聚集素蛋白与急性缺血性脑卒中关系的研究进展

急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)是一类以动脉粥样硬化为病理基础,具有高发病率、高病死率、高致残率的脑血管病。寻找有效的防治措施是当今社会研究的热点。聚集素蛋白(clusterin,CLU)又叫做载脂蛋白J(ApoJ),是一种由细胞分泌的,通常在应激下激活的伴侣蛋白。CLU具有多种生物学功能,其在维持蛋白质稳态、细胞存活、免疫调节中起重要作用。CLU在人体组织分布广泛,尤其在脑内含量最多。CLU与动脉粥样硬化和AIS的发生、发展密切相关。该文就CLU结构功能以及其与动脉粥样硬化和AIS的研究进展进行综述,以期为AIS提供潜在的生物标志物及治疗靶点。

miR-137对Parkin诱导的线粒体自噬的影响

目的探讨miR-137对Parkin诱导的线粒体自噬的影响。方法将miR-137 mimics和miR-137 inhibitor分别转染进He La细胞8 h后,再转染p EGEPC1-Parkin,24 h之后加羰基-氰-对-三氟甲氧基本腙(FCCP)处理4 h或者不加FCCP,利用免疫荧光和蛋白免疫印迹技术分析miR-137对线粒体自噬的影响。用实时定量PCR方法检测帕金森病患者与健康对照者血液样本中miRNAs的表达情况。结果在FCCP作用下,Parkin的表达促进细胞自噬分子LC3由LC3Ⅰ型变为LC3Ⅱ型,Parkin蛋白从胞浆转位至线粒体。而细胞先经外源过表达miR-137处理之后,Parkin引起的细胞自噬受到显著抑制(P=0.003)。miR-137在帕金森病患者血液中的表达水平显著高于健康对照组(P<0.001)。结论在FCCP作用下,miR-137抑制Parkin介导的线粒体自噬。miR-137在帕金森病患者血液样本中高表达,提示miR-137可能通过调控Parkin介导的线粒体自噬,参与帕金森病的发生。

高表达microRNA-17的内皮祖细胞外泌体对糖尿病缺血性脑卒中的治疗作用

目的探讨高表达microRNA(miR)-17的内皮祖细胞外泌体(EPC-EX)对糖尿病缺血性脑卒中的治疗作用。方法原代培养从C57BL/6小鼠(n=12)骨髓中提取的内皮祖细胞(EPC),采用装载miR-17载体的慢病毒感染EPC获得EPC^(miR-17),同时采用装载有scramble序列的对照慢病毒感染EPC获得EPC^(NC)。分离提取EPC^(NC)及EPC^(miR-17)释放的外泌体(EX),分别获得EPC-EX及EPC-EX^(miR-17)。(1)在C57BL/6小鼠(8~12周)中,连续7 d进行腹腔注射链脲佐菌素(STZ)40 mg/kg建立糖尿病模型,线栓法建立糖尿病小鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,小鼠MCAO术后2 h尾静脉注射2×10^(9)/100μl EPC-EX或者EPC-EX^(miR-17),小鼠分为正常对照组(con)、糖尿病脑卒中组(STZ+MCAO)、EPC-EX处理组(STZ+MCAO+EPC-EX)、EPC-EX^(miR-17)处理组(STZ+MCAO+EPC-EX^(miR-17))。激光多普勒血流检测仪检测小鼠脑血流灌注,通过CD31抗体染色来检测脑微血管密度,利用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死面积,Longa 5分法评估小鼠神经功能缺损。(2)建立人脑微血管内皮细胞(HBMEC)高糖(hg)+缺氧复氧(H/R)损伤模型,将EPC-EX或EPC-EX^(miR-17)与细胞模型共培养,检测细胞功能变化。利用Annexin V/PI凋亡检测试剂盒结合流式细胞仪分析HBMEC凋亡情况;血管形成试剂盒检测HBMEC血管形成能力;划痕实验检测HBMEC迁移能力;CCK8法检测HBMEC增殖能力。采用GraphPad Prism 6软件进行统计学处理,符合正态分布的计量资料以x±s表示,两两比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果在糖尿病脑卒中小鼠模型中,EPC-EX能增加糖尿病脑卒中小鼠大脑微血管密度和脑血流灌注(P均<0.01),减少梗死面积以及神经损伤评分(P均<0.01),EPC-EX^(miR-17)作用效果更强(P均<0.05)。在体外细胞实验中,EPC-EX显著改善hg及H/R损伤的HBMEC血管形成、增殖、迁移能力,抑制细胞凋亡(P均<0.01);EPC-EX^(miR-17)能够更好地改善HBMEC上述功能(P均<0.05)。结论EPC-EX^(miR-17)可能通过保护脑血管内皮细胞,改善脑血管功能,对糖尿病脑卒中发挥更好的治疗作用。