案例教学法在医学微生物学教学中的应用

文章从案例教学在医学微生物学教育中的设置和运用方法等方面,探讨了设置案例教学在教学过程中的优点及不足。发现在医药类院校的微生物教学中实施该教学法,能提高学生的学习兴趣,提高其思辨能力和人本精神,为医学微生物学教学改革提供借鉴。

一株新海洋细菌生物学特性及其色素性质的研究

目的研究一株产灵菌红素海洋细菌的生物学特性及其色素的性质。方法描述该菌的形态特征、培养特征、生理生化特征和拮抗性。结果该菌次级代谢产物灵菌红素,随着pH的变化色素颜色会随之变化,在pH3. 0左右稳定性最好;且在该pH值条件下,紫外线对色素的稳定性影响较小。结论色素的热稳定性高;部分金属离子对该色素影响较小;作为天然色素及药物资源具有开发和应用价值。摘 要 目的研究一株产灵菌红素海洋细菌的生物学特性及其色素的性质。方法描述该菌的形态特征、培养特征、生理生化特征和拮抗性。结果该菌次级代谢产物灵菌红素,随着pH的变化色素颜色会随之变化,在pH3. 0左右稳定性最好;且在该pH值条件下,紫外线对色素的稳定性影响较小。结论色素的热稳定性高;部分金属离子对该色素影响较小;作为天然色素及药物资源具有开发和应用价值。

rhEGF原位凝胶的生物学效应研究初探

目的探讨rhEGF原位凝胶及对大鼠烧伤创面愈合的生物学功能。方法通过对大鼠烧伤模型来对比rhEGF原位凝胶及复方凝胶的创口愈合效果，动态观察烧伤后使用原位凝胶及复方凝胶在不同时间点的创口愈合时间、羟脯氨酸（OHP）含量和Ⅰ／Ⅲ型胶原比值变化及病理组织学等指标的变化。结果动物实验表明使用rhEGF原位凝胶对大鼠烧伤创口修复作用类同于复方凝胶，而明显优于生理盐水对照组。结论鉴于原位凝胶在使用和生产上的便利性，可望在剂型上替代传统的rhEGF复方凝胶。

共刺激信号在抗肝脏肿瘤免疫中作用的研究

目的 :研究共刺激信号在抗肝脏肿瘤免疫中作用。方法 :分析经anti CD3McAb和anti CD2 8McAb协同共刺激 ,并与肝脏肿瘤细胞 (HepG2 -2 2 15细胞株 )共同孵育的人外周血淋巴细胞 (PBLs)。结果 :发现其TCRVβ基因表达呈限制性 ,初步筛选出识别肝脏肿瘤抗原的TCRVβ基因亚家族。结论 :有针对性地在体外大量扩增表达Vβ3、Vβ14的T细胞并回输给该肝脏肿瘤患者 。

丙肝患者IgM特异性激活补体类循环免疫复合物的检测及意义

目的:探讨丙肝患者体内IgM特异性激活补体类循环免疫复合物(即IgM/C 3-TC IC)的变化及其意义。方法:采用捕捉法IL ISA,对丙肝患者血清中的IgM/C 3-TC IC进行检测,并将其与患者的性别、年龄、病程及谷丙转氨酶(ALT)进行统计学分析。结果:80例丙肝患者血清中有52例检测呈阳性,IgM/C 3-TC IC的阳性率为65.0%。IgM/C 3-TC IC的阳性率与ALT相关,在ALT升高组IgM/C 3-TC IC的阳性率要显著高于ALT正常组(P<0.05);而与患者的病程、性别及年龄则均无明显相关(P>0.05)。结论:丙肝患者体内IgM/C 3-TC IC可能直接参与了对肝组织损伤的过程,其病理意义值得重视。

