住心血管科符合纳排标准的611例住院病儿的营养风险状况进行筛查。结果:STAMP筛查出低、中、高度营养风险分别为18.2%(111例)、64.6%(395例)、17.2%(105例);STRONGkids筛查出低、中、高度营养风险分别为9.8%(60例)、72.3%(442例)、17.8%(109例)。以Z评分为金标准,611例先心病病儿中有49.1%(300例)存在营养不良问题,STAMP、STRONGkids两种工具的ROC曲线下面积分别为0.759、0.657。STAMP、STRONGkids的最佳截断值分别取4、3分时,其灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为53.3%、92.3%、87%、67.2%;61.7%、64.3%、62.5%、63.5%。结论:先心病住院病儿具有较高的营养不良发生率;两种筛查工具均能在一定程度上预测先心病病儿营养风险的发生,而STAMP对先心病病儿营养风险的诊断效能更为理想,STRONGkids的敏感性较高,STAMP的特异度较高。

扩大端侧吻合一期矫治208例小儿主动脉缩窄合并室间隔缺损的疗效

目的总结本中心近年来以扩大端侧吻合法一期矫治小儿主动脉缩窄合并室间隔缺损的手术疗效及经验。方法选取2010年1月—2017年10月在本院行一期手术治疗的主动脉缩窄合并室间隔缺损的患儿,共208例,其中男性137例,女性71例,中位年龄54(5~730)天,中位体质量4.0(1.8~9.9)kg。胸骨正中单一切口下,以扩大端侧吻合矫治主动脉缩窄,同期修补室间隔缺损。所有手术由同一组外科医师完成。应用SPSS 20.0统计软件进行数据录入和分析。结果术后早期死亡6例(2.9%),晚期死亡3例(1.4%);再缩窄16例(7.7%),再手术19例(9.1%)。脑钠肽在术前即存在明显升高,但术后未发生明显变化;主动脉缩窄段压差在术后明显下降,经皮血氧饱和度在术后明显上升。C反应蛋白、乳酸和肌酐水平在术后明显上升。术前合并高血压104例(53.0%),术后血压降至正常30例(28.8%),术后血压继续升高35例(33.7%)。术后吻合口压差较高是术后再缩窄的高危因素。结论胸骨正中单一切口下,扩大端侧吻合法一期矫治主动脉缩窄合并室间隔缺损,死亡率和再缩窄率低,取得良好的近中期疗效。术后吻合口压差较高是主动脉缩窄复发的高危因素。

体外循环联合深低温停循环对小儿孤立性主动脉缩窄术后早期恢复及远期预后的影响

目的评估心肺转流(CPB)联合深低温停循环(DHCA)对小儿孤立性主动脉缩窄(CoA)术后早期恢复及远期预后的影响。方法选取2010年4月至2017年9月期间在本中心行外科手术治疗的孤立性CoA患儿共26例,通过年龄和性别匹配,分为非心肺转流组(Non-CPB)和CPB+DHCA组。对两组病例的临床资料和随访情况进行总结分析。所有手术由同一组外科医师完成。应用SPSS 20.0统计软件进行数据录入和分析。结果在Non-CPB组,全部病例均采取左胸后外侧切口,进行扩大端端吻合;在CPB+DHCA组,全部病例均采取胸骨正中切口,3例进行扩大端端吻合,10例进行扩大端侧吻合。在术后早期,两组病例的主动脉缩窄段压差均出现明显下降;经皮血氧饱和度在CPB+DHCA组出现明显上升;平均动脉压在两组病例中均未发生明显变化。在术后早期,CPB+DHCA组的血中乳酸水平出现明显上升;而B型脑钠肽、C反应蛋白和肌酐水平在两组病例中均未发生明显变化。与Non-CPB组相比,CPB+DHCA组在ICU停留时间明显延长。CPB+DHCA组在住院期间有2例接受再手术。随访期间,Non-CPB组出现再缩窄5例,CPB+DHCA组出现再缩窄1例,均不需要再次手术干预。早期和晚期均无一例死亡。结论CPB联合DHCA导致小儿孤立性CoA术后早期的乳酸水平明显升高及ICU停留时间显著延长,但对术后通气时间、总住院时间、住院期间再手术、远期再缩窄及早期和晚期死亡无明显影响。CPB联合DHCA在小儿孤立性CoA纠正手术中安全有效,取得良好的外科治疗效果。

