不同射流雾化器对银黄吸入溶液体外雾化特性评价的影响

目的优选适合银黄吸入溶液使用的射流雾化器,为银黄吸入溶液的临床使用提供依据。方法采用新一代药用撞击器和呼吸模拟器,以银黄吸入溶液为模型药物,通过测定其体外性能评价5种射流雾化器。结果雾化器C递送速率最快,达14.48μg/s,其次是雾化器B,为11.960μg/s;雾化器B的递送总量最高,达到3.184 mg。5种雾化器质量中位数空气动力学粒径(mass median aero-dynamic diameter,MMAD)处于3.533~5.186μm,雾化器A的MMAD和几何标准差值最小,微细粒子有效沉积率和沉积量最大;雾化器B和雾化器C的MMAD、几何标准差、微细粒子有效沉积率差异无统计学意义。结论雾化器B和雾化器C的有效微细粒子沉积较多、粒径分布较窄、递送速率和递送总量较大,适合银黄吸入溶液的临床使用。

双黄连吸入溶液UPLC指纹图谱及含量测定研究

目的建立双黄连吸入溶液UPLC指纹图谱,并同时测定新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、连翘苷7种活性成分的含量。方法采用Agilent 1290超高效液相色谱仪,以黄芩苷为参照物在210 nm波长下建立双黄连吸入溶液指纹图谱;在324 nm波长下对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸的含量进行测定,210 nm波长下对连翘苷含量进行测定。结果建立了10批双黄连吸入溶液UPLC指纹图谱,标定了17个共有指纹峰,与对照指纹图谱相似度均在0.90以上;新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、连翘苷在相应的浓度范围内线性关系良好,r>0.9995,平均加样回收率分别为97.08%、99.91%、100.9%、102.5%、93.96%、103.4%、100.7%。结论本研究将UPLC指纹图谱定性与多指标成分定量技术相结合,该方法准确、快捷、可行,可为双黄连吸入溶液的质量控制提供实验依据。

银黄吸入溶液的指纹图谱建立及酚酸类成分的含量测定

目的建立银黄吸入溶液的指纹图谱,并同时测定新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸的含量。方法以黄芩苷为参照峰,采用高效液相色谱(HPLC)法建立银黄吸入溶液的指纹图谱;以绿原酸为参照物,采用斜率校正法计算新绿原酸、隐绿原酸的相对校正因子,再根据相对校正因子计算两者的含量,并将上述一测多评(QAMS)法的检测结果与外标法进行比较。结果10批银黄吸入溶液共有18个共有峰,与对照指纹图谱的相似度均大于0.90;共指认了7个共有峰,分别为黄芩苷、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸检测进样量的线性范围分别为0.0250~1.2474μg(r=0.9997)、0.0393~1.1787μg(r=0.9999)、0.0316~1.1841μg(r=0.9999);精密度、重复性、稳定性(48 h)试验的RSD均小于1.0%;平均加样回收率分别为93.92%(RSD=1.32%,n=6)、94.46%(RSD=1.45%,n=6)、93.93%(RSD=1.57%,n=6)。新绿原酸、隐绿原酸相对于绿原酸的相对校正因子分别为1.068、1.233。QAMS法测得新绿原酸、隐绿原酸含量分别为0.3018~0.3863、0.2625~0.3625 mg/mL,外标法测得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸含量分别为0.3026~0.3872、0.2310~0.3340、0.2616~0.3613 mg/mL;两种方法含量测定结果(绿原酸除外)的偏差均不高于0.20%。结论所建HPLC指纹图谱稳定、可行,所建QAMS法准确、重复性好;HPLC指纹图谱结合QAMS法可用于银黄吸入溶液的质量控制。