抗TRPC6多肽单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗TRPC6多肽单克降抗体,并对其免疫学和生物学特性进行鉴定。方法采用TRPC6多肽偶联血蓝蛋白(KLH)为抗原,免疫Balb/c小鼠,取血清效价高者脾细胞与Ag8.653骨髓瘤细胞进行融合。采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,以及测定单克隆抗体的特性、效价及其相对亲和力;采用单克隆抗体亚类检测试剂盒鉴定Ig亚型;并经有限稀释法克隆化培养获得杂交瘤细胞株;采用秋水仙素阻断法鉴定杂交瘤细胞株染色体。结果获得3株能稳定分泌抗TRPC6多肽的单克隆抗体,分别命名为A2、F11和H8;抗体Ig亚类均为IgG1型,染色体均在89±7条的范围内;相对亲和力结果 F11为6μg/ml,A2、H8为12.5μg/ml。结论抗TRPC6多肽单克隆抗体的成功制备,为TRPC6的免疫学检测方法的建立奠定基础。

辛酸-硫酸铵法纯化细胞培养上清中单克隆抗体的条件优化

常用的单克隆抗体（monoclonal antibody, mAb）纯化方法有辛酸硫酸铵沉淀法、 离子交换色谱法、 免疫亲和色谱法、 蛋白A亲和层析法等, 以此纯化小鼠IgG类或IgM类mAb。其中辛酸硫酸铵沉淀法简单易行, 无需复杂的仪器及设备, 实验中所用试剂均为普通试剂, 容易获得, 比其他纯化方法更值得推广。本文探讨辛酸-硫酸铵法纯化细胞培养上清中IgG类型的mAb优化条件, 目的在于更好的回收细胞培养上清中的mAb, 减少mAb制备过程中的大量抗体丢失, 为mAb的进一步开发利用提供实验条件。

海洋细菌Pseudomonas sp.色素的提取及稳定性的研究

对分离自广东大亚湾表层海水的一株海洋细菌(Pseudomonassp.)所产的灵菌红素,作了提取和稳定性分析,探讨了酸度、温度、紫外线、金属离子对色素稳定性的影响。结果证明,灵菌红素在pH2～pH5之间稳定性很好,在碱性环境中稳定性差;在pH=3时该色素的热稳定性好,pH>5时其热稳定性较差;紫外线随溶液的pH增大对色素的稳定性影响越大,pH=9时的影响最大;Zn2+对该色素有增色作用,Mg2+和Mn2+则有一定的破坏作用,Pb2+可以使色素产生沉淀,其它金属离子影响不大。总之,该灵菌红素各种性质比较稳定,具有作为一种天然色素资源的开发和应用价值。

人β地中海贫血β^41/42突变基因的克隆和真核表达体系的构建

目的:克隆人地中海贫血基因β41/42及调控系列LCR,构建该致病基因的体外真核表达体系,为该病基因治疗的研究提供理想模型。方法:抽提β41/42纯合子患者的DNA,PCR扩增出人β珠蛋白基因座控制区(LCR)和β41/42基因,将其串连克隆至真核稳定表达质粒pcDNA3.1-中,脂质体转染至小鼠红白血病细胞(MEL),DMSO诱导MEL细胞表达,逆转录PCR检测人β41/42基因在MEL中的表达。结果:成功构建了人β41/42突变基因的真核表达系统。结论:β41/42基因在MEL细胞中的表达情况与设计的表达完全一致,为该病的基因治疗研究提供了一个理想模型。

小鼠sST2基因真核表达及其对LPS活化RAW264.7巨噬细胞的调节作用

目的:克隆并构建含小鼠sST2和人IgGFc融合基因的真核表达质粒,初步探讨其表达产物sST2-Fc融合蛋白对LPS刺激小鼠巨噬细胞生物学活性的影响。方法:借助RT-PCR技术,从小鼠脾脏总RNA中扩增全长sST2cDNA,构建sST2与hIgGFc段融合基因的真核表达载体(psST2-Fc)。应用脂质体将重组质粒psST2-Fc转染CHO细胞,经G418筛选,获得稳定表达sST2-Fc融合蛋白的CHO细胞株。细胞培养上清经蛋白A亲和层析纯化后,采用Western blot进行鉴定,应用FACS检测sST2-Fc与RAW264.7巨噬细胞表面相应受体结合情况;ELISA法检测sST2-Fc对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞分泌TNF-α和IL-6的影响。结果:测序证实克隆和构建的小鼠sST2-FccDNA阅读框序列正确,Western blot证实sST2-Fc融合蛋白的表达,sST2-Fc抑制LPS诱导巨噬细胞分泌的炎性细胞因子TNF-α和IL-6。结论:成功构建sST2-Fc融合基因并获得稳定表达,sST2-Fc通过与其特异性受体结合可抑制巨噬细胞介导的炎性反应。