N-乙酰半胱氨酸治疗胆道闭锁小鼠脑损伤的实验研究

目的探讨胆道闭锁(biliary atresia,BA)小鼠生存晚期的脑损伤情况及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对BA小鼠脑损伤的治疗作用。方法将160只新生BALB/c小鼠按随机数字表法平均分为疾病组、空白对照组、治疗组及药物对照组,每组各40只。疾病组出生后第3天腹腔注射30μl恒河猴轮状病毒(rhesus rotavirus,RRV)诱导BA小鼠模型;治疗组出生后第3天注射等量RRV后每日腹腔注射10 mg/kg的NAC治疗至第12天;空白对照组出生后第3天予腹腔注射30μl未扩增RRV的MA104细胞培养上清;药物对照组出生后第3天起每日腹腔注射10 mg/kg的NAC至第12天。取第19天小鼠进行神经功能评分,检测血浆脑损伤标志物神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)和中枢神经特异蛋白S100β水平。评估小鼠海马锥体细胞层病理切片苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色、尼氏染色及Iba1免疫组织化学染色情况。评估小鼠肝门管区HE染色、细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)免疫组织化学染色及天狼猩红染色情况。组间样本神经功能评分、血浆脑损伤标志物水平比较采用t检验,组间样本海马锥体细胞层HE染色评分、尼氏染色评分、Iba1免疫组织化学染色评分比较采用Wilcoxon秩和检验。结果生后第19天疾病组小鼠神经功能评分中一般评分及局灶评分分别为(10.24±1.27)分、(6.84±1.05)分,与空白对照组小鼠均为0分比较,一般评分(t=-39.90,P<0.001)、局灶评分(t=-32.03,P<0.001)差异均有统计学意义。出生后第19天治疗组小鼠神经功能评分中一般评分及局灶评分分别为(4.84±0.92)分、(1.88±0.59)分,与疾病组小鼠比较,一般评分(t=16.81,P<0.001)、局灶评分(t=20.25,P<0.001)差异均有统计学意义。出生后第19天药物对照组小鼠神经功能评分一般评分及局灶评分均为0分。疾病组与空白对照组小鼠血浆NSE水平分别为(27.79±2.50)ng/ml、(18.93±2.78)ng/ml,差异有统计学意义(t=-10.63,P<0.001),治疗组血浆NSE水平为(23.08±1.96)ng/ml,与疾病组比较,差异有统计学意义(t=6.64,P<0.001)。药物对照组血浆NSE水平为(18.95±2.79)ng/ml,与空白对照组比较差异无统计学意义(t=-0.02,P=0.983)。疾病组与空白对照组血浆S100β水平分别为(285.01±27.84)pg/ml、(180.77±35.52)pg/ml,差异有统计学意义(t=-10.33,P<0.001),治疗组血浆S100β水平为(218.29±31.02)pg/ml,与疾病组比较,差异有统计学意义(t=7.16,P<0.001)。药物对照组血浆S100β水平为(188.11±46.29)pg/ml,与空白对照组比较差异无统计学意义(t=-0.57,P=0.571)。疾病组HE染色评分0、1、2分视野数量为8、17、5个,空白对照组HE染色评分均为0分,差异有统计学意义(Z=-5.74,P<0.001)。治疗组HE染色评分0、1、2分视野数量为17、13、0个,与疾病组比较,差异有统计学意义(Z=-2.77,P=0.006)。药物对照组所有视野HE染色评分均为0分。疾病组尼氏染色评分0、1、2分视野数量为6、19、5个,空白对照组尼氏染色评分均为0分,差异有统计学意义(Z=-6.14,P<0.001)。治疗组尼氏染色评分0、1、2分视野数量为22、8、0个,与疾病组比较,差异有统计学意义(Z=-4.28,P<0.001)。药物对照组所有视野尼氏染色评分均为0分。疾病组Iba1免疫组织化学染色阴性、弱阳性、阳性、强阳性视野数量分别为1、0、14、0个,空白对照组阴性、弱阳性、阳性、强阳性视野数量分别为13、1、1、0个,差异有统计学意义(Z=-4.57,P<0.001)。治疗组小鼠Iba1免疫组织化学染色阴性、弱阳性、阳性、强阳性视野数量分别为10、3、2、0个,与疾病组相比,差异有统计学意义(Z=-4.11,P<0.001)。第19天药物对照组小鼠Iba1染色阴性、弱阳性、阳性、强阳性视野数量分别为13、2、0、0个,与空白对照组相比,差异无统计学意义(Z=-0.07,P=0.944)。肝门管区HE染色见疾病组炎症细胞浸润,治疗组炎症细胞浸润减少。肝门管区CK19免疫组织化学染色可见疾病组胆管缺如,治疗组可见少量发育不全的胆管。肝门管区天狼猩红染色可见疾病组大量肝组织纤维化,治疗组肝组织纤维化减少。结论BA小鼠生存晚期存在脑损伤,早期使用NAC治疗可以减轻其脑损伤。