基于网络药理学预测黄甲软肝颗粒抗肝纤维化作用及验证研究

目的利用网络药理学技术,分析黄甲软肝颗粒治疗肝纤维化的作用网络,以及黄甲软肝颗粒治疗肝纤维化的潜在作用机制,并在体内动物实验进行初步验证。方法采用中药系统药理学分析平台中寻找黄甲软肝颗粒中10味中药相关的化学成分和作用靶点,通过GeneCards等数据库筛选肝纤维化疾病相关的靶标;对药物与疾病靶点相映射得到黄甲软肝颗粒治疗肝纤维化的作用靶点,运用cytoscape将疾病靶点与复方活性成分靶点的交集-交集部分对应的活性成分构建“C(成分)-T(靶点)”作用网络。将交集靶点利用DAVID数据库进行GO富集分析和KEGG富集分析,以获得其潜在作用机制。最后,通过黄甲软肝颗粒防治CCl_(4)导致SD大鼠肝纤维化的体内实验进行初步验证,考察末次给药后大鼠体质量和肝脏指数,采用微板法检测SD大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,苏木精-伊红染色观察肝脏病理学变化。结果预测筛选得到黄甲软肝颗粒共有117个潜在活性成分,266个活性成分对应靶点,161个交集靶点,关键成分有槲皮素、山奈酚、丹参酮IIA、芒柄花黄素等,关键靶点有PTGS2、PTGS1、NCOA1、ACHE、HTR、RXRA、ADRB2、IL1B等。GO分析共包含960条富集结果,其中生物过程845条,分子功能63条,细胞组成52条;KEGG分析共得出68条通路,与本次研究较相关的通路主要包括TNF信号通路、Toll样受体信号通路、Rap1信号通路、胞质DNA传感途径、ErbB信号通路、VEGF信号通路等。体内动物实验研究表明,黄甲软肝颗粒能显著降低大鼠的肝脏指数和血清ALT、AST,改善肝组织病理学指标。结论黄甲软肝颗粒可通过多成分、多途径、多靶点协同发挥治疗肝纤维化的作用,本研究为黄甲软肝颗粒治疗肝纤维化疾病的物质基础、作用机制及临床应用的进一步研究奠定基础。

基于UHPLC-Q-TOF-MS技术研究黄甲软肝颗粒及其中间体物质基础

目的:系统分析黄甲软肝颗粒及其中间体的化学成分,阐明其复方新药的化学物质基础。方法:采用超高效液相色谱-飞行时间串联质谱(UHPLC-Q-TOF-MS)技术,离子源为ESI,色谱条件:Agilent Zorbax Eclipse Plus C_(18)色谱柱(2.1mm×150mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈(B),洗脱梯度:0~20min,3%~60%B;20min~25min,60%~95%B;25min~30min,95%B;30min~31min,95%~3%B;31min~35min,3%B,流速0.35mL·min^(-1),柱温35℃,进样量1μL。质谱分析采用正、负离子模式扫描,扫描范围m/z100~1700。通过与自建化学成分数据库比对(部分对照品验证)后对各离子峰进行鉴定。结果:从黄甲软肝颗粒中共鉴定出126个化学成分,黄甲软肝中间体中共鉴定出141个化学成分,包括有机酸类、酚酸类、黄酮类、三萜类、皂苷类等。结论:建立的UHPLC-TOF-MS分析方法,结合数据库匹配,可全面快速地分析黄甲软肝颗粒及中间体中的化学成分,为其组方药效物质基础及质量控制研究提供科学依据。

射流雾化器雾化压力对双黄连吸入溶液体外雾化特性的影响

目的 研究雾化器压力对双黄连吸入溶液(Shuanghuanglian inhalation solution,SHL-IS)体外雾化特性影响。方法采用呼吸模拟器和新一代微粒撞击器,以SHL-IS为模型药物,通过测定雾化器不同压力雾化后的递送剂量均一性和空气动力学分布,将压力与递送剂量信息组和压力与粒径信息组进行相关性分析和多元线性回归分析。结果 压力与质量中值空气动力学粒径(mass median aero-dynamic diameter,MMAD)具有强负相关性,压力与微细粒子分数(fine particle fraction,FPF)、递送速率、递送总量和呼出总量有强正相关性,提取出相关性显著变量,建立回归模型,用于预测压力、FPF、MMAD、递送速率和递送总量。结论 雾化器压力对SHL-IS的体外雾化特性和临床疗效均有影响,建议严格雾化器标准并规范雾化器的使用。

