帕博利珠单抗在微卫星高度不稳定/错配修复缺陷的非结肠癌患者中的疗效:KEYNOTE-158Ⅱ期研究的结果

错配修复缺陷/微卫星高度不稳定肿瘤具有较强的免疫原性,可能对免疫检查点抑制剂治疗敏感。KEYNOTE-158Ⅱ期研究评估帕博利珠单抗在既往标准治疗后疾病进展或不耐受的晚期dMMR/MSI-H非结直肠癌肿瘤患者中的抗肿瘤活性和安全性。本研究入组233例患者(包括27个瘤种),至本次分析数据截止时中位随访时间为13.4个月,客观缓解率为34.3%(95%CI:28.3%~40.8%)。中位无进展生存期为4.1个月(95%CI:2.4~4.9个月),中位总生存期为23.5个月(95%CI:13.5个月~未达到)。治疗相关不良事件发生率为64.8%(3~5级为14.6%)。帕博利珠单抗在晚期经治MSI-H/dMMR非结直肠癌患者中具有持久的临床获益。

胃肠道疾病与菌群治疗

肠道菌群通过其代谢物、分泌物或细胞成分参与调节宿主代谢和免疫,并保护宿主抵抗病原微生物入侵。环境、营养、生活习惯改变以及抗生素滥用等原因均可导致肠道微生态结构和功能失调,进而导致多种疾病。与此同时,肠道菌群亦成为极具潜力的疾病治疗手段。本文将对胃肠道疾病(包括胃肠道感染性疾病、炎症性肠病、肠易激综合征等)与菌群的关系以及基于肠道菌群治疗该类疾病的最新研究成果进行总结,并对肠道菌群在未来疾病预防和干预中的前景作出展望。

XL413通过抑制DNA复制诱导细胞凋亡来抑制结肠癌细胞增殖

目的:探讨抑制细胞分裂周期蛋白7(cell division cycle 7,CDC7)的药物XL413对结直肠癌细胞的影响及其作用机制。方法:在多个结直肠癌细胞系中分别加入生理盐水和不同浓度的XL413处理72 h,用细胞活力检测试剂盒(cell counting Kit-8,CCK-8)检测细胞在450 nm处的吸光度值并计算细胞存活率和XL413的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;克隆形成实验检测细胞的再生能力;RNA-seq检测XL413对细胞转录组的影响;qRT-PCR法检测凋亡相关基因的mRNA表达量;Western blot检测DNA解旋微小染色体维持蛋白(minichromosome maintenance protein,MCM)复合体成员MCM2的磷酸化以及凋亡相关蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,XL413处理组结直肠癌细胞的增殖、迁移、集落形成能力均下降(P=0.0015);细胞早期和晚期凋亡比例增高(P=0.0006);在基因转录表达水平上,XL413处理组的细胞凋亡标志B细胞淋巴瘤基因(B-cell lymphoma-2,BCL2)/BCL2相关X基因(BCL2 associated X,BAX)的比值下降(P=0.0087);在蛋白水平上,XL413抑制DNA解旋相关蛋白MCM2的磷酸化,从而抑制细胞DNA复制,同时促进凋亡相关蛋白的表达增高。结论:XL413可以通过降低DNA解旋相关蛋白MCM2的磷酸化阻碍DNA的复制,诱导结直肠癌细胞凋亡。该研究为XL413未来用于结直肠癌治疗提供了一定的理论依据。

胃肠激素在睾丸生殖中的研究现状及应用展望

胃肠激素是由胃肠道中内分泌细胞分泌的一组小分子高效能生物活性物质,在化学结构上属于肽类,故又称胃肠肽,广泛分布于体内各器官。它不仅可局部调节胃肠道自身活动,还可发挥生长因子、神经递质、生育因子、类性激素等多种作用,广泛调控全身代谢活动,与肿瘤、免疫与炎症、神经系统疾病及生殖障碍性疾病的发生发展关系密切[1]。