抗TRPC6多肽单克隆抗体的制备及其识别抗原表位分析

目的:制备抗TRPC6多肽单克降抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法:采用TRPC6多肽偶联血蓝蛋白(KLH)为抗原,免疫小鼠后经细胞融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞;单克隆抗体亚类检测试剂盒鉴定Ig亚型;间接ELISA法鉴定该单克隆抗体的特性、效价及其相对亲和力;采用生物信息学进行抗原表位预测,并通过ELISA单抗相加试验分析单抗识别抗原位点的差异性。结果:获得3株能稳定分泌抗TRPC6多肽的单抗杂交瘤细胞株,分别命名为A2、F11和H8;抗体Ig亚类均为IgG1型;染色体鉴定符合杂交瘤细胞的特性;3株单抗相对亲和力比较F11较强,A2和H8接近;抗体识别位点分析结果表明A2与H8、A2与F11的相加指数分别大于50%,可能识别的是不同位点;而F11与H8的相加指数小于50%,可能识别的是同一位点。结论:抗TRPC6多肽单克隆抗体的成功制备及其识别抗原表位分析,为TRPC6蛋白的相关研究提供物质基础。

荔枝核抗肿瘤及其作用机制研究进展

荔枝核属于南方中药材之一,其生物活性成分和药理研究是目前的热点。近年来多数研究发现荔枝核水提物及其分离物具有抗肿瘤作用,并对其作用机制做了初步探究。本文从荔枝核抗肿瘤免疫、促肿瘤细胞凋亡、影响端粒酶活性、调节激素受体水平及调控生长因子和受体表达5个方面对其抗肿瘤机制进行综述,为将来荔枝核的进一步开发利用提供新途径。

瞬时受体电位阳离子通道蛋白6合成肽的设计与合成

目的预测瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)的抗原表位特性,筛选合适的TRPC6氨基酸序列合成多肽,用于制备抗TRPC6合成肽单克隆抗体。方法根据TRPC6氨基酸序列,采用IEDB分析及蛋白质软件(Lasergene710WinInstall)分析,预测TRPC6表面性、抗原性、亲水性及可能的二级结构性质,以此筛选合成多肽序列。结果确定合成多肽为TRPC6的胞外段565-579氨基酸序列,其表露性预测值1.000;柔韧性预测值1.008;β-转角预测值1.022;抗原性预测1.034;亲水性预测2.043。结论所确定的TRPC6多肽序列表位预测符合要求,为TRPC6合成肽制备抗单克隆抗体提供了一条有效的途径。

注射用尼莫地平脂肪乳的制备及质量研究

目的制备尼莫地平脂肪乳,并对其质量进行研究。方法通过二步乳匀法制备尼莫地平脂肪乳,并对其pH值、粒径分布、Zeta电位、酸值、过氧化值和药物质量浓度进行测定。结果所制备的乳剂外观呈乳白色,pH值为6.5-7.0,平均粒径约为180 nm,Zeta电位约为-45 mV,酸值为3.87 mmol/L,过氧化值符合规定,药物质量浓度约为0.8 mg/mL。结论自制尼莫地平脂肪乳的理化性质符合国家相关质量标准检查项目的要求。

地木耳蛋白质提取工艺及其稳定性的研究

对地木耳蛋白质的提取工艺及稳定性进行了研究,结果证明地木耳蛋白质可以采用水为溶剂的方法提取,提取最佳条件为pH=9,浓度为3%(w/w),温度为40℃～50℃。提取时间控制在1.5h～2h即可达到较好的收率,蛋白质的收率可达75%。随着pH值的下降,地木耳蛋白质的溶解度也随之下降,pH<6时蛋白质沉淀明显。地木耳蛋白质的热稳定性较好,加热温度、加热时间均对地木耳蛋白质的稳定性有一定的影响。地木耳蛋白质提取物具有较高的营养价值,可更方便地应用于食品加工业,应用前景广阔。