基于多息薄层色谱法的黄甲软肝颗粒的鉴别研究

目的:建立黄甲软肝颗粒中六味药的多息薄层鉴别方法。方法:对方中黄芪、丹参、三七、葛根、赤芍和柴胡六味药采用薄层色谱鉴别法进行定性鉴别。结果:所得到的多息薄层色谱分离度好,斑点清晰,方法稳定。结论:建立的薄层方法有效的鉴别了黄甲软肝颗粒中黄芪、丹参、三七、葛根、赤芍和柴胡,为建立中药复方制剂的快速薄层色谱鉴别方法提供了思路。

基于网络药理学方法分析银黄制剂治疗外感性疾病的作用机制

目的:基于网络药理学方法,分析银黄制剂治疗肺、呼吸道炎症等外感性疾病的作用机制。方法:从TCMSP数据库获取银黄制剂活性成分、作用靶点;通过Gencards、OMIM、TTD数据库,以咽炎、扁桃体炎、支气管炎、肺炎检索相关疾病靶点,将药物与疾病的交集靶点导入String平台进行蛋白质相互作用分析,构建PPI网络;构建由Cytoscape3.8.2软件完成的“银黄制剂-活性成分-疾病有效靶点”网络图;最后通过Metascape平台进行基因本体(GO)功能和KEGG通路分析,分析其作用机制。结果:发现银黄制剂的222个有效活性成分和209个有效炎症靶点;其核心活性成分包括槲皮素、芹菜素、熊果酸、β-谷甾醇、木犀草素、汉黄芩素等;关键靶点涉及PTGS2、PTGS1、CHRM1、DPP4、ADH1C等。GO功能和KEGG分析显示,与银黄制剂治疗肺及呼吸道炎症作用相关的生物过程(BP)条目339个,细胞组成(CC)条目100个,分子功能(MF)条目102个;KEGG相关信号通路225条(P<0.05),其中乙型肝炎、丙型肝炎、P13K/Akt信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路等与炎症密切相关。结论:本研究揭示了银黄制剂通过多活性成分、多靶点调节多通路来发挥对肺及呼吸道炎症的治疗作用,为进一步研究银黄制剂治疗肺及呼吸道炎症等外感性疾病的作用机制提供了参考依据和研究思路。

HPLC-VWD-ELSD法同时测定黄甲软肝颗粒中6个成分的含量

目的:采用高效液相色谱-紫外检测器-蒸发光散射检测器(HPLC-VWD-ELSD)法同时测定黄甲软肝颗粒中没食子酸、葛根素、芍药苷、三七皂苷R_(1)、黄芪甲苷和丹参酮Ⅱ_(A)的含量。方法:采用Waters Symmetry C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.1%醋酸水溶液(B),梯度洗脱,流速为1.0 m L·min^(-1)。没食子酸、葛根素和丹参酮Ⅱ_(A)采用VWD进行检测,检测波长为270 nm;芍药苷,三七皂苷R_(1)和黄芪甲苷采用ELSD进行检测,漂移管温度为70℃,载气流速2.0 L·min^(-1)。结果:没食子酸、葛根素、芍药苷、三七皂苷R_(1)、黄芪甲苷和丹参酮Ⅱ_(A)进样量分别在1.444-28.88、2.118-42.36、1.074-21.48、0.2180-4.360、0.1151-2.302和0.06670-1.334μg范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为93.8%、98.8%、97.5%、103.0%、100.6%和96.6%,RSD分别为1.4%、0.55%、3.3%、4.0%、3.9%和2.3%。5批黄甲软肝颗粒中上述6个成分的含量测定结果分别为2.612-3.203、9.155-10.342、7.044-9.863、0.622-0.841、1.529-1.697和0.719-0.957 mg·g^(-1)。结论:所建立的方法简便、快捷,重复性好,可用于黄甲软肝颗粒中6个成分的含量测定,为黄甲软肝颗粒全面的质量控制提供科学依据。