1例新型FGA基因纯合突变导致的遗传性纤维蛋白缺陷症家系分析

纤维蛋白原(FIB)是一个由Aα链,Bβ链和γ链3对多肽链组成的,由29个链间二硫键连接而成的相对分子质量为340×10^(3)的糖蛋白。3条肽链分别由FIB α链(FGA)、FIBβ链(FGB)和FIBγ链(FGG)3个同源基因编码^([1])。遗传性FIB缺陷症(CFD)主要分为Ⅰ型和Ⅱ型两种类型,Ⅰ型为FIB数量减少,包括低纤维蛋白血症和无纤维蛋白血症;Ⅱ型则为患者血浆中FIB数量正常或减少,但活性水平不成比例的显著降低.

RANTES与肿瘤标志物联合检测在结直肠癌诊疗中的应用

目的本研究旨在探索细胞因子在结直肠癌患者与健康者之间的差异表达,及筛选出的高表达细胞因子与肿瘤标志物联合检测在结直肠癌诊疗中的作用。方法利用细胞因子微阵列分析结直肠癌患者和健康人血浆细胞因子表达谱;采用酶联免疫法(ELISA)检测筛选出的结直肠癌患者血浆中高表达细胞因子。用受试者工作特征(ROC)曲线评价癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、CA199和经过筛选获得的细胞因子:受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)在鉴别结直肠癌患者和健康者的诊断性能。所有数据使用SPSS23.0和Graph Pad Prism 8.0进行统计分析,验证CEA、CA125、CA199和RANTES在结直肠癌患者和健康者之间差异表达采用Mann-Whitney U检验。通过计算Youden指数来确定RANTES水平的最佳临界值,以鉴别结直肠癌患者。用二元Logistic回归模型结合血清/血浆生物标志物的诊断效果进行拟合。所有统计检验均为双侧检验,差异有统计学意义(P<0.05)。结果与健康者相比,结直肠癌患者血浆RANTES显著高表达,差异有统计学意义(P<0.001)。RANTES的ROC曲线下面积为0.846(95%CI:0.791~0.901);RANTES和CEA联合检测AUC为0.891(95%CI:0.854~0.929),灵敏度和特异度分别达到0.854和0.803。结论RANTES对结直肠癌有诊断价值,RANTES联合CEA检测较单独检测CEA有更高的结直肠癌诊断效能。

长链非编码RNA MALAT1调控Rac1b表达与结直肠癌侵袭和转移的关系

目的:探讨MALAT1调控Rac1b的表达与结直肠癌侵袭和转移的关系。方法:结直肠癌患者组织样本手术切除后30 min内于-80℃保存;实时荧光定量PCR检测肿瘤组织和配对正常组织中MALAT1和Rac1b mRNA的表达;RNA干扰沉默结直肠癌细胞MALAT1表达,通过Western blot检测Rac1b和上皮间质化标志物的表达,Ed U实验检测其对细胞增殖的影响;Transwell小室实验检测MALAT1低表达后对细胞迁移和侵袭的影响。结果:MALAT1在结直肠癌中低表达;干扰MALAT1表达后,Rac1b的表达升高,细胞增殖加快,且上皮间质化标志物E-cadherin和β-catenin表达升高。干扰MALAT1的表达可明显促进结直肠癌侵袭和细胞的迁移和侵袭。结论:MALAT1低表达与结直肠癌侵袭和转移密切相关,并且这一相关性是通过调控Rac1b的表达实现的。

食管裂孔疝及胃食管反流性疾病腹腔镜下规范化七步法手术操作指南(2021版)

近年来,临床医生对食管裂孔疝(hiatal hernia,HH)及胃食管反流性疾病(gastroesophageal reflux disease,GERD)的认识越来越充分[1],对于HH和GERD的手术治疗也越来越多。由于水平参差不齐,广泛开展的手术也带来了许多并发症的发生。在经过了大量临床实践,又参阅了大量(从pubmed筛选的200余篇)文献,同时复盘自己、国内外同行的数百个手术视频,分析手术原理、操作技巧,并实践如何化繁为简、使整个手术在腹腔镜直视下能做到精确到位。