外科手术治疗主动脉缩窄合并复杂心脏畸形79例单中心回顾性分析

目的总结主动脉缩窄合并复杂心脏畸形的手术治疗效果。方法回顾性分析2010年1月19日—2017年9月7日于广州市妇女儿童医疗中心住院治疗的主动脉缩窄合并复杂心脏畸形79例患儿的临床资料,其中男52例、女27例,中位年龄71 d,中位体重4.3 kg。术前合并气管狭窄26例,术前气管插管7例。采取胸骨正中切口入路,以扩大端侧吻合矫治主动脉缩窄,同期处理合并心脏畸形。所有手术由同一组外科医师完成。结果中位深低温停循环时间18(13~28)min,中位主动脉阻断时间62(15~199)min,中位体外循环时间145(71~674)min;中位术后机械通气时间72(9~960)h,中位ICU滞留时间144(12~1944)h,中位总住院时间24(2~93)d;早期死亡9例,晚期死亡5例;再手术28例,再缩窄10例。主动脉缩窄段压差在术后明显下降;经皮血氧饱和度、C-反应蛋白(CRP)、乳酸和肌酐水平在术后明显上升。与非死亡组相比,死亡组的术前和术后即刻血氧饱和度均较低,而术后即刻脑钠肽(BNP)和CRP均较高。结论胸骨正中单一切口下,以扩大端侧吻合法矫治主动脉缩窄,同期处理合并心脏畸形,取得良好的近中期效果。应加强围术期管理,通过改善氧合、限制BNP和CRP水平,有望降低病死率。

心外膜永久性起搏器植入术治疗小儿严重缓慢型心律失常的疗效及随访分析

目的探讨心外膜永久性起搏器植入治疗小儿严重缓慢型心律失常的疗效和经验。方法收集2010年7月27日至2020年7月28日在广州市妇女儿童医疗中心接受永久性起搏器植入术的患儿共52例,其中男25例,女27例,年龄为338 d(143~1696 d),体重为7.3 kg(5.1~14.3 kg)。所有手术由同一组外科医师完成。应用SPSS 20.0统计软件进行数据录入和分析。结果先天性心脏病术后并发Ⅲ度房室传导阻滞占76.9%(40/52),先天性Ⅲ度房室传导阻滞占21.2%(11/52),病态窦房结综合征占1.9%(1/52)。术后随访时间中位数35.3个月(11.5~71.4个月)。术后并发症发生率为9.6%(5/52),死亡率为7.7%(4/52)。与植入起搏器即刻比较,患儿末次随访的起搏阻抗出现明显下降(P=0.019),心室夺获阈值出现明显上升(P=0.009),起搏功能良好。结论永久起搏器植入术治疗小儿严重缓慢型心律失常安全有效,远期并发症发生率和死亡率低,但应关注起搏器导线断裂和功能障碍等问题。