国内医学本科生物化学课程PBL教学效果的Meta分析

计算机检索中国知网(CNKI)、万方数据库(Wan Fang Data)和维普(VIP)数据库,查找关于PBL教学在我国医学本科生物化学课程应用的文献。Meta分析结果显示,与传统教学相比,PBL教学并不能提高课程考试合格率,但能提高课程考试分数。医学本科生物化学课程中PBL教学相比于LBL教学能够提高学生考试分数,但不能提高及格率。由于研究的异质性且纳入的研究样本量较小,故仍需更多的高质量样本验证并定量分析其学习效果以探索PBL具体应用。

提高医药院校生物化学实验教学质量的探讨

生物化学实验是医药院校基础课程生物化学的重要组成部分。为提高生物化学实验教学质量,从实验课前师生充分准备、教学内容的调整和更新、教学方法的改进、课程成绩综合评定等方面进行了实践探索。

新型人生长激素释放激素类似肽的生物学活性研究

目的通过生长激素释放激素肽(GHRH)改构寻找新的人生长激素释放激素类似肽(hGHRH Analog)。方法以固相合成技术合成6种新型N端和(或)C端改构的GHRH类似肽Pro-Pro-hGHRH(1-44)、ProhGHRH(1-44)、1Pro-GHRH(2-44)、Pro-Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys、Pro-hGHRH(1-44)-GlyGly-Cys和1Pro-GHRH(2-44)-Gly-Gly-Cys。用C18反相高效液相色谱法和电喷雾质谱法检验其纯度和精确分子量。通过大鼠垂体刺激实验测定这些肽的鼠生长激素和其他垂体激素的释放值。结果通过N端ProPro-或Pro-延伸,1Pro-代换,和(或)C端Gly-Gly-Cys延伸获得的新型人GHRH类似肽活性有明显结构-功能关系:Pro-Pro-延伸<Pro-延伸<1Pro-代换;与标准的hGHRH(1-40)比较,1Pro-hGHRH(2-44)-GlyGly-Cys肽达到了相似的GH释放活性;其他垂体激素释放活性显示,6种新型类似肽均具有一定的垂体激素释放特异性。结论这种GHRH肽结构改构获得具有一定生物学活性的新类似肽,为未来深入研究结构-活性关系,打下良好的基础。

生物化学研究型学习模式的实践

生物化学是医药类本科院校的基础课程,其为相关专业的研究提供了强大的理论和技术支持,是一门非常注重实验研究的学科。为了提高本科学生生物化学课程的学习质量,培养科学研究精神,使学生获得可持续发展的学习能力,结合不同学生的特点,探索和实践了多种不同的生物化学研究型学习模式。

研究式教学模式在生物化学实验教学中应用的研究

探讨研究式教学模式在生物化学教学中的应用效果。在学生实验课中,以基本实验为基础,开展学生自己设计研究课题、研究方案试点。以问卷调查的方式了解学生对研究式教学效果的评价,结果显示:90%以上的学生愿意接受或支持研究式教学模式;80%以上的学生认为,研究式教学模式有利于学习主动性、合作性、研究性、创新性的提高。因此研究式教学模式是多数学生支持和认可的一种新的模式,值得研究、试点和推广。

广东人群CYP3A4基因rs28371759(20070T>C)位点多态性调查

目的:探讨广东人群CYP3A4基因rs28371759(20070T>C)位点的分布特点,为广东患者使用CYP3A4底物药提供理论参考依据。方法:以200名广东志愿者的口腔拭子DNA为模板,PCR扩增包含rs28371759多态位点的DNA片断,用限制性内切酶MspI消化PCR产物,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染获得样品的限制性酶切图谱用于判别基因型。结果:在受检的200例样品中,检出杂合子3例,余者皆为野生型纯合子。野生型纯合子、杂合子、突变型纯合子的频率分别为0.985、0.015、0,突变等位基因20070C即CYP3A4*18A的频率为0.007 5。结论:本研究得到了广东人群CYP3A4基因rs28371759位点的多态性分布情况,为研究CYP3A4基因多态性与临床药物效应的相互关系奠定了基础。

酸刺激前后唾液淀粉酶活性、流率和pH值的性别差异

目的探讨唾液淀粉酶(sAA)活性、流率和pH值以及sAA活性与流率相关性的性别差异。方法采集105名健康志愿者酸刺激前后的唾液标本,测定其sAA活性、流率和pH值,分析sAA活性和流率的相关性,比较唾液测定指标之间的性别差异。结果柠檬酸刺激能增加sAA活性、流率和pH值,其中以流率增加最大(P<0.01);sAA活性、流率和pH值在酸刺激前后以及对刺激的反应(前后的差值)都不存在性别差异;女性在酸刺激前后sAA活性和流率之间以及sAA活性差值和流率差值之间都存在正相关(P<0.05),并且相关系数相对稳定;男性只在酸刺激后的sAA活性和流率之间表现正相关(P<0.01)。结论 sAA活性、流率和pH值在基础和应激状态下都没有性别差异,但是sAA活性和流率之间的相关性存在一定的性别差异。