土槿皮乙酸诱导脑胶质瘤细胞株U87阻滞于M期并发生凋亡

目的:通过研究土槿皮乙酸对脑胶质瘤细胞株U87增殖与凋亡的影响,探讨土槿皮乙酸对脑胶质瘤的潜在应用价值。方法:用不同浓度土槿皮乙酸处理U87细胞,并于不同时点观察细胞形态改变;采用MTS法对U87细胞进行细胞活力测定;采用流式细胞术和Western blot法检测土槿皮乙酸对细胞周期的影响;采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;利用Western blot法检测caspase通路相关蛋白(cleaved PARP、caspase-3、procaspase-9和caspase-8)的变化情况。结果:土槿皮乙酸明显抑制脑胶质瘤U87细胞的活力,能使细胞阻滞于M期,并通过caspase通路诱导细胞发生凋亡。结论:土槿皮乙酸能使脑胶质瘤细胞株U87细胞阻滞于M期,并诱导其凋亡。

MicroRNA-21靶调控NCM460细胞ROCK1基因上调occludin表达

目的:探讨微小RNA-21(micro RNA-21,miR-21)对人正常结肠上皮细胞系NCM460中紧密连接相关蛋白——闭合蛋白(occludin)表达的影响,并分析其可能的靶基因。方法:利用miR-21过表达慢病毒建立miR-21过表达NCM460细胞系,q PCR检测miR-21表达水平,Western blot检测occludin表达情况。生物信息学方法预测miR-21的靶基因,根据评分和文献检索选择相应靶基因ROCK1进行进一步研究,利用miR-21 mimic和inhibitor转染NCM460细胞,同时检测miR-21以及ROCK1的表达水平;采用双萤光素酶报告基因实验验证ROCK1是miR-21的靶基因。结果:在NCM460细胞中过表达miR-21后可上调紧密连接相关蛋白occludin的表达。生物信息学分析预测ROCK1可能为miR-21的靶基因。在NCM460细胞中过表达miR-21可下调ROCK1的m RNA和蛋白水平,抑制miR-21可上调ROCK1的m RNA和蛋白水平。萤光素酶报告基因验证ROCK1为miR-21的靶基因。结论:在NCM460细胞中,miR-21能上调肠屏障功能相关蛋白occludin的表达。ROCK1是miR-21的靶基因,miR-21可能通过靶调控ROCK1促进occludin的表达。

靶向肠道微生态治疗功能性便秘的中西医研究进展

功能性便秘(functional constipation,FC)是临床上常见的一种消化系统疾病,也可表现为其他疾病的合并症状。微生态失衡是FC的重要特征,通过改善肠道微生态可以有效治疗FC。在肠道微生态治疗方面,两者的作用方式与机制存在着差异。本文结合FC患者肠道微生态变化,对中、西医在FC中的诊断标准、肠道微生态调节机制以及治疗方法进行综述,以期为进一步的研究和临床实践提供参考以及借鉴。