枸杞多糖对地塞米松诱导的小鼠脾脏细胞凋亡的影响

目的探讨枸杞多糖(LBP)对地塞米松(DEX)诱导的小鼠脾脏细胞凋亡的影响。方法以水提取-乙醇沉淀法制备LBP,分别给予实验小鼠每天口服LBP 25、50、100 mg,10 d后体外实验取小鼠脾脏细胞与10-5、10-6、10-7mol/L的DEX共同孵育,6 h后检测细胞凋亡率;体内实验给予小鼠腹腔注射DEX(25 mg/kg),10 h后取脾脏细胞直接检测凋亡率。结果实验动物预先口服LPB 10 d后,可使DEX诱导的小鼠脾脏细胞凋亡率显著降低,并呈现量效关系。结论LPB的免疫调节和促进作用与其对免疫细胞的保护、降低免疫细胞凋亡有关。

当归注射液对氢化可的松诱导的大鼠脾脏细胞凋亡的影响

目的：观察当归注射液对氢化可的松诱导的大鼠脾脏细胞凋亡的影响。方法：以氢化可的松诱导大鼠脾脏细胞凋亡为模型，采用流式细胞仪吖啶橙（ＡＯ） 染色法检测凋亡细胞率。结果：１０７ ｍｏｌＬ 氢化可的松作用大鼠脾脏细胞６ ｈ ，ＤＮＡ 片段率显著增高，达２７－４ ％ ，与对照组（１９－４ ％ ） 相比有极显著意义（ Ｐ＜ ０－０１ ，ｎ ＝ ６） ，加入５ ％ 当归注射液后，凋亡率降至２１－７ ％ ，与对照组无显著差异（ Ｐ＞ ０－０５） 。结论：当归注射液可抑制氢化可的松诱导的大鼠脾脏细胞凋亡。

检测瞬时受体电位通道6的ELISA双抗体夹心法的建立

目的建立ELISA双抗夹心法以用于TRPC6蛋白的测定。方法采用mAb相加法和配对实验,选择最佳配对组合;并通过cELISA法测定mAb阻断率,以选亲和力较高的mAb进行HRP标记,最终建立ELISA双抗体夹心法以用于大鼠和小鼠脑组织TRPC6蛋白的测定。结果 mAb-A2与mAb-F11的AI>50%,配对较佳;mAb-F11亲和力较强,IC50为0.6μg/ml;HRP标记mAbF11的最低工作浓度为1∶1 600;建立ELISA双抗夹心法可检测到大鼠和小鼠脑组织TRPC6蛋白分别为(1.42±0.06)μg/ml和(0.88±0.04)μg/ml。检测线性范围0.625～10μg/ml,R2=0.992,组间变异系数小于10%。结论所建立的ELISA双抗夹心法灵敏高,特异性强,重复性好,可用于脑组织中TRPC6蛋白的测定。

鼠抗人血管抑素单克隆抗体的制备和鉴定

目的 :制备鼠抗人血管抑素 (angiostatin)的单克隆抗体 ,为进一步研究血管抑素的抗肿瘤作用和临床应用打下基础。方法 :利用杂交瘤技术以血管抑素免疫BALB/C小鼠制备 3株能够稳定分泌抗血管抑素抗体的杂交瘤 ,并对上清进行ELISA、双向免疫扩散等鉴定。结果 :该抗体的类别为IgG1,并能特异性识别血管抑素 ,与细胞因子rhIL - 2、rhTNF -α、rhIFN -α及血清蛋白无交叉反应。结论 :经初步鉴定获得

调节性T细胞研究进展

调节性T细胞(regulatory T cell,Treg细胞)具有免疫抑制作用,在乙肝慢性化的形成中具有重要意义。Treg细胞能够抑制CD4+和CD8+T细胞的活化和增殖,其数量和功能的改变可能与HBV的持续感染相关。