奥氮平致体质量增加与HTR2C受体基因-759C/T多态性的关联研究

目的探讨奥氮平在治疗精神分裂症患者过程中出现的体质量增加与5-羟色胺2C(HTR2C)受体基因启动子区-759C/T(rs3813929)单核苷酸多态性的关系。方法选择首发精神分裂症患者181例,测定其接受奥氮平单药治疗前及治疗12周后的体质量、血糖、三酰甘油、胆固醇指标,计算体质量指数(BMI),采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)技术检测各患者HTR2C受体基因-759C/T位点的半合子型或基因型,分析BMI的变化与-759C/T的相关性。结果 181例患者经奥氮平治疗后平均体质量增加(4.33±4.15)kg或超过基础体质量的(7.1±6.3)%,体质量变化范围为0～22 kg或0%～38%,平均BMI变化值为(1.52±1.48)kg.(m2)-1。92例男患者突变型半合子(-759T)频率为13.0%,89例女患者突变型纯合子(-759T/T)频率为0%,杂合子频率(-759C/T)为29.2%。-759C/C野生型纯合子女患者和-759C半合子男患者经奥氮平治疗后体质量增加更明显。结论 HTR2C受体基因启动子-759C/T单核苷酸多态性与奥氮平治疗导致患者体质量增加相关联,携带-759T等位基因可能是限制体质量增加的保护因子。

一种从唾液中快速提取基因组DNA的方法

目的探索一种快速、有效且对人体无创伤的基因组DNA提取方法。方法比较碘化钾法和口腔拭子基因组DNA提取试剂盒法对新鲜和室温放置1周的唾液标本的基因组DNA提取和TP53、PRB-3基因PCR扩增效果。同时采集99名健康儿童和成人的唾液标本验证碘化钾法提取唾液基因组DNA的稳定性。结果两种DNA提取方法都能从新鲜唾液标本中获得高质量的基因组DNA,其中碘化钾法的得率和D260/D280分别为(1.91±0.15)μg和1.99±0.05,试剂盒法分别为(2.64±0.34)μg和1.81±0.02。对于室温放置1周的唾液标本,两种提取方法获得的DNA虽然降解明显,但是对TP53和PRB-3基因都能扩增正确大小的目的片段。碘化钾法提取的99名健康儿童和成人的唾液基因组DNA虽然个体差异明显[得率为(1.89±0.46)μg],但是DNA质量稳定可靠(D260/D280为1.96±0.10)。结论碘化钾法提取唾液基因组DNA不仅廉价、高效,而且对人体无创伤,非常适合大范围分子流行病学研究。

Preproghrelin基因Leu72Met多态性与广州地区汉族人群2型糖尿病的相关性研究

目的:探讨Preproghrelin基因Leu72Met多态性与广州地区汉族人群2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)的相关性。方法:以广州地区汉族人群中的95位非糖尿病的正常人(对照组)和102位2型糖尿病人(T2DM组)为研究对象,采用PCR扩增目的片段、限制性内切酶BseNⅠ酶切,Native-PAGE分离和银染分析,确定各组Preproghrelin基因Leu72Met多态基因型,比较分析各组间基因型、等位基因频率分布的差异。结果:对照组和T2DM组的基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡。在对照组95例样本中,CC68例、AC27例,AA0例;基因型频率分别为:0.716、0.284、0;在T2DM组102例样本中,CC71例、AC25例、AA6例,基因型频率分别为:0.696、0.245、0.059。组间基因型和等位基因频率差异无统计学意义。结论:Preproghrelin基因Leu72Met多态性与T2DM之间无显著的相关性。但在T2DM组中检测到AA基因型而对照组中未发现,提示等位基因A在T2DM发生中有某种作用,将进一步研究。

