Reg Ⅳ在溃疡性结肠炎中的表达及其对疾病活动度的预测价值

背景再生基因Ⅳ(Regenerating gene Ⅳ,RegⅣ)是钙依赖的植物血凝素超家族成员之一,主要位于胃肠道。目前缺乏RegⅣ与溃疡性结肠炎关系的研究报告。目的探讨RegⅣ与C反应蛋白、溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)活动度之间的关系。方法收集32例UC及10例健康查体者的肠黏膜及血清标本,通过免疫组化检测RegⅣ蛋白的表达水平。结果免疫组化染色提示Reg Ⅳ在UC患者肠黏膜中的表达水平较正常人明显升高(P<0.05)。The colitis activity index(CAI)与C反应蛋白呈中度正相关(r=0.529,P<0.01)。结论RegⅣ可作为预测UC活动程度的分子标志。

Survivin启动子驱动Trail诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的了解Survivin启动子在HepG2肝癌细胞与3T3细胞中诱导Trail蛋白表达能力的差异,并评价其驱动Trail诱导肝癌细胞凋亡的能力。方法以pGL3-surp340质粒为模板,扩增Survivin340启动子,构建重组质粒pcDNA3.1/SurP/Trail。将重组质粒分别转染HepG2肝癌细胞和3T3细胞,通过Western Blot检测两种细胞中Trail蛋白表达的差异。利用流式细胞术检测HepG2肝癌细胞及3T3细胞转染重组质粒pcDNA3.1/SurP/Trail后细胞凋亡的情况。结果成功构建了重组质粒pcDNA3.1/SurP/Trail,转染HepG2和3T3两种细胞后,通过Western Blot检测,HepG2肝癌细胞Trail蛋白表达的相对灰度值为0.49±0.43,较3T3细胞Trail蛋白表达(0.15±0.37)明显增强(P<0.05)。利用流式细胞术检测,HepG2肝癌细胞转染重组质粒组的凋亡率(%)为11.59±0.74,空白质粒组为3.45±0.52,未转染组为2.67±0.34;3T3细胞重组质粒组的凋亡率(%)为3.26±0.24,空白质粒组3.16±0.15,未转染组2.83±0.27。HepG2细胞转染重组质粒组凋亡率明显高于其他对照组(P<0.05)。结论含Survivin基因启动子的重组质粒pcDNA3.1/SurP/Trail在肿瘤细胞中能增强Trail蛋白的表达,并能诱导HepG2肝癌细胞凋亡。

芥菜籽对氧化偶氮甲烷诱导小鼠结直肠癌的影响

背景与目的:结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,在我国发病率和死亡率呈不断上升趋势。文献报道芥菜籽具有抗肿瘤的活性,本研究旨在观察在氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)诱发昆明种小鼠发生结直肠癌的过程中,通过芥菜籽(mustard seed,MS)进行饮食干预能否预防肿瘤的发生。方法:选择6周龄昆明种雌性小鼠,随机分为AOM组、AOM+5%MS干预组、AOM+10%MS干预组和正常对照组。小鼠皮下注射AOM(10mg/kg体质量),每周1次,连续3周。32周时颈椎脱臼处死小鼠,分离结直肠,用预冷的0.9%NaCl溶液冲洗肠内容物。观察记录各组小鼠有无肿瘤发生及发生数目、大小和位置,计算肿瘤发生率。结果:正常对照组小鼠未发现肿瘤,AOM模型组小鼠结直肠肿瘤发生率为86.7%,5%MS干预组及10%MS干预组小鼠结直肠肿瘤发生率分别为60.0%和41.7%,与模型组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。AOM模型组小鼠荷瘤数为(2.2±1.2)个,而5%MS干预组和10%MS干预组小鼠荷瘤数分别为(1.1±1.1)个和(0.7±0.9)个,与AOM模型组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:通过芥菜籽饮食干预能够抑制AOM诱导的小鼠结直肠癌的发生发展,可进一步用于结直肠癌防治的研究。

血管紧张素(1-7)通过上调自噬水平缓解肝细胞功能障碍

目的探讨血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]调节的自噬对游离脂肪酸(FFA)诱导的肝细胞功能损害的影响。方法将人正常肝细胞L-02分为正常对照组(Control)、FFA组、FFA+Ang(1-7)10^(-9)mol/L组、FFA+Ang(1-7)10^(-7)mol/L组、FFA+Ang(1-7)10^(-5)mol/L组。加入药物刺激24h后行油红O染色检测细胞内脂滴沉积情况,DCFH-DA及DHE染色检测细胞氧化应激ROS及O^-_2水平,自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)转染观察细胞内自噬水平。结果相较Control组,FFA明显增加L-02细胞内脂质沉积、ROS、O^-_2水平,Ang(1-7)则显著降低L-02细胞内脂质、ROS、O^-_2水平,且随着浓度增大,缓解细胞内功能紊乱能力增强。Ang(1-7)可显著上调细胞内自噬小体及自噬溶酶体数目(10^(-9)mol/L Ang(1-7)组自噬溶酶体P=0.0241,自噬小体P=0.0006,10^(-7)mol/L Ang(1-7)组自噬溶酶体P=0.0075,自噬小体P<0.0001;10^(-5)mol/L Ang(1-7)组自噬溶酶体P=0.0029,自噬小体P<0.0001)。结论 Ang(1-7)可缓解FFA诱导的肝细胞内脂质沉积及氧化应激等细胞功能障碍,与Ang(1-7)上调细胞自噬水平可能相关。

PI3K p85α在大肠癌侵袭转移过程中的表达及意义

目的研究PI3K p85α在大肠癌侵袭和转移过程中的表达及意义。方法用免疫组织化学二步法检测试剂盒检测123例大肠病变组织标本中PI3K p85α的表达情况,用等级相关的秩和检验分析PI3K p85α在大肠病变组织中表达的意义及其与临床病理特征间的关系;培养已成功沉默PI3K p85α表达的大肠癌Lovo细胞(PI3K p85α/RNAi-Lovo)及Lovo对照组细胞,肿瘤细胞侵袭实验(transwell)和划痕愈合实验观察PI3K p85α对lovo细胞的侵袭和转移能力的影响,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达。结果 PI3K p85α蛋白在大肠癌癌变过程中表达阳性率呈递增趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。PI3K p85α/RNAi-Lovo细胞组侵袭和转移能力明显低于对照组;MMP-2表达量及活性显著降低。结论 PI3K p85α蛋白可能在大肠癌的侵袭和转移中起重要作用,沉默PI3K p85α基因可以显著抑制其侵袭、转移和基质金属蛋白酶的分泌及活性,因而PI3K p85α影响lovo细胞的侵袭和转移可能与调控基质金属蛋白酶分泌密切相关。