基于不同载体免疫原制备河豚毒素抗体的研究

目的比较牛血清白蛋白（BSA）和匙孔型血蓝蛋白（KLH）两种载体蛋白合成的河豚毒素人工抗原的免疫原性，并对其制备的抗体进行研究。方法用曼尼希法将半抗原河豚毒素（TTX）分别与大分子载体BSA和KLH偶联合成人工抗原TTX-BSA及TTX-KLH，免疫6～8周龄Balb／c雌性小鼠，制备多抗；以卵清白蛋白（OVA）为载体蛋白，同样用曼尼希法制备包被抗原TTX—OVA。TTX—KLH多抗血清同时采用TTX-OVA和TTX—BSA作包被抗原检测，抗血清经问接酶联免疫吸附法（iELISA）以及间接竞争酶联免疫吸附法icELISA）检测。结果经TTX-KLH免疫获得的多抗血清较TTX—BSA免疫获得的多抗血清特异性高。两种包被抗原的检测效价一致：均为1：64000，而以TTX—OVA为包被原的检测值稍高，与TTX进行竞争酶联免疫检测，其IC50值波动范围为10～20ng／ml。结论TTX—KLH具有更好的免疫原性。

EMA结合PCR技术有效鉴别副溶血弧菌死活细胞

将EMA（Ethidium monoazide）选择渗透性和PCR技术相结合,建立检验副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus死活细胞的EMA-PCR新方法.研究表明,25μg/mL或更高质量浓度的EMA可以抑制2.0×107CFU/mL的副溶血弧菌死细胞DNA的扩增,未经EMA处理的对应样品PCR反应呈阳性;而用相同浓度EMA处理2.0×107CFU/mL的活细胞菌悬液能扩增出目的产物.同时,对EMA处理中卤素灯的曝光时间进行优化,确定EMA处理的最佳曝光时间为5~10 min.结果证明,该方法是一种快速有效的检测死活细胞的新方法,能有效避免PCR检测假阳性结果的出现.

抗副溶血弧菌IgY的提纯及检测副溶血弧菌的间接ELISA的建立

分离纯化抗副溶血弧菌IgY,并建立一种快速检测副溶血弧菌的间接酶联免疫吸附法(indirect ELISA),分析了该方法的敏感性、特异性和重复性.将水稀释法、乙醇沉淀法和DEAE-Sepharose FF离子交换层析联用以分离纯化抗副溶血弧菌IgY,然后以纯化的IgY为一抗,辣根过氧化物酶标兔抗鸡IgY为二抗,建立检测副溶血弧菌的间接ELISA方法.结果表明:建立的间接ELISA方法,一抗的最佳工作质量浓度为15μg/mL,二抗的最佳稀释度为1∶10 000,副溶血弧菌培养液的检出限为1.0×105cfu/mL,该方法对测定的其他8种菌株没有交叉反应.建立的间接ELISA方法具有良好的灵敏度、特异性和稳定性,能够快速、准确地对副溶血弧菌进行检测.

PCR技术快速检测痢疾志贺菌的研究

目的快速、准确检测食品中的痢疾志贺菌(Shigella dysenteriae)感染。方法针对痢疾志贺菌的侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)设计引物,通过对PCR扩增体系中dNTP浓度、Mg2+浓度、引物浓度、酶用量、退火温度和循环数进行优化,建立痢疾志贺菌PCR快速检测方法,并对其特异性、敏感性进行分析。结果该方法检测的特异性好,痢疾志贺菌纯培养物和基因组DNA的灵敏度分别为1.06×102cfu/ml和106.34pg/PCR反应体系;直接检测模拟食品中的痢疾志贺菌,其检出限为3.21×104cfu/ml。结论该方法操作简单、检验周期短、特异性和灵敏度高,适用于快速、准确检测食品中致病菌的污染。