原花青素对PC12细胞氧化应激损伤保护作用的细胞周期调控机制

目的观察原花青素对过氧化氢诱导体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞氧化损伤及细胞周期阻滞的保护作用,并探讨细胞周期调控基因c-Abl和plk1在其中的作用。方法采用MTT法观察不同浓度原花青素对100μmol/L过氧化氢诱导6 h的PC12细胞增殖率的影响。采用流式细胞仪检测原花青素对诱导的PC12细胞周期分布的影响,Western blot检测不同浓度原花青素对诱导的PC12细胞c-Abl和plk1基因蛋白表达水平的影响。结果与对照组比较,过氧化氢显著降低PC12细胞增殖率(P<0.01)、显著增高PC12细胞S期分布比例(P<0.01)、显著诱导c-Abl和plk1基因蛋白水平表达增强(P<0.01)。与过氧化氢诱导组比较,原花青素剂量依赖性提高PC12细胞的增殖率(P<0.01)、缓解过氧化氢诱导的细胞周期S期阻滞(P<0.01)、降低c-Abl和plk1基因蛋白水平的表达(P<0.01)。结论原花青素对过氧化氢诱导的PC12细胞氧化损伤具有保护作用,其机制可能是通过缓解过氧化氢诱导的细胞周期S期阻滞、降低细胞周期调控相关基因c-Abl和plk1的蛋白表达水平来实现的。

医药院校应用型人才培养产学研动态教学初探

随着现代社会对应用型人才的迫切需求,产学研合作培养逐渐彰显其重要性。针对广东药学院在产学研合作培养方面存在的不足,从广东药学院产学研人才培养模式的现状和加强产学研一体化的必要性,将教学内容融入符合市场需求的研究方向,采取理论和实践相结合的动态教学模式等方面,探索了一种应用型人才培养的动态教学模式,并进一步对该教学模式的教学效果和存在的问题进行总结和反思。

类凝血酶Agacutin的质量标准的研究

为研究止血活性的Agacutin的质量标准,通过鉴别试验、人血浆和牛纤原凝结活性、HPLC、SDS-PAGE、鲎试剂和其它体内试验等方法,研究了Agacutin的酶活性,纯度,分子量,内毒素,异常毒性,过敏试验和出血毒性等质量标准指标。结果显示,HPLC法纯度平均为98%,SDS-PAGE电泳显示了异二聚体和31733±1157 Da的全分子量。1单位酶的人血浆和牛纤原凝结时间为60±20 s和188±20 s.0.25 KU的异常毒性和过敏剂量、0.2 KU/0.2 ml出血毒测试、低于10 EU/KU内毒素的热源测试、磷脂酶A、L一氨基酸氧化酶和磷酸酶活性等显示了阴性反应。根据实验结果,初步确定了Agacutin的质量指标:正相HPLC纯度≥95%,SDS-PAGE为异二聚体和全分子量31±2 kDa,1单位酶的人血浆和牛纤原凝结时间为60±20 s和188±20 s,内毒素<10 EU/KU,异常毒性和致敏剂量为0.25单位,出血毒剂量0.2单位/0.2 ml.

漆酶Lac1338的酶学特性测定及定向突变对其酶解染料影响

为了获得表达量高、热稳定性好的漆酶,通过密码子优化合成漆酶基因lac1338、连接到pET-32a(+)载体上并在Escherichia coli BL21(DE3)中表达,获得HIS-Lac1338蛋白。酶学性质测定结果显示,以ABTS为底物时,HIS-Lac1338的比活力高达22.8 U/mg,Km和Vmax分别为567μmol/L和2.8 mmol/(L·min·g);HIS-Lac1338的最适反应温度为55℃,最适pH为6.0;在55℃以下保温2 h能保留50%的酶活性,在pH 4-8范围内孵育4 h仍保留50%以上的活性;HIS-Lac1338对Cu^(2+)抗性强,Ca^(2+)、Na^+、K^+对HIS-Lac1338有促进作用,而Co^(2+)、Fe^(2+)、Hg^(2+)、Ag^+等重金属离子对HIS-Lac1338有抑制作用。易错PCR方法得到的Lac1338的突变酶Lac16与HIS-Lac1338相比,对酸性紫7、溴酚蓝、考马斯亮蓝的降解率分别由10.9%、20%和25%提高到90.5%、67.8%和85%。结果表明,HIS-Lac1338具有较好的温度及pH稳定性,而通过易错PCR技术定向突变获得的突变酶Lac16的染料降解率大大提高。

TBL对医学本科基础医学课程教学影响的Meta分析

目的：系统评价以团队为基础的学习（team-based learning，TBL）相对于以讲授为基础的学习（lecture-based learning，LBL）在国内医学本科教育基础医学课程中的应用效果。方法计算机检索中国知网、维普中文科技期刊数据库和万方医药数据库，搜索关于TBL教学在我国医学本科基础医学课程中应用效果的随机对照试验研究，其中实验组采用TBL教学，对照组采用LBL教学，课程考核以成绩分数评价。按照纳入与排除标准筛选文献，对所纳入的文献提取数据、质量评价后采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果最终纳入12篇文献的研究，研究方法学质量评级均为C。 Meta分析显示，TBL教学的课程成绩分数总体优于传统LBL教学，差异具有统计学意义[WMD=9.33，95%CI（5.67，13.00），P=0.000]。结论相比LBL教学，医学本科基础医学课程中应用TBL教学对教学效果有促进作用，但需更多设计严谨的随机对照试验来验证。

