BPI_(23)-haFGF融合蛋白的鉴定及其生物活性研究

目的研究BPI23-haFGF融合蛋白的生物学活性。方法将已构建的酵母重组表达菌株pPICZαA-BPI23-haF-GF/X-33进行甲醇诱导表达,通过亲和层析纯化和冻干浓缩后,观察融合蛋白BPI23-haFGF对细菌、NIH3T3细胞以及小鼠烫伤模型的作用。结果获得纯度约90%的融合蛋白BPI23-haFGF,BPI23-haFGF具有杀菌及促增殖的双重功能,BPI23-haFGF促增殖率与HaFGF标准品相当,当其浓度为0.40g/L时,促NIH3T3细胞增殖率最高(88.7%);在小鼠烫伤模型中,用药组比阴性对照组提前2～3d愈合。结论融合蛋白BPI23-haFGF能够改善小鼠烫伤创面的愈合,为其在临床上的应用奠定了基础。

家蝇抗菌肽及其基因的克隆进展

家蝇抗菌肽是一类由结构基因编码的小分子肽类物质,是构成其自身防御体系的重要组分,具有广谱的抗菌、抗病毒、抑肿瘤细胞等生物活性,已引起人们的广泛关注。文中主要介绍家蝇抗菌肽的产生、结构特点、生物学功能及其基因的克隆进展。

家蝇抗菌肽基因的表达模式研究

本研究曾报道过家蝇生长过程中的3个基因attacin,defensin,cecropin的转录体.通过运用实时定量PCR定量分析家蝇不同发育阶段和诱导后不同时间点的三龄幼虫mRNA水平,结果显示3个基因在三龄幼虫和成虫期转录水平较高.同时分析发现,在诱导后mRNA水平显著增加,3个抗菌肽基因在敏感菌诱导后转录水平相对诱导前分别有cecropin805倍、attacin1009倍、defensin2500倍的增强.结果提示,家蝇抗菌肽基因的转录在不同发育阶段和诱导后的不同时期是有差异的.

BPI_(23)-haFGF融合蛋白在毕赤酵母X-33中的分泌表达及活性鉴定

将BPI23-haFGF融合基因克隆到酵母表达载体pPICZαA中,构建出含BPI23-haFGF融合基因的重组质粒pPICZαA-BPI23-haFGF。通过电击将经SacⅠ酶切线性化的pPICZαA-BPI23-haFGF质粒转化到巴斯德毕赤酵母X-33菌中,并通过抗性与表型筛选、PCR鉴定获得高效的工程菌。收集表达上清进行SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明,在43KD有与预期大小相符的条带,占上清总蛋白的50%以上。亲和层析纯化后的融合蛋白BPI23-haFGF纯度约90%,体外活性实验结果,纯化产物具有杀死革兰氏阴性菌及促进NIH3T3细胞增殖的双重功能。