胃癌组织中HIF-1α,CD68及CD206在胃癌及癌旁组织中的表达及临床意义

目的分析低氧诱导分子-1α(HIF-1α)及肿瘤相关巨噬细胞(TAM)相关抗原CD68、CD206在胃癌及癌旁组织中的表达情况。方法利用免疫组化技术检测43例胃癌和癌旁组织中HIF-1α、CD68、CD206的表达状态,计算三种蛋白表达的阳性率及阳性细胞数,揭示其与临床因素的相关性。结果HIF-1α、CD68、CD206的阳性表达率分别为58.1%、69.8%、51.2%,均高于癌旁组织(P<0.05)。胃癌、癌旁组织中每个视野下CD68+细胞数分别为(39.7±7.6)、(8.5±2.8)个;CD206+阳性细胞数分别为(32.0±9.2)、(3.4±1.8)个;HIF-1α+细胞数(22.9±5.6)、(2.1±1.2)个;组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。胃癌组织中CD206+细胞数与HIF-1α+细胞数表达呈正相关(P<0.01,R2=0.641)。三种蛋白的表达与胃癌病理分期、淋巴结转移明显相关(P<0.05)。结论胃癌组织中CD68、CD206、HIF-1α表达率及阳性细胞数明显增加,且CD206与HIF-1α表达呈正相关。胃癌缺氧区域对M2型巨噬细胞有趋化作用,促进胃癌发生发展。

利用TCGA数据库分析miR-196b在结直肠癌患者中的临床表达特征并探索miR-196b的体外抗5-FU作用

目的:研究微小RNA(miR)-196b在结直肠癌患者中的表达及其临床意义,探讨过表达miR-196b的结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性。方法:在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)公共数据库下载结直肠癌患者miRNA测序数据及其对应的临床病理资料,运用SPSS 17.0分析miR-196b在结直肠癌患者中的表达水平以及临床特征;采用瞬时转染的方法在人结直肠癌HCT116细胞中过表达miR-196b,并用MTS法分析过表达miR-196b的细胞对5-FU药物敏感性的变化。结果:miR-196b高表达与结直肠癌患者淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05),与年龄和性别等无相关性。淋巴结转移和远处转移是直肠癌患者生存的独立影响因子(P<0.05),miR-196b的表达水平与患者生存状况无关。过表达miR-196b的HCT116细胞在不同浓度的5-FU作用下,细胞存活率均明显高于对照组(P<0.05)。结论:miR-196b可能是结直肠癌患者肿瘤分期和淋巴结转移的分子标志物,并可降低结直肠癌细胞对5-FU的敏感性。

α2-巨球蛋白减轻X射线所致人骨髓间充质干细胞成骨分化障碍

目的:初步探讨α2-巨球蛋白(α2M)对X射线导致的人骨髓间充质干细胞(h BMMSCs)成骨分化障碍的作用。方法:体外培养h BMMSCs,取第4代细胞经8 Gy X射线照射后,进行成骨诱导并以0.5和1.0 g/Lα2M分别作用于照射后的h BMMSCs。成骨诱导的第7天检测碱性磷酸酶(ALP)活性,RT-q PCR法检测Runt相关转录因子2(RUNX2)的mRNA表达;成骨诱导的第14天采用Western blot检测骨甘氨酸(OGN)的蛋白表达;成骨诱导的第21天采用茜素红染色法检测钙结节的形成情况。此外,正常培养的h BMMSCs于8 Gy X射线照射后加入α2M作用24 h,提取细胞检测超氧化物歧化酶(SOD)活力,Western blot检测含锰超氧化物歧化酶(Mn SOD)的蛋白表达。结果:h BMMSCs经8 Gy X射线照射后给予0.5和1.0 g/Lα2M处理,与未加入α2M的单独照射组比较,ALP活性、RUNX2的mRNA表达、OGN和Mn SOD的蛋白表达及SOD活力均升高,钙结节形成增多。结论:α2M可明显提高放射损伤后h BMMSCs的成骨分化能力,上调SOD活力和Mn SOD的蛋白表达水平。

美沙拉嗪不同给药方式治疗溃疡性结肠炎的疗效评估

目的评价美沙拉嗪不同给药方式在治疗轻中度溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)中的疗效差别及影响因素.方法将2012-07/2015-05中山大学附属第六医院收治的轻中度UC 227例,依据给药方式分为口服、局部和联合组;比较组间短期和长期药物治疗疗效(?2检验),并对影响因素行Logistic回归分析.结果短期疗效评价时,口服组总有效率76.00%、局部组79.31%、联合组93.64%;联合组最高,三组差异具统计学意义(?2=8.662,P=0.003和?2=6.618,P=0.010);长期评价时,总有效率分为62.50%、73.08%、91.84%,虽与短期有效率相比均无统计学差异,但单一组长期完全缓解率呈降低趋势(口服28%vs 12.50%,局部34.48%vs 15.38%),联合组疗效更趋稳定(51.02%vs 50.87%).Logistic分析显示,仅给药方式是影响该药疗效的独立风险因素.结论美沙拉嗪治疗轻中度UC有效,推荐联合用药,疗效优于单一方式.