漆酶基因lac1338在大肠杆菌中的表达条件优化及其染料降解作用

在摇瓶水平上,采用单因素试验方法,对已构建好的表达漆酶蛋白HIS-Lac1338的工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338的诱导表达条件进行优化,以期提高蛋白产量,降低生产成本.研究了培养温度、诱导时间、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、铜离子(Cu2+)浓度等不同条件对HIS-Lac1338表达量和活性的影响.通过聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDSPAGE)分析确定最佳表达条件,用酶标仪测其酶活性.结果显示,温度为30℃,初始菌体浓度D600 nm为1.6,加终浓度为0.2 mmol/L的IPTG及终浓度0.5 mmol/L的Cu2+,培养16 h,融合蛋白表达量提高了约2.5倍,为450 mg/L,是已报道的最高表达量;以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为底物测纯酶的比酶活为22.8 U/mg.染料降解作用显示其对刚果红和靛红有95%以上的降解能力.研究表明,工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338产漆酶量高且大部分为可溶性蛋白,可以快速生产,具有较好的应用价值.

源于红树林土壤宏基因组文库的新型磷脂酶A_1基因的筛选、克隆表达及酶学性质

【目的】利用宏基因组学的方法从红树林土壤中筛选新型酯水解酶类。【方法】构建红树林土壤宏基因组文库,采用以三丁酸甘油酯为底物的功能筛选方法,对筛选出的阳性克隆进行系统发育树分析,实现新型磷脂酶A1基因的原核表达,研究重组酶的酶学性质。【结果】筛选到一个新的磷脂酶A1编码基因phop1413(GenBank登录号KF767097),测序表明其全长1413bp,可编码470个氨基酸残基,表达蛋白约51.7kD,表达量高达220mg/L,NCBI中BLAST比对及系统进化树分析显示该蛋白属于磷脂酶类的FAMILYⅥ家族;酶学性质分析表明,该重组酶的最适反应底物为对硝基苯酚己酸酯,比酶活为124U/mg;最适反应温度为54°C,最适pH7.8;50°C热处理1.5h剩余相对酶活为44%,表现出很好的热稳定性。【结论】通过构建宏基因组文库利用功能筛选方法获得一个新型磷脂酶A1基因;研究中获得的新型磷脂酶A1性质较好,可用于植物油酶法脱胶。

热稳定α-半乳糖苷酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及酶学性质研究

克隆前期筛得分枝犁头霉Absidia ramosa WL511的热稳定α-半乳糖苷酶cDNA基因aga(GenBank No.DQ234280),将aga基因插入表达载体pPICZαA并电转化整合到毕赤酵母P.pastoris GS115的染色体上。30℃、甲醇流加量0.5%(V/V)时,酵母发酵上清液中酶活达32U/ml。纯化后酶的比活力为137U/mg,SDS-PAGE显示单一条带,凝胶过滤和SDS-PAGE估算其分子量分别为348kDa和87kDa,该酶为四聚体结构,糖基化导致重组蛋白的分子量比原酶大6kDa。该酶等电点为5.2,最适反应温度73℃,最适pH6.8,60℃以下及pH5.5～9.0范围内活性稳定。75℃时保温2小时保留54%的酶活,85℃时酶活完全消失。以对硝基苯酚-α-D-半乳糖苷为底物,该酶Km值为0.42mmol/Lol/L;Vmax为413U/mg;kcat为64531/min。

携带cip基因的酿酒酵母对自由生活线虫Panagrellus redivivus生长繁殖的影响(英文)

Photorhabdus luminescens细菌与昆虫病原异小杆属Heterorhabditis线虫专性共生。初生型共生细菌产生两种胞内晶体蛋白CipA and CipB,为共生线虫提供营养。为探索Cip蛋白是否对自由生活的全齿复活线虫Panagrellus redivivus具有类似的营养功能,建立了Cip蛋白的重组酿酒酵母表达体系,并用于饲喂无菌的P.redivivus线虫J1幼虫。重组酿酒酵母表达的Cip蛋白能为线虫所利用,表现为营养支持作用,体现为线虫生长发育速度的加快以及繁殖能力的提高,说明Cip蛋白能为此种自由生活线虫提供营养来源。