MRI在直肠癌术前分期中的准确性分析

目的分析MRI在直肠癌术前分期中的准确性。方法选择2012年12月~2014年4月于中山大学附属第六医院接受MRI检查并通过活检组织病理确诊的原发性直肠癌患者154例,通过对比其术后病理分期,分析MRI术前分期准确率。结果将T分期分为T_(3~4)期及T_(0~2)期,其准确率、灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为77.9%、93.3%、46%、78.2%和76.7%。而N分期分为N^+期和N_0期,分别是57.1%、78.2%、45.5%、44.3%和78.9%。TNM分期分为Ⅱ~Ⅲ期和0~Ⅰ期,分别是79.9%、93.1%、39.5%、82.4%和65.2%。结论MRI是一种准确的直肠癌术前分期方法,TN分期均具有较高的灵敏度,但是特异度不高,可能会导致过度分期。

低温芒硝序贯疗法预防TAPP术后血清肿发生的疗效观察

目的探讨低温芒硝序贯疗法在预防腹腔镜下经腹腔腹膜前疝修补术(TAPP)后血清肿发生的治疗效果。方法收集2019年3月至2022年3月在万安县人民医院普外科和中山大学附属第六医院胃肠、疝与腹壁外科收治的120例行TAPP患者的临床资料,利用电脑随机数字表分为试验组与对照组,每组各60例。试验组予以腹股沟区创面200 m L 4℃生理盐水冲洗+术后腹股沟区冰敷2 h+术后芒硝外敷2 d的3种联合措施,对照组仅予以TAPP术后常规处理;主要观察指标为两组患者术后血清肿发生率,次要观察指标包括手术时间、下床活动时间、住院天数、住院费用、切口疼痛、VAS评分、恶性呕吐、尿潴留及肠梗阻发生率和远期随访指标包括慢性疼痛、补片感染、疝复发等。结果试验组和对照组患者血清肿发生率分别为1.7%(1/60)、16.7%(10/60),差异有统计学意义(P<0.05),试验组1例属于Ⅰ型;对照组10例中,Ⅰ型6例、Ⅱ型2例、Ⅳ型2例;Ⅳ型血清肿予以B超引导下穿刺抽吸后逐渐缓解,Ⅰ型、Ⅱ型血清肿予以芒硝外敷处理后均好转。试验组患者术后切口疼痛、恶心呕吐、尿潴留发生率分别是5.0%、3.3%、3.3%,低于对照组的16.7%、13.3%、15.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组患者的VAS评分(3.1±0.6)分、下床活动时间(8.5±2.3)h、住院天数(3.5±0.6)d,均低于对照组的(4.8±0.8)分、(13.1±1.7)h、(4.5±1.0)d,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者手术时间、腹股沟区慢性疼痛、补片感染、肠梗阻、住院费用、疝复发等比较差异均无统计学意义。结论低温芒硝序贯疗法能够有效预防TAPP术后血清肿发生,明显减轻病人术后疼痛,降低并发症发生率、促进快速康复,不增加病人经济负担。

嘧啶合成关键酶CAD促进食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的机制探讨

目的:通过体外细胞学实验研究嘧啶核苷酸从头合成的关键酶氨基甲酰磷酸合成酶2-天冬氨酸转氨甲酰酶-二氢乳清酶(CAD)三功能酶对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用,并初步探讨其潜在机制。方法:利用生物信息学方法分析癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达数据库(GEO)中食管癌数据集的肿瘤组织与癌旁正常组织中CAD的表达高低。在食管癌细胞中敲减或过表达CAD,用Western blot验证敲减或过表达效率。利用活细胞动态成像与分析系统(IncuCyte)和集落形成实验检测细胞的生长和增殖能力,Transwell实验检测迁移和侵袭能力。通过基因集富集分析(GSEA)获得TCGA食管癌组织中富集在CAD高表达组的信号通路。利用基因表达谱交互分析(GEPIA)网站对CAD与潜在下游基因MYC的mRNA表达相关性进行分析(Pearson法),应用RT-qPCR方法检测CAD调控的下游通路基因的mRNA水平,通过Western blot检测MYC和上皮-间充质转化(EMT)通路相关蛋白的表达。在食管癌细胞中敲减CAD,同时过表达MYC,观察细胞的生长和增殖能力是否改变。结果:(1)TCGA和GEO食管癌数据集显示肿瘤组织的CAD表达水平显著高于癌旁正常组织。(2)敲减CAD表达后,食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到显著抑制。(3)过表达CAD能够促进食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。(4)基因富集分析显示,β-catenin、MYC和糖酵解通路富集在CAD高表达组。(5)Pearson关联分析显示,CAD与MYC的mRNA水平呈正相关(r=0.43,P<0.001);Western blot结果显示,敲减CAD能够降低β-catenin、MYC及EMT相关蛋白的表达水平;RT-qPCR结果显示,敲减CAD后,己糖激酶2(HK2)、血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)、磷酸甘油酸酯激酶1(PGK1)、烯醇化酶1(ENO1)、丙酮酸激酶肌肉同工酶2(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)及葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)等一系列糖酵解相关基因的表达水平都受到了抑制。(6)敲减CAD抑制食管癌细胞的增殖能力,而过表达MYC后细胞的增殖能力得到部分恢复。结论:体外细胞实验表明,CAD可能通过调控β-catenin/MYC/糖酵解及EMT信号通路而增强食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

ZZ domain和APEX2融合蛋白的制备和应用

目的基于免疫球蛋白结合结构域ZZ domain和过氧化物酶APEX2的融合表达,开发一种可以特异性结合免疫球蛋白且具有过氧化氢酶催化活性的新型免疫亲和检测试剂。方法将ZZ domain和APEX2融合表达蛋白——ZZ-APEX2在BL21(DE3)大肠杆菌进行大量表达,并利用IBA公司的strep-Tactin纯化系统进行纯化。通过点印迹和Western blotting检测ZZ-APEX2催化过氧化氢分解并启动鲁米诺发光反应的能力。通过愈创木酚比色法测定ZZ-APEX2的过氧化氢酶活性。结果ZZ-APEX2可以在大肠杆菌中可溶性表达,而且可以通过strep-Tactin系统纯化获取。ZZ-APEX2在室温保存48 h和在-20℃保存2个月均保持着稳定的过氧化氢酶活性,并可以用于Western blotting实验。通过双倒数法作图发现,与常规羊抗兔IgG-HRP和羊抗鼠IgG-HRP二抗相比,ZZ-APEX2具有更大的Kcat(s;)值。结论成功开发了一种分子量小、特异性好、容易大量生产、无需实验动物和繁琐的HRP蛋白提纯步骤的新型免疫亲和检测试剂。

腹膜转移癌诊疗决策中评分系统的研究进展

腹膜转移是肿瘤的晚期阶段,预后较差。肿瘤细胞减灭术联合腹腔热灌注化疗(CRS+HIPEC)可以显著改善患者预后。患者的预后往往和腹膜疾病的严重程度和CRS肿瘤细胞减灭的程度相关。在术前和术中有各种评分系统合理评估患者腹膜肿瘤负荷,本文对腹膜转移癌诊疗决策中评分系统展开综述。